雞FGF6基因生物學特性及其多態性與經濟性狀的關聯分析

曹玉珠,邢雨欣,馬乘霖,管宏波,賈其輝,康相濤,2,3,田亞東,2,3,李轉見,2,3,劉小軍,2,3*,李 紅,2,3*

(1.河南農業大學動物科技學院,鄭州 450046;2.河南省家禽育種國際聯合實驗室,鄭州 450046;3.河南省雞種質資源創新與利用重點實驗室,鄭州 450046)

成纖維細胞生長因子6(fibroblast growth factor 6,FGF6)是成纖維細胞生長因子家族(FGFs)的成員之一,主要通過與成纖維細胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptor, FGFR)1和4結合后發揮其生物學活性[1-2]。有研究表明,FGF6是血管新生誘導因子之一,它可以促進血管內皮細胞的生成[3]。沉默FGF6會抑制膀胱癌(BC)細胞系有氧糖酵解,從而調節PI3K/Akt和MAPK信號通路抑制其血管生成[4]。FGF6基因可調節人舌頭發育過程中的肌源性分化和成肌細胞融合[5]。Cai等[6]通過構建肌母細胞和周圍神經損傷的體內模型,發現FGF6在去神經支配的大鼠肌肉中增強了MyHC-IIb肌纖維表型,減少了肌肉萎縮,進而促進神經支配后再生骨骼肌的功能恢復。Xu等[7]通過對男性骨骼肌樣本進行甲基化DNA免疫沉淀測序(MeDIP-Seq)和RNA測序(RNA-Seq)發現FGF6基因表達下調,骨骼肌中過表達FGF6能夠改善胰島素抵抗,增加骨骼肌的AMPK活性,進而增加全身葡萄糖量和脂質代謝。Shamsi等[8]發現,FGF6作為一種脂肪因子可獨立于脂肪生成機制調節解偶聯蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的表達,并調節全身能量代謝。Liu等[9]研究表明,FGF6是脂肪細胞祖細胞(APC)維持脂肪穩態和胰島素敏感性的增殖因子。Hu等[10]研究發現,重組人FGF6蛋白能夠通過抑制Hippo途徑改善心肌梗死(MI)小鼠的心臟功能并促進其心臟的修復能力。Creighton等[11]通過對非裔美國人前列腺癌(Pca)轉錄組學和表觀基因組學全DNA甲基化的綜合分析,發現了與Pca唯一相關的包括FGF6在內的12個候選基因。

上述關于FGF6基因的報道主要集中在哺乳動物上,表明該基因在血管形成、骨骼肌再生、葡萄糖代謝、脂肪生成及穩態、心肌發育和腫瘤細胞的發育等生理和病理過程中具有重要作用。在雞上,Kumar和Chapman[12]對雞FGF6基因進行了克隆,并通過原位雜交發現其在雛雞的頭部、咽部和內臟中胚層廣泛表達。先前研究發現FGF6基因在固始雞的十二指腸高表達[13]。除此之外,有關雞FGF6基因的相關研究鮮有報道。

綜上,FGF6基因在哺乳動物的細胞增殖、肌肉發育過程中發揮重要作用,在雞上對其研究較少,尚未見對FGF6基因多態性及與雞經濟性狀的關聯分析。本研究旨在通過對雞FGF6基因進行生物信息學分析,并對雞FGF6基因的SNPs與雞的生長、屠體、肉品質和血清生化指標性狀進行關聯分析,篩選與雞經濟性狀關聯的重要SNPs及單倍型組合,為進一步研究其生物學功能及調控機制提供理論基礎,為雞分子育種提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究以河南省家禽種質資源創新工程研究中心構建的固始雞×安卡雞F2資源群768個個體為研究對象(該群體按F2遠緣半同胞設計方案,有正反交7個家系)[14]。所有雞飼養在同一環境,自由采食飲水,飼喂至第84天時,頸靜脈采血,血液置于含/不含EDTA的抗凝管中,用于制備DNA/血清。768只雞簡化基因組測序(genotyping-by-sequencing, GBS)數據[15]及個體所對應的表型數據庫由實驗室保存。

1.2 測定表型指標

固始雞×安卡雞F2資源群所有個體從孵化起,每隔2周稱體重,每隔4周測定體尺指標。體重指標包括出生重(birth weight, BW0)、2周體重(BW2)、BW4、BW6、BW8、BW10和BW12。體尺指標包括0、4、8和12周齡的脛長(shank length, SL)、脛圍(shank girth, SG)、胸深(chest depth, CD)、胸寬(chest width, CW)、胸骨長(breast bone length, BBL)、胸角(breast angle, BA)、體斜長(body slanting length, BSL)和骨盆寬(pelvis breadth, PB)等32個指標[14]。

84日齡屠宰后測定屠體、肉質和血清生化相關指標。屠體性狀包括肝臟重(liver weight, LiW)、胸肌重(breast muscle weight, BMW)、腿肌重(leg muscle weight, LMW)、腿重(leg weight, LW)、腹脂重(abdominal fat weight, AFW)、屠體重(carcass weight, CW)、半凈膛重(semi-evisceration weight, SEW)、全凈膛重(evisceration weight, EW)及其對應的比率等16個指標[15]。肉質性狀包含腿肌剪切力(leg shear force, LSF)、胸肌剪切力(breast shear force, BSF)、胸肌失水率(water loss rate of breast muscle, WLRB)和腿肌失水率(water loss rate of leg muscle, WLRL)4個指標[16]。血清生化指標包括谷丙轉氨酶(alanine transaminase, ALT)、膽堿酯酶(choline esterase, ChE)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、總膽固醇(total cholesterol, CHO)、甘油三酯(triglyceride, TG)等15個指標[17,18]。

1.3 生物信息學分析

從NCBI數據庫中下載人(NP_066 276.2)、鼠(NP_571 983.1)、雞(XP_001 232 071.1)、火雞(XP_003 202 616.1)、綠海龜(XP_007 055 701.1)、熱帶爪蟾(NP_001 136 295.1)和斑馬魚(NP_001 001 398.2)FGF6的氨基酸序列進行相似性比對,利用MEGA10.0軟件構建系統進化樹。利用生物信息學在線軟件對FGF6蛋白理化性質及功能進行分析和預測。相關分析項目及對應的工具見表1。

表1 生物信息學分析在線軟件Table 1 The bioinformatics analysis online softwares

1.4 數據處理與統計分析

使用POPGENE Version32構建單倍型并計算SNPs位點的基因型頻率、等位基因頻率、有效等位基因數(Ne)、雜合度(He)、多態信息含量(PIC),并檢驗Hardy-Weinberg平衡。

利用SPSS24.0軟件的混合線性模型(最小二乘分析)對FGF6不同基因型和單倍型組合與F2資源群經濟性狀進行關聯分析,數據的多重比較使用邦弗倫尼(Bonferroni)校正。關聯分析模型如下:

Yijklm=μ+Gi+Sj+ Hk+fl+eijklm。

式中:Yijklm為個體性狀的表型值;μ為性狀總體均值;Gi為基因型的固定效應(1～3);Sj為性別的固定效應(1, 2);Hk為批次的固定效應(1, 2);fl為家系的隨機效應(1～7);eijklm為隨機誤差。P<0.05表示差異達到顯著水平。

2 結 果

2.1 FGF6系統進化樹和保守性分析

從NCBI數據庫獲得FGF6不同物種的氨基酸序列并進行分析(圖1),利用CLUSTALW將獲得的雞FGF6基因序列與其他6個物種對比發現,雞FGF6氨基酸序列與人、鼠、火雞、非洲爪蟾、斑馬魚和綠海龜的序列相似性分別為65.05%、66.02%、91.26%、63.59%、68.29%、85.44%。不同物種FGF6氨基酸序列利用MEGA10.0軟件進行多序列比對后構建系統進化樹,結果顯示雞FGF6與火雞親緣關系最近,其次為綠海龜,與斑馬魚親緣關系最遠(圖1A)。FGF6保守性分析表明FGF6在不同物種中保守性較高,擁有相同的motif1～4、6基序(圖1B)。

A. 不同物種間FGF6系統進化樹;B. 不同物種FGF6保守性分析A. Phylogenetic tree of FGF6 among different species; B. Conservativeness analysis of FGF6 among different species 圖1 不同物種間FGF6氨基酸序列分析Fig.1 Amino acid sequence analysis of FGF6 among different species

2.2 雞FGF6蛋白理化性質、信號肽、親水性/疏水性和高級結構分析

利用Expasy-Protparam在線軟件對雞FGF6基因編碼的氨基酸序列進行理化性質分析,結果顯示FGF6蛋白分子式為C1023H1617N287O298S9,分子量為22 993.38 u,等電點(pI)為9.28,其蛋白不穩定系數(Ⅱ)為35.68,說明該蛋白為穩定蛋白。脂肪系數為89.47,總平均親水性系數為-0.163,說明FGF6蛋白是親水性蛋白。信號肽預測結果顯示FGF6在第36～37位存在信號肽序列,概率為62.74%,推測其為分泌蛋白(圖2A)。Expasy-ProtScale在線軟件計算FGF6蛋白的疏水性,疏水性最大值為3.011(第27位氨基酸),最小值為-2.400(第70位和71為氨基酸),該蛋白為親水性蛋白(圖2B)。FGF6蛋白二級結構分析顯示無規則卷曲占比44.17%,α螺旋占26.70%,β轉角為8.74%,延伸鏈為20.39%(圖2C)。FGF6蛋白三級結構預測結果與二級結構預測一致(圖2D)。

A.雞FGF6蛋白質信號肽分析;B.雞FGF6蛋白質疏水結構預測;C.雞FGF6蛋白質二級結構分析(h.α-螺旋;t.β-轉角;c.無規則卷曲;e.延伸鏈);D.雞FGF6蛋白質三級結構預測A. Chicken FGF6 protein signal peptide analysis; B. Chicken FGF6 protein hydrophobic structure prediction; C. Chicken FGF6 protein secondary structure analysis (h.α-helix; t.β-turns; c.irregular coiling; e.elongated strand); D. Chicken FGF6 protein tertiary structure prediction圖2 雞FGF6蛋白質信號肽、親疏水性及二、三級結構預測Fig.2 The prediction of chicken FGF6 protein signal peptide, hydrophilicity, potential secondary and tertiary structure

2.3 雞FGF6跨膜域、亞細胞定位、磷酸化和N-糖基化分析

利用TMHMM-2.0進行蛋白質跨膜結構預測,結果顯示,FGF6第21～40位氨基酸處存在一個跨膜區域(圖3A)。利用UniProt進行亞細胞定位,GO注釋顯示FGF6位于細胞質和細胞外空間(圖3B)。利用NetPhos 3.1進行磷酸化預測,結果顯示,FGF6蛋白有12個絲氨酸、5個蘇氨酸和5個酪氨酸位點發生磷酸化(圖3C)。利用NetNGlyc 1.0進行糖基化預測,結果顯示FGF6蛋白第44位氨基酸處有一個N糖基化位點,可能性為74.42%(圖3D)。

A.雞FGF6蛋白質跨膜分析;B.雞FGF6蛋白質亞細胞定位預測;C.雞FGF6蛋白磷酸化位點預測;D.雞FGF6蛋白糖基化位點預測A. Chicken FGF6 protein transmembrane analysis; B. Prediction of subcellular localization of chicken FGF6 protein; C. Prediction of chicken FGF6 protein phosphorylation sites; D. Prediction of chicken FGF6 protein glycosylation sites圖3 雞FGF6蛋白質跨膜結構、亞細胞定位、磷酸化、糖基化位點預測Fig.3 Predicted transmembrane structure, subcellular localization, phosphorylation and glycosylation sites of chicken FGF6 protein

2.4 雞FGF6蛋白互作分析

利用STRING在線軟件對FGF6的互作蛋白進行預測分析,結果顯示FGF6與FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4和表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)等5個蛋白可能存在相互作用(圖4)。

圖4 雞FGF6蛋白與其他蛋白相互作用網絡分析Fig.4 Network analysis of chicken FGF6 protein interaction with other proteins

2.5 雞FGF6基因遺傳變異位點的篩選

根據GenBank公布的雞FGF6基因序列(XM_001 232 070.4),下載獲取FGF6基因組啟動子區域2 kb(73397575-73410291(-))序列,基于實驗室保存的固始雞-安卡雞F2資源群的GBS數據(GRCg6a版本)[17],篩選FGF6基因組包含啟動子區域2 kb序列在固始雞-安卡雞F2資源群GBS數據中存在的所有SNPs位點,共得到6個遺傳變異位點,均位于第1內含子上,見表2。

表2 雞FGF6基因上SNPs信息Table 2 SNPs information on chicken FGF6 gene

2.6 群體遺傳學分析

對雞FGF6基因的多態性進行群體遺傳學分析表明,在F2資源群中,6個SNPs位點均存在3種基因型,其中rs73399071位點的優勢基因型為GG(n=467),基因型頻率為0.650;rs73399075位點的優勢基因型為TT(n=590),基因型頻率為0.821;rs73399124位點的優勢基因型為CC(n=541),基因型頻率為0.752;rs73399207位點的優勢基因型為TT(n=367),基因型頻率為0.510;rs73399282位點的優勢基因型為CC(n=438),基因型頻率為0.609;rs73399353位點的優勢基因型為TA(n=313),基因型頻率為0.435。除rs73399353外,其余5個位點均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(P<0.001)。6個多態位點的有效等位基因數(Ne)介于1.419 3～2.853 2,雜合度(He)介于0.295 4～0.649 5,多態信息含量(PIC)介于0.484 9～1.073 4。各位點的等位基因頻率,Ne、He、PIC等群體遺傳學指標統計結果見表3。

表3 F2資源群FGF6基因SNPs位點的遺傳特性Table 3 Genetic characterization of the SNPs loci of the FGF6 gene in the F2 resource population

2.7 連鎖不平衡分析

利用Haploview 4.2軟件對rs73399071、rs73399075、rs73399124、rs73399207和rs73399282這5個處于哈代-溫伯格平衡位點進行連鎖不平衡(LD)分析(圖5),結果顯示,這5個位點之間完全連鎖(D′=1,r2=1)(圖5A),后續使用rs73399071位點進行關聯分析;存在6種單倍型,其中GTCCC是主要單倍型,比例為0.257,其次是GTCTT和GTCTC,比例分別是0.202和0.199(圖5B)。

A.SNPs連鎖不平衡分析;B.單倍型模塊分析。顏色越深表示D′越高,數字表示R2A. SNPs linkage disequilibrium analysis; B. Haplotype module analysis. Darker colors indicate higher D′, numbers indicate R2圖5 雞FGF6基因5個位點連鎖不平衡分析Fig.5 Linkage disequilibrium analysis of 5 loci of chicken FGF6 gene

2.8 單倍型分析

由表4可知,雞FGF6基因5個處于哈代-溫伯格平衡的SNPs位點共存在28種單倍型組合,其中以GCTTCCTCCC組合的頻率最高(0.134 9),GGTTCCTCCT組合的頻率(0.126 6)次之,GCTGTCTTCC、GCTTCCCCCC、GCTTCCTCCT、GG-GGTTTCCC、GGGGTTTTCC、GGTGTCTCCT和GGTTTTTCCC組合的頻率最低(0.001 4)。為避免因個體數太少引起的誤差,單倍型關聯分析時剔除個體數少于30的單倍型組合。

表4 單倍型組合及其頻率Table 4 Haplotype combinations and their frequencies

2.9 rs73399071位點與F2資源群生長性狀的關聯分析

LD分析結果顯示5個位點之間強連鎖,且屬于Block1中,因此僅對rs73399071位點的不同基因型與F2資源群體相關經濟性狀進行了關聯分析。如表5～8所示,rs73399071位點與雞0周齡脛長、2周齡體重、4周齡體重、脛圍、胸骨長、體斜長、骨盆寬、6周齡體重、8周齡體重、胸寬、胸骨長、胸角、10周齡體重和12周齡體重在內的17個性狀顯著相關(P<0.05);且大部分CC突變基因型個體的表型均值普遍高于野生基因型GG(表5)。與其他生長性狀關聯不顯著(數據未顯示)。

表5 雞FGF6基因遺傳變異位點rs73399071與F2資源群生長性狀的關聯分析Table 5 Association analysis of genetic variant locus (rs73399071) of chicken FGF6 gene with growth traits in F2 resource population

2.10 rs73399071位點與F2資源群屠體性狀的關聯分析

rs73399071位點與雞胸肌重、腿重、腿肌重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、肝臟率、腿肌重率、半凈膛率和全凈膛率10個屠體性狀顯著相關(P<0.05)。除腿肌重率外,該位點與其他9個表型性狀極顯著相關(P<0.01)。且突變基因型CC型個體表型均值普遍顯著高于GG基因型(表6)。與其他屠體性狀關聯不顯著(數據未顯示)。

表6 雞FGF6基因遺傳變異位點(rs73399071)與F2資源群屠體性狀的關聯分析Table 6 Association analysis of genetic variant locus (rs73399071) of chicken FGF6 gene with carcass traits of F2 resource population

2.11 rs73399071位點與F2資源群肉質性狀的關聯分析

rs73399071位點與肉質性狀的關聯分析結果顯示,如表7所示,該位點與腿肌剪切力、胸肌剪切力、胸肌失水率和腿肌失水率的關聯均未達到顯著水平(P>0.05)。

表7 雞FGF6基因遺傳變異位點(rs73399071)與F2資源群肉質性狀的關聯分析Table 7 Association analysis of genetic variant locus (rs73399071) of chicken FGF6 gene with meat quality traits in F2 resource population

2.12 rs73399071位點與F2資源群血清生化指標的關聯分析

rs73399071位點與F2資源群血清生化指標的關聯結果分析如表8所示,該位點與膽堿酯酶和高密度脂蛋白顯著相關(P<0.05),其中GG基因型和CC基因型普遍高于GC基因型。與其他血清生化指標關聯不顯著(數據未顯示)。

表8 雞FGF6基因遺傳變異位點(rs73399071)與F2資源群血清生化指標的關聯分析Table 8 Association analysis of genetic variant locus (rs73399071) of chicken FGF6 gene with serum biochemical indexs of F2 resource population

2.13 不同單倍型組合與雞生長性狀的關聯分析

不同單倍型組合與生長性狀關聯分析結果如表9和表10所示,CCTTCCTTCC單倍型組合個體的4周體重、胸骨長,6周體重,8周體重、脛圍,10周體重和12周體重、胸寬均最高,4周脛圍、8周胸寬和胸骨長以GGTTCCCCCC組合最高,4周體斜長以GCTTCCTTCT組合最高;與其他體重性狀關聯不顯著(數據未顯示)。

表9 SNPs位點單倍型組合與雞不同階段體重的關聯分析Table 9 Association analysis of haplotype combinations at SNPs loci and chicken body weight at different stages

表10 SNPs位點單倍型組合與雞不同階段體尺的關聯分析Table 10 Association analysis of haplotype combinations at SNPs loci and chicken body size at different stages

3 討 論

本研究對不同物種FGF6基因編碼的氨基酸序列進行同源性比對,結果顯示,雞與火雞的同源性達91%以上,與非洲爪蟾同源性較低,表明FGF6基因在鳥類中的保守性較高。同源性在一定程度上反映親緣關系的遠近,通過構建系統進化樹顯示雞FGF6與火雞親緣關系較近,與爬行類(綠海龜)和兩棲類(熱帶爪蟾)次之,與魚類(斑馬魚)最遠。由于雞FGF6基因能夠與其他脊椎動物聚集在一起,說明這些物種的FGF6基因可能由同一祖先進化而來。同時經過序列比對發現,雞FGF6與其他6個物種存在相同的5個motif基序,推測其可能是在雞FGF6執行主要生理功能的蛋白片段。通過分析其疏水性和跨膜結構得知雞FGF6蛋白表現為親水性蛋白,存在跨膜區。雞FGF6蛋白的高級結構(二級、三級結構)主要由無規則卷曲和α-螺旋組成。

蛋白質磷酸化是一種廣泛的蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs)方式,也是一種最有效的調控途徑,是由蛋白質激酶催化的磷酸基轉移反應,在調控細胞周期、信號傳導和影響肉品質變化等生物過程中發揮重要作用[19-21]。雞FGF6蛋白存在12個絲氨酸、5個蘇氨酸和5個酪氨酸磷酸化位點,這些磷酸化位點對于FGF6的轉運、接收和表達可能具有重要意義。雞FGF6蛋白有1個N-糖基化位點。糖基化也是一種重要的蛋白質翻譯后修飾方式,能夠通過調控蛋白質的電荷態、結構及分子間相互作用影響其功能[22],參與細胞免疫、信號傳導、細胞壁的合成、蛋白質的翻譯調控和蛋白降解等生物過程[23-24]。通過蛋白互作分析發現,雞FGF6蛋白與FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4等成纖維細胞生長因子受體家族蛋白均有互作關系,有研究表明FGF成員的生物學活性是通過與FGFR1～4受體結合,啟動MAPK(有絲分裂原激活的蛋白激酶)信號通路,從而刺激纖維細胞的生長、分裂增殖[25],這也說明雞FGF6蛋白與其受體存在互作,具有一定的研究價值。

相關研究表明,FGF6基因會對骨骼肌發育、修復再生等方面產生一定影響[26-28]。FGF6基因多次被鑒定為影響經濟性狀的候選基因[29-31],但目前國內外在雞FGF6基因多態性上未有相關研究報道。雜合度(He)、有效等位基因數(Ne)和多態信息量(PIC)常用來衡量一個群體的遺傳變異程度,其數值越大,表明試驗群體遺傳變異度越高,遺傳豐富度越高[32]。本研究對雞FGF6基因遺傳特性分析發現,6個SNPs位點均處于高等多態性、5個SNPs處于Hardy-Weinberg平衡。可能是本試驗中所用群體處于閉鎖的生長繁育環境,導致了這種動態平衡。單位點分子標記通常適用于大規模群體的遺傳分析,如種質資源的遺傳多樣性評估、品種鑒定和遺傳改良中的輔助選擇[33-34]。本研究通過對雞FGF6基因多態性與經濟性狀進行關聯分析,發現rs73399071位點(G>C)與F2資源群不同階段的體重、脛長、脛圍、體斜長等17個生長性狀表型指標顯著相關(P<0.05),與全凈膛重、半凈膛重、屠體重等10個屠體性狀表型指標顯著相關(P<0.05),但與肉質性狀的關聯未達到顯著水平(P>0.05),總體來看,CC基因型(突變型)普遍優于GG基因型(野生型),故在生產實踐上rs73399071位點可以作為雞生長性狀和屠體性狀的候選分子標記,選留CC基因型個體用于輔助育種,提高經濟效益。

在之前的研究中,一般認為基因突變發生在內含子區域不會直接改變蛋白質的氨基酸序列,故不會對其生物學特性產生影響[35]。但隨著研究的深入,人們發現內含子可能潛在地影響剪切、mRNA加工、轉錄和表達調控等各種細胞過程,內含子的變異可能導致剪切準確性或效率的變化,從而導致氨基酸編碼的變化,最終改變真核生物的表型[36-38],如緊密蛋白2(TJP2)基因內含子突變(9q21.11位點)通過改變TJP2基因的表達和促進經表皮水分流失而賦予特應性皮炎(AD)易感性[39]。本研究在FGF6基因上共篩選到6個位于內含子區域的SNPs(rs73399071、rs73399075、rs73399124、rs73399207、rs73399282、rs73399353),其中rs73399071突變位點與經濟性狀相關表型關聯顯著,該位點是否對FGF6基因的表達產生影響,以及如何調控基因來影響動物表型后續還需進一步驗證。

動物的表型受單個突變位點和多個突變位點組合效應的影響,其后者影響較為重大[40]。因為在研究遺傳變異對表型的影響時,單個SNP分析作用較小,單倍型分析可以提供更豐富的信息[41-43]。單倍型組合分析通常適用于復雜性狀的遺傳研究,例如復雜疾病的關聯分析和數量性狀的QTL定位[44]。本研究發現,FGF6基因的CCTTCCTTCC單倍型組合個體的BW4、BW6和BW10均高于其他9種單倍型組合;GGTTCCCCCC單倍型組合個體的SG4、CW8和BBL8高于其他9種單倍型組合,而其SG8和CW12低于CCTTCCTTCC單倍型組合;GCTTCCTTCT單倍型組合的BBL4和BSL4高于其他組合;GGTGTCTTCC單倍型組合的BA12高于其他單倍型。不同單倍型組合對不同階段體重和體尺指標的關聯效果不同。考慮到該研究的樣本量,有些單倍型個體數較少,產生的試驗結果具有一定的誤差,后續還需要進一步擴大樣本量來驗證和探討。

4 結 論

本研究發現,雞FGF6氨基酸序列與火雞親緣關系最近,與斑馬魚親緣關系最遠;不同物種間保守性較高且其與FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、EGF共5個蛋白可能存在相互作用。雞FGF6基因內含子6個遺傳變異位點均表現出高度多態性(PIC≥0.5),且存在強連鎖,GTCCC是主要單倍型;FGF6基因遺傳變異位點rs73399071與固始雞-安卡雞F2資源群的生長性狀、屠體性狀和血清生化指標顯著相關,且CCTTCCTTCC單倍型組合個體具有較高的體重。相關結果顯示,rs73399071位點可以作為改良雞生長性狀的分子標記用于輔助選擇,表明FGF6基因可能在雞生長發育中發揮著重要的作用。本研究為進一步深入研究FGF6基因在雞上的生物學功能提供重要的參考。