血塞泰對缺血性腦卒中大鼠STIM1、Orai1蛋白表達的影響

鄭鈺 張逸凡 王子焱 劉承鑫 任欣 聶子星 郭志華 申思

本文引用： 鄭? 鈺， 張逸凡， 王子焱， 劉承鑫， 任? 欣， 聶子星， 郭志華， 申? 思. 血塞泰對缺血性腦卒中大鼠STIM1、Orai1蛋白表達的影響[J]. 湖南中醫藥大學學報， 2024， 44（4）： 557-564.

〔摘要〕 目的 研究血塞泰對缺血性腦卒中（ischemic stroke， IS）大鼠基質相互作用分子1（stromal interaction molecule 1， STIM1）及鈣釋放激活鈣通道蛋白1（calcium release-activated calcium channel protein 1， Orai1）的影響。方法 選取60只SPF級雄性SD大鼠，隨機分為假手術組10只、造模組50只，采用線栓法制備大腦中動脈栓塞（medial cerebral artery occlusion， MCAO）模型。采用隨機數字表法將造模成功的41只大鼠分為模型組、血塞泰低劑量組（12.6 g/kg）、血塞泰中劑量組（25.2 g/kg）、血塞泰高劑量組（50.4 g/kg）和阿司匹林腸溶片組（18 mg/kg），其中血塞泰低劑量組9只，其余每組各8只;假手術組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。每組連續干預7 d。采用改良神經功能損傷評分（modified Neurological Severity Score， mNSS）評估各組大鼠神經功能損傷情況，TTC染色法檢測大鼠腦組織的梗死面積，ELISA法測定大鼠血清中的白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）含量，RT-PCR檢測腦組織中STIM1、Orai1 mRNA的表達，免疫共沉淀檢測腦組織STIM1、Orai1的蛋白相對表達水平。結果 與假手術組相比，模型組大鼠mNSS評分增加（P<0.01），腦梗死率增加（P<0.01），血清IL-6、TNF-α含量增加（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平和蛋白相對表達水平升高（P<0.01）。與模型組相比，血塞泰各劑量組和阿司匹林腸溶片組大鼠mNSS評分下降（P<0.05），血清IL-6、TNF-α含量下降（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平下降（P<0.01）;血塞泰中、高劑量組和阿司匹林腸溶片組大鼠腦梗死率下降（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1的蛋白相對表達水平降低（P<0.05，P<0.01）。與阿司匹林腸溶片組相比，血塞泰低劑量組腦梗死率增加（P<0.01），血清IL-6、TNF-α含量增加（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平增加（P<0.05）;血塞泰中劑量組血清IL-6、TNF-α含量明顯增加（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平下降（P<0.05，P<0.01）;血塞泰高劑量組腦梗死率下降（P<0.01），血清IL-6、TNF-α含量明顯下降（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平明顯下降（P<0.01）。與血塞泰低、中劑量組相比，血塞泰高劑量組mNSS評分下降（P<0.05，P<0.01），腦梗死率下降（P<0.01），血清IL-6、TNF-α含量下降（P<0.01），腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平下降（P<0.01）。結論 血塞泰能夠抑制STIM1、Orai1的表達及結合，減輕炎癥反應，改善MCAO大鼠神經功能缺損與降低神經元損傷，從而發揮抗IS的作用。

〔關鍵詞〕 缺血性腦卒中;血塞泰;基質相互作用分子1;鈣釋放激活鈣通道蛋白1;炎癥

〔中圖分類號〕R278? ? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.04.005

Effects of Xuesaitai on protein expressions of STIM1 and Orai1 in ischemic stroke rats

ZHENG Yu1，2， ZHANG Yifan1，2， WANG Ziyan1，2， LIU Chengxin1，2， REN Xin1，3， NIE Zixing1，2，?GUO Zhihua1，2，3*， SHEN Si1，3*

1. The First Clinical School of Chinese Medicine， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China;

2. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 3. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Abstract〕 Objective To study the effects of Xuesaitai on expressions of stromal interaction molecule 1 （STIM1） and calcium release-activated calcium channel protein 1 （Orai1） in ischemic stroke （IS） rats. Methods A total of 60 SPF-grade male SD rats were randomized into sham-operated group （n=10） and model group （n=50）. A middle cerebral artery occlusion （MCAO） model was prepared by thread embolism. A total of 41 successfully modeled rats were randomly subdivided into model group， low-， medium-， and high-dose （12.6 g/kg， 25.2 g/kg， 50.4 g/kg） Xuesaitai groups， and enteric-coated aspirin tablets group （18 mg/kg）， with nine rats in low-dose Xuesaitai group and eight rats in each of the other groups. The sham-operated and model groups were given an equal volume of normal saline by gavage for continuous seven days. The modified Neurological Severity Score （mNSS） was used to assess the neurological damage in rats from each group， TTC staining was used to determine the infarct area of rat brain tissue， ELISA was used to measure the levels of interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in rat serum， RT-PCR was used to check the mRNA expressions of STIM1 and Orai1 in brain tissue， and immunoprecipitation method was used to determine the relative protein expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue. Results Compared with the sham-operated group， the model group showed increased mNSS scores （P<0.01）， enlarged infarct area （P<0.01）， elevated serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.01）， and higher mRNA and relative protein expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue （P<0.01）. Compared with the model group， the rats in each dose group of Xuesaitai as well as enteric-coated aspirin tablets group showed decreased mNSS scores （P<0.05）， reduced serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.01）， and decreased mRNA expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue （P<0.01）. Additionally， the rats in the medium- and high-dose Xuesaitai groups， and enteric-coated aspirin tablets group exhibited decreased infarct area （P<0.01） and reduced relative protein expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue （P<0.05， P<0.01）. The high-dose Xuesaitai group exhibited lower cerebral infarct rate （P<0.01）， significantly reduced serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.01）， and significantly decreased mRNA expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue （P<0.01）. Compared with the low- and medium-dose Xuesaitai groups， the high-dose Xuesaitai group exhibited reduced mNSS scores （P<0.05， P<0.01）， lower cerebral infarct rate （P<0.01）， reduced serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.01）， and decreased mRNA expression levels of STIM1 and Orai1 in the brain tissue （P<0.01）. Conclusion Xuesaitai can inhibit the expression and binding of STIM1 and Orai1， alleviate the inflammatory response， relieve neurological deficits， and reduce neuronal damage in MCAO rats， thus exerting an anti-IS effect.

〔Keywords〕 ischemic stroke; Xuesaitai; stromal interaction molecule 1; calcium release-activated calcium channel protein 1; inflammation

缺血性腦卒中（ischemic stroke， IS）是指由于腦血管阻塞導致腦部血液供應不足而引起的腦功能障礙的疾病，是腦血管疾病中最常見的嚴重表現，也是導致殘疾和死亡的主要原因之一[1-2]。恢復閉塞動脈血流是挽救IS患者受損組織的首要前提，其次是抗血小板、抗凝血、保護神經、改善血流等輔助治療[3]。血小板活化在IS的發生和發展過程中起著重要作用，并在IS后帶來多種危害，包括血栓形成、再灌注損傷和炎癥反應[4-5]。實現血小板活化的主要途徑包括細胞內儲存的Ca2+釋放和細胞外Ca2+進入，這些過程會導致細胞內Ca2+濃度升高，從而觸發血小板活化[6-7]。鈣庫操作性鈣離子通道（store-operated calciumentry， SOCE）是調節細胞內鈣離子平衡的關鍵機制。基質相互作用分子1（stromal interaction molecule 1， STIM1）和鈣釋放激活鈣通道蛋白1（calcium release-activated calcium channel protein 1， Orai1）是SOCE的核心組成部分，它們通過相互作用共同調節儲存鈣通道的開放，以確保細胞內Ca2+的平衡[8]。研究表明，STIM1/Orai1是激動劑誘發血小板Ca2+內流和病理性血栓形成的關鍵途徑[9]。小鼠血小板中STIM1或Orai1的缺乏會導致SOCE缺乏，并降低激動劑刺激后細胞質內Ca2+濃度，抑制血栓形成[10]。

此外，IS后腦組織損傷會引發炎癥反應，炎癥細胞通過浸潤受損腦組織，釋放炎癥介質，破壞血腦屏障，導致顱內壓增高和腦死亡[11]。血小板活化和炎癥反應在IS后相互影響。血小板活化可以促進白細胞介素-1（interleukin-1， IL-1）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）等炎癥介質釋放，導致炎癥反應，而炎癥反應則可以進一步激活血小板和加劇腦損傷。

中醫在防治IS方面有著悠久的歷史。中藥治療IS具有多個靶點、多種途徑和協同作用的優勢，較傳統抗血小板藥物出血風險小。血塞泰是郭志華教授的經驗方，主要用于治療IS。前期的臨床研究結果顯示，血塞泰在IS患者的治療中表現出顯著的臨床療效，可明顯改善患者的臨床癥狀、提高其生活質量[12-13]。然而，目前尚不清楚血塞泰在IS治療中的細胞分子生物學作用機制。本研究利用大腦中動脈栓塞（medial cerebral artery occlusion， MCAO）大鼠模型，以STIM1、Orai1的表達為切入點，探究血塞泰的潛在作用機制，為血塞泰的臨床應用提供新的研究證據。

1 材料和方法

1.1? 實驗動物

60只SPF級雄性SD大鼠，6～8周齡，體質量280～300 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，實驗單位使用許可證編號：SYXK（湘）2020-0010，動物合格證號：SCXK（湘）2019-0004。將大鼠置于不銹鋼頂格柵聚丙烯籠中飼養，標準條件下飼養，溫度保持在23～26 ℃，濕度為50%～70%，通風良好，模擬12 h晝夜交替，標準飼料喂養[飼料種類：普通大小鼠維持飼料，來源：湖南嘉泰實驗動物有限公司，合格證號：SCXK（湘）2020-0006]，自由進食及飲水。本實驗由湖南中醫藥大學第一附屬醫院實驗動物倫理委員會審查并批準，倫理批準號：ZYFY20210813-15。

1.2? 實驗藥物

阿司匹林腸溶片（拜耳醫藥保健有限公司，規格：100 mg，國藥準字：HJ20160685）。鉤藤10 g、石菖蒲10 g（湖南仁上藥業股份有限公司，批號：2023012401、2023020601）;紅景天10 g、杜仲15 g（湖南衡岳中藥飲片有限公司，批號：23021901、23040901）;僵蠶15 g、丹參10 g、天麻15 g、葛根15 g、白術10 g（湖南中醫藥大學第一附屬醫院，批號：NG23022703、HH23031601、SL23033103、HQ23020601、NG230413?01）;法半夏10 g（四川新荷花中藥飲片股份有限公司，批號：D2302017）;川芎10 g（安徽亳藥千草國藥股份有限公司，批號：202302072）;炙甘草10 g（長沙新林制藥有限公司，批號：230101）。所有藥材等比例混合，按10倍水量煎藥后過濾，再加入8倍水量煎，合并兩次煎出的藥液，放入4 ℃冰箱儲存備用。

1.3? 主要試劑

（0.38±0.02） mm線栓（北京西濃科技有限公司，批號：2838-A4）;RNA提取液、RIPA裂解液、PVDF膜、ECL試劑盒、吐溫-20、TBS緩沖液、抗體孵育盒、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：G3013、G2002、WGPVDF45、G2014-50ML、GC204002-100ml、G0001-2L、G9055-4、G2003-50T）;IL-6 ELISA檢測試劑盒、TNF-α ELISA檢測試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司，批號：J3066-A、J3056-A）;ORAI1抗體（武漢三鷹生物技術有限公司，批號：14442-1-ap）;辣根過氧化物酶-山羊抗小鼠、辣根過氧化物酶-山羊抗兔、ACTIN抗體（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：GB23301、GB23303、GB11001）;STIM1抗體（英國Abcam PLC公司，批號：ab57834）。

1.4? 主要儀器

LEICA 819型徠卡刀片（上海徠卡儀器有限公司）;TG16W型微量高速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）;HT-111B型恒溫搖床（上海赫田科學儀器有限公司）;SMV-3500型渦旋混勻儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）;D3024R型臺式高速冷凍離心機（北京DRAGONLAB公司）;6100型化學發光儀（上海Clinx公司）;CFX Connect型熒光定量PCR儀（美國Bio-Rad公司）;RT-6100型酶標儀（深圳雷杜生命科學股份有限公司）。

2 方法

2.1? 模型建立與評價

參考文獻[14]建立MCAO大鼠模型。完成7 d的適應性喂養后，開始制備MCAO模型。術前12 h禁食，不禁水。隨機抽取50只SD大鼠，用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。仰臥位固定大鼠，備皮，沿頸正中線切開皮膚1～1.5 cm，鈍性分離，分離出右側頸總動脈（common carotid artery， CCA）、頸外動脈（external carotid artery， ECA）和頸內動脈（internal car?otid artery， ICA），結扎CCA和ECA，將栓線插入CCA，當栓線標記點至ECA與ICA分叉處（插入20 mm）時，系牢栓線，于頸部皮膚切口處涂抹青霉素，縫合，術后保溫。其余10只大鼠作為假手術組，在切開頸部皮膚后，消毒并縫合傷口，不插入線栓。所有大鼠于術后6 h可進食、進水。麻醉清醒24 h后，采用改良Zea-Longa評分法對大鼠的神經功能損傷進行評估，評分為1～3分判定為造模成功[14]。

2.2? 動物分組與給藥

依照隨機數字表法將成功造模的41只大鼠分為模型組，血塞泰低、中、高劑量組，阿司匹林腸溶片組，其中血塞泰低劑量組9只，其余每組各8只。從麻醉清醒24 h后開始，每天在固定時間點灌胃1次。根據人和大鼠的體表面積折算法[15]，阿司匹林腸溶片組灌胃18 mg/kg;血塞泰低、中、高劑量組分別灌胃12.6、25.2、50.4 g/kg。假手術組和模型組，給予等量的生理鹽水進行灌胃。連續干預7 d后取材。

2.3? 神經功能缺損評分評估神經功能損傷情況

在治療7 d后，采用改良神經功能損傷評分（modified Neurological Severity Score， mNSS）評估大鼠的神經功能損傷情況[16]。mNSS包括運動、感覺、平衡木、異常反射四項測試。分數最高為18分，最低為0分，分數越高代表神經功能受損越嚴重。

2.4? TTC染色法評估腦組織的梗死面積

第7天灌胃后，所有大鼠禁食不禁水12 h。每組選擇3只大鼠，取腦組織置于-20 ℃冰箱，冰凍30 min后切片。將切片放入2% TTC染液中，在37 ℃避光條件下染色30 min，之后使用移液槍吸出TTC染色液，接著加入4%多聚甲醛固定液固定24 h。拍照獲取圖像后，使用Image J軟件分析腦組織梗死率。腦梗死率（%）=梗死組織總面積/腦組織面積×100%。

2.5? ELISA測定血清TNF-α、IL-6的含量

取大鼠腹主動脈血置于采血管中，室溫下靜置30 min，以4 ℃、3 000 r/min、離心10 min（離心半徑7 cm），吸取上清液于EP管中。使用IL-6、TNF-αELISA檢測試劑盒測定相關指標。測量標準孔和樣品孔中的OD值，樣品濃度通過標準曲線計算得出。

2.6? RT-PCR檢測腦組織STIM1、Orai1 mRNA的表達

使用TRIzol試劑提取大鼠梗死側腦組織總RNA，并使用超微量紫外分光光度計測量總RNA濃度。使用逆轉錄試劑盒，在25 ℃保溫5 min，42 ℃保溫30 min，85 ℃保溫5 s的條件下，將RNA逆轉錄為cDNA，然后進行RT-qPCR擴增。反應條件為：95 ℃進行30 s，95 ℃進行15 s，60 ℃進行30 s，共進行40個循環。用GAPDH作為內參，引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成，引物序列及片段長度詳見表1。使用2-ΔΔCt方法分析相應的基因表達結果。

2.7? 免疫共沉淀檢測腦組織STIM1、Orai1的蛋白表達水平

預先制備大鼠梗死側腦組織的蛋白裂解液。用protein A/G珠子及IgG，以4 ℃、2 000 r/min離心5 min（離心半徑7 cm），收集上清液，采用BCA法測定蛋白濃度。適當稀釋后，加入STIM1、Orai1抗體，4 ℃緩慢旋轉混合孵育過夜;第二天，加入protein A/G珠子，4 ℃旋轉混合孵育2 h，4 ℃、2 000 r/min離心5 min（離心半徑7 cm）后棄上清液，收集免疫沉淀復合物。向沉淀蛋白中加入80 μL 1×還原型上樣緩沖液，100 ℃煮沸處理10 min，4 ℃、1 000 r/min離心5 min（離心半徑7 cm），收集上清液。從上清液中取10 μL樣品，進行檢測。

2.8? 統計學分析

使用SPSS 25.0統計軟件進行數據統計。各組實驗結果以“x±s”表示。對于滿足正態分布和方差齊性的數據，使用單因素方差分析進行組間比較，采用最小顯著性差異法進行各組間的兩兩比較。對于不滿足方差齊性的數據，采用秩和檢驗進行分析。以P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1? 各組大鼠mNSS評分情況

與假手術組相比，其余各組mNSS評分明顯增高（P<0.01）;與模型組相比，血塞泰各劑量組和阿司匹林腸溶片組mNSS評分降低（P<0.05）;與血塞泰低、中劑量組相比，血塞泰高劑量組mNSS評分降低（P<0.05，P<0.01）。詳見表2。

3.2? 各組大鼠腦梗死率

與假手術組相比，其余各組腦梗死率顯著增加（P<0.01）;與模型組相比，血塞泰中、高劑量組和阿司匹林腸溶片組腦梗死率顯著下降（P<0.01）;與阿司匹林腸溶片組相比，血塞泰低劑量組腦梗死率顯著增加（P<0.01），血塞泰高劑量組腦梗死率顯著下降（P<0.01）。血塞泰各劑量組腦梗死率隨含藥濃度增高而降低（P<0.01）。詳見圖1、表3。

3.3? 各組大鼠血清IL-6、TNF-α水平

與假手術組相比，其余各組血清IL-6、TNF-α含量顯著升高（P<0.01）;與模型組相比，血塞泰各劑量組和阿司匹林腸溶片組血清IL-6、TNF-α含量顯著降低（P<0.01）;與阿司匹林腸溶片組相比，血塞泰低、中劑量組血清IL-6、TNF-α含量顯著升高（P<0.01），血塞泰高劑量組血清IL-6、TNF-α含量顯著降低（P<0.01）。血塞泰各劑量組血清IL-6、TNF-α含量隨含藥濃度增高而降低（P<0.01）。詳見表4。

3.4? 各組大鼠腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平

與假手術組相比，其余各組腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平顯著升高（P<0.01）;與模型組相比，血塞泰各劑量組和阿司匹林腸溶片組腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平顯著降低（P<0.01）;與阿司匹林腸溶片組相比，血塞泰低劑量組腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達表達水平升高（P<0.05），血塞泰中、高劑量組腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平降低（P<0.05，P<0.01）。血塞泰各劑量組腦組織STIM1、Orai1mRNA表達水平隨含藥濃度增高而降低（P<0.01）。詳見表5。

3.5? 各組大鼠腦組織STIM1、Orai1蛋白相對表達水平

與假手術組相比，模型組、阿司匹林腸溶片組和血塞泰低劑量組腦組織STIM1、Orai1蛋白相對表達水平升高（P<0.05，P<0.01）;與模型組相比，血塞泰中、高劑量組和阿司匹林腸溶片組腦組織STIM1、Orai1蛋白相對表達水平降低（P<0.05，P<0.01）;與阿司匹林腸溶片組相比，血塞泰高劑量組腦組織Orai1蛋白相對表達水平降低（P<0.05）;與血塞泰低劑量組相比，血塞泰中、高劑量組腦組織STIM1、Orai1蛋白相對表達水平降低（P<0.05，P<0.01）。詳見圖2、表6。

4 討論

IS屬于中醫學“中風”的范疇，病機可概括為風、火、痰、瘀、虛5個方面。中醫理論認為，痰和瘀貫穿于中風發病的全過程。痰、瘀留滯于臟腑經絡，導致氣機運行失暢。氣不順則生風，風邪裹挾痰、瘀上犯于腦絡血管及肢體經絡、蒙蔽神竅，繼而導致中風的發生。因此，中風的治療多采用息風化痰通絡法[17-18]。血塞泰由僵蠶、丹參、天麻、鉤藤、石菖蒲、紅景天、川芎、葛根、白術、半夏、杜仲、炙甘草12味藥組成。方中僵蠶息風止痙、化痰通絡，丹參活血化瘀，天麻平肝息風，三者風、痰、瘀并治，共為君藥;鉤藤清熱平肝，石菖蒲豁痰開竅，紅景天養血活血，川芎為“血中氣藥”，助以丹參、紅景天活血之效，共為臣藥;佐以葛根解肌升陽、通利經脈，白術、半夏祛濕化痰，杜仲補益肝腎;使以炙甘草補中益氣、調和諸藥。全方共奏祛風化痰、活血通絡之功。藥理研究表明，天麻素可延長凝血時間，降低血栓形成風險[19]。天麻中的對羥基苯甲醇可通過抑制家兔血小板細胞外Ca2+內流和細胞內Ca2+釋放，防止血小板聚集[20]。石菖蒲揮發油有降低血小板活性、抗血小板聚集、防止血栓形成的作用[21]。丹參酮ⅡA可抑制紅細胞聚集、促進血液循環、抵抗血小板黏附、防止血栓形成[22]。王新東等[23]研究發現，含有丹參酮ⅡA的中藥制劑黃芪丹參水煎液可抑制大鼠心肌組織中STIM1的表達。侯培媚等[24]研究發現，僵蠶提取物能促進全腦缺血再灌注大鼠大腦皮質區域抗炎因子的表達，并能恢復神經元損傷和行為功能。葛根素可改善MCAO大鼠的神經功能、腦梗死面積和腦水腫體積[25]。以上說明血塞泰具有減輕IS后神經元損傷、抑制血小板活化的潛力。

IS是最常見的腦血管疾病之一，全世界每年約有110多萬人死于IS，IS對人類健康造成嚴重危害[26]。血小板活化會誘發IS[27]，在IS急性期，聯合使用抗血小板藥物可以有效預防IS的再次發生[28]。細胞內Ca2+增加是血小板活化的必要條件[29]。SOCE的核心蛋白STIM1和Orai1通過允許細胞外Ca2+進入細胞內，參與調節血小板活化。GROSSE等[30]研究發現，STIM1激活的小鼠具有更高的Ca2+水平和循環血小板預激活，證實STIM1能觸發血小板活化。缺乏Orai1的小鼠血小板SOCE受損，血小板的黏附及促凝作用下降[31]。阿司匹林可以通過阻斷血小板激活因子血栓素A2的合成，抑制血小板活化[32]。研究證實，阿司匹林能夠阻斷及逆轉STIM1-Orai1的相互作用[33]，其代謝產物水楊酸鹽可抑制SOCE[34]。此外，應激和壞死的神經元通過釋放損傷相關分子模式，上調炎癥介質的表達[35]。炎癥介質如TNF-α、IL-6等能夠驅動免疫細胞浸潤缺血腦組織，而免疫細胞的募集又會進一步促進炎癥介質的釋放，最終損害血腦屏障，加速腦損傷[36]。抑制MCAO大鼠IL-6、TNF-α的釋放可以保護血腦屏障，減輕腦水腫[37]。

腦缺血、缺氧和能量代謝紊亂會導致神經元內質網Ca2+耗竭。STIM1屬于SOCE的Ca2+傳感器，當內質網Ca2+儲存耗盡時，STIM1從內質網轉移到細胞膜，與細胞膜上的Orai1相互作用，激活Ca2+內流[38]。SOCE通道過度激活，會引發神經元興奮性毒性，導致神經元凋亡和神經功能障礙[39]。研究證實，IS大鼠海馬組織中STIM1和Orai1蛋白表達和細胞內Ca2+濃度均增加，抑制STIM1的表達可減少神經元的凋亡[40]。缺乏STIM1和Orai1骨髓嵌合體的小鼠在MCAO誘導后24 h的腦組織梗死體積顯著降低[8]。

本研究發現，與模型組相比，血塞泰中、高劑量組大鼠mNSS評分、腦組織梗死面積降低;血塞泰低劑量組大鼠mNSS評分下降;血塞泰各劑量組大鼠腦組織STIM1、Orai1 mRNA表達水平降低;血塞泰中、高劑量組大鼠腦組織STIM1和Orai1的結合度下降。說明血塞泰可改善IS后腦組織損傷面積和mNSS評分，下調STIM1和Orai1的表達，抑制STIM1和Orai1的結合，從而發揮抗IS的作用。本實驗ELISA結果顯示，與模型組相比，血塞泰各劑量組大鼠血清IL-6、TNF-α水平下降，表明血塞泰能夠減輕IS后的炎癥反應。

綜上所述，血塞泰能夠抑制STIM1、Orai1的表達及結合度，減輕炎癥反應，改善MCAO大鼠神經功能缺損與降低神經元損傷，從而發揮抗IS的作用。本研究為血塞泰的臨床應用提供了證據，與治療IS的傳統西藥相比，血塞泰在治療IS方面具有安全性高、療效顯著的特點。但考慮到中藥的作用機制通常是涉及多靶點、多通道和多層次的綜合調控，對于血塞泰治療IS的深入作用機制仍需進一步研究。

參考文獻

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〔基金項目〕國家自然科學基金（81673955）;湖南省衛生健康委科研計劃項目（202203074016）;湖南省研究生科研創新項目（CX20230832）。

〔通信作者〕*申? 思，女，碩士，主治醫師，E-mail：472075891@qq.com;郭志華，男，博士，教授，主任醫師，博士研究生導師，E-mail：guozhihua112@163.com。