基于網絡藥理學和實驗驗證探討加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的分子機制

〔摘要〕 目的 通過網絡藥理學、分子對接和實驗驗證對加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的主要活性成分及潛在作用機制進行探討。方法 應用網絡藥理學預測加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘可能的作用機制，并通過分子對接預測活性成分的結合位點。構建哮喘大鼠模型，將60只大鼠隨機分為正常組、模型組、地塞米松片組[0.5 mg/（kg·d）]、加味小柴胡湯組[5 g/（kg·d）]，每組15只。正常組、模型組給予生理鹽水2 mL灌胃，每日灌胃2次。給藥4周后取大鼠血清及肺組織，ELISA法檢測血清白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白細胞介素-13（interleukin-13， IL-13）、免疫球蛋白E（immunoglobulin E， IgE）、干擾素-γ（interferon-γ， INF-γ）水平，Western blot法檢測肺組織絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）、GATA結合蛋白-3（GATA-binding protein-3， GATA-3）表達水平。結果 網絡藥理學共篩選出加味小柴胡湯有效成分1 483種，作用靶點274個，咳嗽變異性哮喘相關靶點7 509個，其交集靶點204個。GO和KEGG富集分析主要涉及信號轉導、炎癥反應、細胞凋亡等一系列的生物學反應過程，主要參與表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor， EGFR）、絲裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1， MAPK1）、絲裂原活化蛋白激酶3（mitogen-activated protein kinase 3， MAPK3）、RELA癌基因（RELA proto-oncogene， RELA）、細胞腫瘤抗原p53（cellular tumor antigen P53， TP53）、細胞性骨髓細胞瘤病病毒癌（myelocytomatosis virus carcinoma， MYC）和蛋白激酶Cα（protein kinase Cα， PRKCA）等靶點的調控。分子對接結果表明，篩選得到的主要活性成分與靶點有較強的結合力。與正常組比較，模型組大鼠肺組織中IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3升高（Plt;0.05），INF-γ降低（Plt;0.05）。與模型組比較，地塞米松片組及加味小柴胡湯組IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3降低（Plt;0.05），INF-γ升高（Plt;0.05）。與地塞米松片組比較，加味小柴胡湯組大鼠IL-6、IL-13、IgE降低（Plt;0.05），INF-γ升高（Plt;0.05）。結論 加味小柴胡湯對咳嗽變異性哮喘具有治療作用，其作用機制可能與EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53、MYC和PRKCA靶點有關。

〔關鍵詞〕 加味小柴胡湯；咳嗽變異性哮喘；表皮生長因子受體；絲裂原活化蛋白激酶；RELA癌基因；地塞米松；分子對接

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.03.010

Molecular mechanism of Jiawei Xiaochaihu Decoction in treating

cough-variant asthma based on network pharmacology and

experimental validation

ZHANG Tingting， LIU Bo*， ZOU Xue， MAN Yijuan， ZHANG Baoxin

Pediatric Department， Hebei Cangzhou Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Cangzhou， Hebei 061001， China

〔Abstract〕 Objective To explore the main active ingredients and potential mechanism of action of Jiawei Xiaochaihu Decoction （JWXCHD） in treating cough-variant asthma through network pharmacology， molecular docking， and experimental validation. Methods The network pharmacology was applied to predicting the possible mechanism of action of JWXCHD in treating cough-variant asthma and molecular docking was used to predict the binding sites of active ingredients. A rat model of asthma was established， and 60 rats were randomly divided into normal group， model group， dexamethasone tablets group [0.5 mg/（kg·d）]， and JWXCHD group [5 g/（kg·d）]， with 15 rats in each group. The normal group and model group were given 2 mL of saline by gavage， twice a day. The serum and lung tissue of rats were collected after four weeks of administration. The levels of interleukin-6 （IL-6）， interleukin-13 （IL-13）， immunoglobulin E （IgE）， and interferon-γ （INF-γ） were checked by ELISA， and the expression levels of mitogen-activated protein kinase （MAPK） and GATA-binding protein-3 （GATA-3） in the lung tissue were examined by Western blot. Results Network pharmacology screened out a total of 1，483 active ingredients of JWXCHD， 274 action targets， 7，509 targets related to cough-variant asthma， and 204 intersection targets. GO and KEGG enrichment analyses yielded a series of biological reaction processes such as signal transduction， inflammatory response， and cell apoptosis， mainly involving the regulation of targets such as epidermal growth factor receptor （EGFR）， mitogen-activated protein kinase 1 （MAPK1）， mitogen-activated protein kinase 3 （MAPK3）， RELA proto-oncogene （RELA）， cellular tumor antigen P53 （TP53）， myelocytomatosis virus carcinoma （MYC）， and protein kinase Cα （PRKCA）. The results of molecular docking showed that the main active ingredients screened out had strong binding force with the targets. Compared with the normal group， IL-6， IL-13， IgE， MAPK， and GATA-3 increased （Plt;0.05） and INF-γ decreased （Plt;0.05） in the lung tissue of the model group. Compared with the model group， IL-6， IL-13， IgE， MAPK， and GATA-3 decreased （Plt;0.05） and INF-γ increased （Plt;0.05） in the lung tissue of the dexamethasone tablets group and the JWXCHD group. Compared with the dexamethasone tablets group， IL-6， IL-13， and IgE decreased and INF-γ increased in the JWXCHD group （Plt;0.05）. Conclusion JWXCHD has therapeutic effects on cough-variant asthma， and its mechanism of action may be related to targets of EGFR， MAPK1， MAPK3， RELA， TP53， MYC， and PRKCA.

〔Keywords〕 Jiawei Xiaochaihu Decoction; cough-variant asthma; epidermal growth factor receptor; mitogen-activated protein kinase; RELA proto-oncogene; dexamethasone; molecular docking

咳嗽變異性哮喘是支氣管哮喘的一種亞型，被認為是全球成年人慢性咳嗽最常見的原因之一[1]。咳嗽變異性哮喘與典型的哮喘不同，通常表現為僅咳嗽而沒有喘息或呼吸困難的癥狀，尤其是夜間咳嗽[2]。由于咳嗽變異性哮喘與經典哮喘具有相同的病理生物學基礎，臨床上通常使用吸入性皮質類固醇或吸入性皮質類固醇聯合長效β受體激動劑緩解頑固性咳嗽[3]。盡管部分患者的咳嗽癥狀經治療后可得到有效控制，但仍有30%～40%的咳嗽變異性哮喘患者會發展為典型哮喘[4]。中醫藥治療咳嗽變異性哮喘歷史悠久，積累了豐富的實踐經驗，具有多成分、多靶點、多途徑的優勢。現代藥理學研究發現，中藥可以通過改善患者癥狀，延緩進程，從而起到治療哮喘的作用[5]。

《傷寒論·辨太陽病脈證并治》中記載：“傷寒五六日……或咳者，小柴胡湯主之。”小柴胡湯為《傷寒論》中治療少陽病的主方，是治療咳嗽的常用方，由柴胡、黃芩、法半夏、人參、生姜、大棗、炙甘草組成，加味小柴胡湯由小柴胡湯加陳皮燥濕化痰，以增強宣肺化痰、補脾益肺、調和營衛的功效，主治宿痰內伏、肺失宣降證，目前臨床上主要用于治療咳嗽等多種肺疾病。盡管目前對加味小柴胡湯的療效研究較多，但對于其有效成分、作用靶點和作用途徑等藥理機制的研究較少。網絡藥理學是一門基于人工智能和大數據的藥物系統研究新發展的交叉學科，具有系統性、相關性和可預測性等特點，其可將生物信息學和系統生物學相結合，構建“成分-靶點-通路”的相互作用關系，可為活性化合物篩選和機制的探索提供新的思路[6]。

本研究結合網絡藥理學預測加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的潛在活性成分、作用靶點以及發揮藥效的相關分子通路；并通過哮喘大鼠模型進行動物實驗驗證，采用ELISA法和Western blot法進一步揭示加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的潛在作用機制。

1 方法

1.1" 網絡藥理學及分子對接探討加味小柴胡湯的作用機制

1.1.1" 主要成分的檢索、篩選和作用靶點的確定" 通過中國天然產物化學成分庫（http：//pharmdata.ncmi.cn/cnpc/）以及SymMap（http：//symmap.org//）數據庫，分別以加味小柴胡湯中柴胡、法半夏、人參、黃芩、炙甘草、生姜、大棗、陳皮為關鍵詞進行檢索。對有效成分進行篩選（類藥性≥0.18和口服生物利用度≥30%），提取對應的靶點，并將靶點去重后與UniProt數據庫進行匹配。

1.1.2" 咳嗽變異性哮喘相關靶點的篩選" 通過Gene?Cards數據庫對咳嗽變異性哮喘相關基因進行檢索，篩選得分≥1.0，與咳嗽變異性哮喘相關性高的基因靶點。

1.1.3" 藥物-有效成分-靶點網絡的繪制" 應用R4.0.2軟件對加味小柴胡湯和咳嗽變異性哮喘的相同靶點進行整合，并結合上述關鍵靶點，構建“中藥-有效成分-藥物靶點”網絡信息圖。

1.1.4" KEGG信號通路和GO功能分析" 利用R4.0.2軟件內clusterProfiler插件對所有關鍵靶點進行KEGG和GO分析，根據P值篩選出排名前10位的生物過程、細胞組分、分子功能的數據，繪制柱形圖、氣泡圖和信號通路圖。

1.1.5" PPI網絡構建及核心靶點的篩選" 利用STRING（http：//string-db.org/）數據平臺建立PPI網絡，將加味小柴胡湯和咳嗽變異性哮喘共有的關鍵靶點導入，設置最高互作分值為0.9，去除隱藏的游離節點后共得到204個關鍵靶點，構建PPI網絡圖。

1.1.6" 藥物主要活性成分-核心靶點分子對接驗證

在RCSB PDB（http：//www.rcsb.org/）數據庫檢索和下載潛在靶蛋白的PDB ID，而活性化合物的結構則在中藥系統藥理學數據庫和分析平臺數據庫中以“*mol2”格式下載。通過AutoDock軟件對蛋白受體、化合物配體進行去水、加氫、分配電荷等處理后，保存為“PDBQT”格式。設置蛋白受體中心為對接盒子中心，設定格點盒子大小為126×126×126（每個格點的間距為0.485?），使其包圍整個蛋白受體。重新運算的最大評估數中型為25 000 000，最大的遺傳世代為27 000，遺傳算法的運行數為10，其余參數為默認，選擇Lamarckian遺傳算法進行柔性對接，應用SYBYL-X 2.0軟件繪制模擬對接圖像，并計算有效成分與靶蛋白對接的結合能，一般認為結合能小于-5 kcal/mol代表有良好的結合性[7]。

1.2" 實驗驗證

1.2.1" 藥物與主要試劑" 加味小柴胡湯由柴胡、人參、法半夏、黃芩、炙甘草、大棗、陳皮、生姜組成。柴胡、人參、法半夏、黃芩、炙甘草、大棗、陳皮（南京森貝伽生物科技有限公司，批號：120992、120917、120973、120955、120904、121040、120969）；生姜（河北省滄州中西醫結合醫院藥劑科提供，批號：2112101）。實驗所需中藥飲片經河北省滄州中西醫結合醫院藥劑科鑒定為正品。地塞米松片（大同市利群制藥廠，批準文號：國藥準字H14023268，規格：0.25 mg）。

卵清白蛋白（美國Sigma公司，批號：9006-59-1）；氫氧化鋁佐劑（美國賽默飛世爾科技公司，批號：21645-51-2）；白細胞介素-13（interleukin-13， IL-13）ELISA試劑盒（派普泰克生物科技有限公司，批號：400-16L）；干擾素-γ（interferon-γ， INF-γ）ELISA試劑盒[艾博抗（上海）貿易有限公司，批號：ab221834]；白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）ELISA試劑盒、免疫球蛋白E（immunoglobulin E， IgE）ELISA試劑盒、兔源MAPK抗體、GATA-3抗體（英國Abcam公司，批號分別為ab178013、ab315411、ab4822、ab106625）。

1.2.2" 主要儀器" 1510型酶標儀[賽默飛世爾（上海）儀器有限公司]；JB-P5型包埋機（武漢俊杰電子有限公司）；RM2016型病理切片機（上海徠卡儀器有限公司）；WD-9405B型水平搖床、DYY-7C型電泳儀、WD-9413B型凝膠成像系統、DYCZ-24DN型雙垂直蛋白電泳儀（北京六一生物科技有限公司）。

1.2.3" 動物" 60只3月齡SD雄性大鼠，體質量（180±20） g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，合格證號：北京瓦窯SCXK（京）2021-0011。在河北大學動物實驗中心SPF級動物房進行實驗，飼養溫度（22±2） ℃，濕度50%～60%。本研究通過河北大學動物實驗中心倫理委員會審查，倫理審查編號：IACUC-210812。

1.2.4" 動物分組、造模、給藥與取樣" 將所購SD雄性大鼠按照隨機數字表法分為4組，正常組、模型組、地塞米松片組、加味小柴胡湯組，每組15只。

于實驗室內適應性飼養1周。依照動物模型制備規范[8]制備哮喘大鼠模型，正常組大鼠于實驗第1日和第7日于大鼠雙側足心、雙側腹股溝皮下、腹腔5點注射1 mL生理鹽水，其余大鼠均注射含1 mg卵清白蛋白和200 mg氫氧化鋁佐劑的混合劑1 mL，且實驗第14天開始予1%卵蛋白溶液霧化吸入，每日30 min，共14 d。最后一次霧化吸入后，隨機取1只大鼠進行模型評價，以大鼠出現呼吸頻率加快、腹部肌肉痙攣及口周發紺等癥狀，肺組織出現哮喘樣改變提示造模成功[9]。

造模結束后，正常組和模型組大鼠予0.9%氯化鈉溶液，每次2 mL，每日2次灌胃。地塞米松片組予地塞米松片溶液[0.5 mg/（kg·d）]灌胃，每次2 mL，每日2次[10]。加味小柴胡湯組予加味小柴胡湯濃縮液[5 g/（kg·d）]灌胃，每次2 mL，每日2次。所有大鼠均連續灌胃治療4周。

1.2.5" ELISA檢測" 取血清的上清液，按照ELISA試劑盒說明書檢測血清中炎癥因子IL-6、IL-13、IgE、INF-γ水平。

1.2.6" Western blot檢測" Western blot檢測肺組織中絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）、GATA結合蛋白-3（GATA-binding protein-3， GATA-3）表達水平。取約10 mg肺組織，加入組織裂解液，勻漿后以12 000 r/min（離心半徑6 cm）離心10 min，離心后取上清液，通過聚丙烯酰胺凝膠分離出不同分子量的蛋白，電轉移至硝酸纖維素膜，隨后將硝酸纖維素膜在室溫下用5%的脫脂牛奶在脫色搖床上封閉蛋白質1 h，添加一抗MAPK（1∶1 000）、GATA-3（1∶1 000）4 ℃孵育過夜，次日用TBST充分洗滌后添加二抗，37 ℃孵育1 h后，進行蛋白表達水平的定量分析。

1.3" 統計學方法

采用R 4.0.2軟件及SPSS 22.0統計軟件對數據進行分析。計量資料先予以正態性檢驗，正態分布資料采用“x±s”表示，組內樣本均數差異行獨立t檢驗，組間比較采用單因素方差分析；計數資料用[例（%）]或構成比表示，采用χ2檢驗。均以Plt;0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1" 加味小柴胡湯活性成分及靶點

通過中國天然產物化學成分庫和SymMap數據庫提取1 483個有效成分，經過口服生物利用度和類藥性篩選后獲得有效潛在活性成分，其中人參134個、大棗133個、柴胡349個、法半夏116個、甘草280個、生姜265個、陳皮63個、黃芩143個。將有效成分輸入TCMSP數據庫，搜索與成分相對應的作用靶點，共得到主要化學成分作用靶點274個。加味小柴胡湯“藥物-有效成分-靶點”網絡內重要性排前10位的主要化學成分見表1。

2.2" 加味小柴胡湯與咳嗽變異性哮喘共同靶點

通過數據庫檢索，共得到7 509個咳嗽變異性哮喘相關靶點。將加味小柴胡湯主要化學成分靶點和咳嗽變異性哮喘相關基因取交集后得到204個靶基因。詳見圖1。

2.3" 加味小柴胡湯有效成分治療咳嗽變異性哮喘核心靶點的KEGG信號通路

KEGG富集分析結果顯示，MAPK信號通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B， PI3K-Akt）信號通路、神經營養因子信號通路、調控細胞衰老的信號通路、細胞周期信號通路、細胞凋亡信號通路、黏著斑信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、ErbB受體酪氨酸激酶（ErbB receptor tyrosine kinase， RTK）信號通路、叉頭轉錄因子（forkhead transcription factor， FoxO）信號通路與204個核心靶點密切相關。詳見圖2。

2.4" 加味小柴胡湯有效成分治療咳嗽變異性哮喘核心靶點的GO功能分析

GO功能富集分析包括生物過程、細胞組分、分子功能3個部分。本研究結果中，生物過程主要為蛋白質修飾過程的調控、蛋白質代謝過程的調節、細胞蛋白質代謝過程的調節、細胞周期的調節、分子功能的調節、蛋白質代謝過程的正向調控、蛋白質修飾過程的正向調控、代謝過程的正向調節、細胞蛋白質代謝過程的正向調控、細胞代謝過程的正向調節；細胞組分主要為胞質溶膠、核質、核腔、膜封閉內腔、細胞器腔、核部分、蛋白質復合物、高分子復合物、染色體、染色體部分；分子功能主要涉及酶結合、激酶結合、蛋白激酶結合、依賴于DNA的轉錄正調控、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉錄、轉錄因子結合、蛋白質結構域特異性結合、轉錄負調控、DNA依賴性、蛋白質結合轉錄因子活性、蛋白質復合物。詳見圖3。

2.5" 加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的靶點PPI網絡及核心靶點

將交集靶點上傳至STRING數據庫，物種選擇“Homo sapiens”，互作分數選擇≥0.9，使用Cytoscape對PPI網絡進行拓撲分析，將度值≥2倍中值的節點確定為關鍵靶點，得到表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor， EGFR）、絲裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1， MAPK1）、絲裂原活化蛋白激酶3（mitogen-activated protein kinase 3， MAPK3）、RELA癌基因（RELA proto-oncogene， RELA）、細胞腫瘤抗原p53（cellular tumor antigen p53， TP53）、細胞性骨髓細胞瘤病病毒癌（myelocytomatosis virus carcinoma， MYC）和蛋白激酶Cα（protein kinase Cα， PRKCA）核心靶點。詳見圖4。

2.6" 分子對接驗證結果

由以上分析結果選取加味小柴胡湯中藥化合物槲皮素、豆甾醇、油酸、β-谷甾醇和山柰酚以及靶點EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53進行分子對接。結果顯示，5個活性成分與5個度值最高的核心靶點結合能均小于-5 kcal/mol，表明小分子配體與蛋白結合的構象穩定。詳見圖5、表2。

2.7" 各組大鼠炎癥因子水平比較

與正常組比較，模型組大鼠中IL-6、IL-13、IgE升高（Plt;0.05），INF-γ降低（Plt;0.05）。與模型組比較，地塞米松片組及加味小柴胡湯組大鼠IL-6、IL-13、IgE降低（Plt;0.05），INF-γ升高（Plt;0.05）。與地塞米松片組比較，加味小柴胡湯組大鼠IL-6、IL-13、IgE降低（Plt;0.05），INF-γ升高（Plt;0.05）。詳見表3。

2.8" 各組大鼠肺組織中MAPK、GATA-3蛋白表達水平比較

與正常組比較，模型組MAPK、GATA-3蛋白表達水平升高（Plt;0.05）；與模型組比較，地塞米松片組和加味小柴胡湯組MAPK、GATA-3蛋白表達水平降低（Plt;0.05）。詳見圖6。

3 討論

咳嗽變異性哮喘是慢性咳嗽的最常見原因。中國流行病學調查結果顯示，咳嗽變異性哮喘占慢性咳嗽病例的1/3[11]。在臨床治療方面，多使用吸入性皮質類固醇聯合長效β2受體激動劑維持治療。相關研究發現，停藥6個月后高達67%的咳嗽變異性哮喘患者咳嗽癥狀評分增加，肺功能和嗜酸性氣道炎癥加重[12]。為了緩解咳嗽變異性哮喘患者的癥狀，通常需要多種治療。故本研究結合咳嗽變異性哮喘的病因特點，預測加味小柴胡湯對咳嗽變異性哮喘具有一定的治療作用，并基于網絡藥理學，對加味小柴胡湯的有效成分和疾病靶點進行分析，建立藥物-靶點-疾病的網絡關系，最后應用分子對接和動物實驗驗證網絡藥理學結果。

PPI網絡圖分析結果表明，加味小柴胡湯的有效成分主要作用于EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53、MYC、PRKCA多個核心靶點，其中，EGFR/MAPK/NF-κB/RELA通路介導的炎癥反應可能是加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的關鍵靶點。先前研究發現，空氣污染物、病毒和細菌等環境因素會誘導MAPK蛋白（ERK、JNK和p38）的活化，激活MAPK/NF-κB/RELA信號通路，使IL-1β、IL-6和TNF-α等炎癥因子的表達上調，誘導嗜酸性粒細胞浸潤肺組織，直接引起氣道炎癥和氣道高反應性，從而導致咳嗽變異性哮喘病情加重[13]。QI等[14]發現，柚皮素通過調節P13K/Akt、Erk/JNK信號通路上調HO-1的表達，抑制了氧化應激反應對肺組織的損傷，進一步減輕了炎癥反應，從而起到肺保護作用。CHANJITWIRIYA等[15]研究發現，槲皮素通過促進VEGFA和TNF的釋放作用于膜EGFRs和TNFR1，從而影響Ras、Raf、MEK的激活以及MAPK1和MAPK3的磷酸化，減輕了炎癥反應，有助于咳嗽變異性哮喘的治療。另外，相關實驗研究發現，山柰酚、豆甾醇、β-谷甾醇可通過調節雌激素信號通路上MAPK核心靶點的表達，抑制MAPK/NF-κB的信號傳導，調控細胞因子的水平，從而發揮抗炎作用[16-17]。由上述研究可知，MAPK/NF-κB/RELA信號通路可能是加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的關鍵靶點。

另外，KEGG通路分析發現，TP53、MYC、PRKCA信號通路可能是加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的相關靶點。既往研究發現，P53信號通路在調節細胞周期方面具有核心作用，其中TP53為關鍵基因，可干擾抗凋亡因子和銅的結合，觸發促凋亡蛋白從線粒體中釋放并最終導致肺組織細胞死亡[18]。除此之外，最新的實驗研究發現，P53可通過誘導MYC活化，激活Fas/FasR、TNF-α和TNF相關的凋亡誘導配體的轉錄和信號傳導來誘導細胞凋亡[19]。另一項研究發現，PRKCA為PI3K/Akt信號通路的重要因子，可促進Akt級聯的磷酸化，誘導Bax轉位，進而促進線粒體內凋亡蛋白的釋放，加速細胞凋亡[20]。AMMAR等[21]發現，柚皮素可通過調節P53信號通路，促進Bcl-2的表達和降低Bax的表達，抑制肺組織細胞的凋亡，從而延緩咳嗽變異性哮喘的進程。相關研究發現，槲皮素可通過調節MYC基因的表達，調控Wnt/β-catenin信號通路，抑制肺組織細胞的凋亡，從而減輕氣道組織的損傷[22-23]。由上述研究可知，TP53、MYC、PRKCA可能是加味小柴胡湯治療咳嗽變異性哮喘的相關靶點。

綜上所述，加味小柴胡湯具有宣肺化痰、補脾益肺、調和營衛的功效，其對咳嗽變異性哮喘的治療或許具有積極作用，作用機制可能與EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53、MYC和PRKCA靶點有關，后期有待于研究組進一步實驗和臨床驗證。

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