視網(wǎng)膜病變早產(chǎn)兒血清細(xì)胞間黏附分子-1血管生成素樣蛋白4表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性

高雅 羅慧娟 張李軍

【摘要】 目的 檢測早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（retinopathy of prematurity，ROP）血清細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion

molecule-1，ICAM-1）和血管生成素樣蛋白4（angiopoietin-like protein 4，ANGPTL4）的表達(dá)情況，并探究其表達(dá)水平與ROP預(yù)后的相關(guān)性。方法 對宜都市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科出生的180例早產(chǎn)兒進(jìn)行眼底篩查，視網(wǎng)膜病變的36例早產(chǎn)兒為ROP組，無視網(wǎng)膜病變的144例早產(chǎn)兒為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組研究對象血清ICAM-1、ANGPTL4的表達(dá)水平，通過研究對象工作特征曲線（ROC）評估血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平對ROP的診斷價(jià)值，分析ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平與患兒預(yù)后不良的關(guān)系。結(jié)果 ROP組血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平顯著高于對照組（P<0.05）。血清ICAM-1、ANGPTL4診斷ROP的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為0.931、0.731，截?cái)嘀捣謩e為542.24 pg/mL、40.77 μg/mL;聯(lián)合診斷ROP的AUC為0.946，特異度為98.6%，高于單項(xiàng)診斷（77.8%、89.6%）。高表達(dá)ICAM-1、ANGPTL4組患兒預(yù)后不良發(fā)生率明顯高于低ICAM-1、ANGPTL4組（P<0.05）。結(jié)論 ROP患兒血清ICAM-1和ANGPTL4表達(dá)水平升高，與預(yù)后密切相關(guān)，可作為早期診斷及預(yù)后評估的潛在生物學(xué)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變;細(xì)胞間黏附分子-1;血管生成素樣蛋白4

文章編號：1672-1721（2024）05-0095-03? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?中國圖書分類號：R774.1

早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（ROP）是一種發(fā)生于早產(chǎn)兒、低體質(zhì)量兒中的病理性視網(wǎng)膜血管增殖性疾病。患兒多存在視網(wǎng)膜缺血或增生性病變，還可見新生血管形成[1]。ROP可導(dǎo)致患兒近視、弱視、斜視，嚴(yán)重時可導(dǎo)致患兒永久性失明，嚴(yán)重影響患兒的健康[2]。當(dāng)前，臨床尚未明確ROP發(fā)病機(jī)制。細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）屬于免疫球蛋白超家族中的重要成員，已有臨床表明ICAM-1可能影響糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）[3]。

血管生成素樣蛋白4（ANGPTL4）是機(jī)體內(nèi)一種重要的分泌型糖蛋白，研究顯示ANGPTL4具有促進(jìn)DR的作用[4]。ICAM-1、ANGPTL4與ROP進(jìn)展關(guān)系尚無研究報(bào)道。本研究擬通過檢測兩者在ROP患兒血清表達(dá)水平，探究與患兒預(yù)后相關(guān)性，輔助臨床診治。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年9月—2019年12月在宜都市第一人民醫(yī)院出生的180例早產(chǎn)兒為研究對象，男性105例，女性75例，出生體質(zhì)量860～2 410 g，出生胎齡28～36周。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會眼科分會眼底病學(xué)組制定的《中國早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變篩查指南（2014）》[5]對早產(chǎn)兒進(jìn)行眼底篩查，視網(wǎng)膜病變的36例早產(chǎn)兒為ROP組，無視網(wǎng)膜病變的144例早產(chǎn)兒為對照組。ROP組男性20例，女性16例;出生體質(zhì)量867～2 390 g，平均（1 425.41±259.68）g;出生胎齡28～36周，平均（30.64±1.71）周;Ⅰ期—Ⅲ期閾值病變25例，Ⅳ期—Ⅴ期閾值病變11例;輸血9例，貧血10例。對照組男性85例，女性59例;出生體質(zhì)量860～2 410 g，平均（1 396.57±271.24）g;出生胎齡29～36周，平均（31.05±1.82）周;輸血21例，貧血16例。2組基線資料對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

ROP組納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒均接受眼底檢查并確診為ROP;出生體質(zhì)量≤2 500 g或出生胎齡≤36周;患兒臨床資料無缺失。

排除標(biāo)準(zhǔn)：先天性畸形;先天性內(nèi)分泌疾病;合并其他眼科疾病。

1.2 主要試劑與儀器

ICAM-1酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosor-bent assay，ELISA）法試劑盒購自廈門侖昌碩公司，ANGPTL4 ELISA試劑盒購自武漢默沙克公司，其他化學(xué)藥品均購自上海悅耳化學(xué)品有限公司。離心機(jī)購自湖南赫西儀器裝備有限公司，型號為H/T12MM。

1.3 研究方法

1.3.1 采集樣品

確診后次日晨起抽取靜脈血（空腹）2 mL，離心10 min取血清并置于-80 ℃冰箱保存。

1.3.2 檢測血清ICAM-1、ANGPTL4水平

所有受試者用ELISA法檢測血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平。酶標(biāo)板分別設(shè)待測樣品孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔，分別加血清100 μL、標(biāo)準(zhǔn)品100 μL、樣品稀釋液100 μL，覆膜后在36 ℃環(huán)境下孵育90 min。倒掉孔內(nèi)液體，甩干后分別加入生物素化抗體100 μL，覆膜后在36 ℃環(huán)境下孵育1 h。倒掉液體，浸泡30 s洗板，重復(fù)3次。然后甩干液體，分別加酶結(jié)合物液100 μL，覆膜后在36 ℃環(huán)境下孵育30 min。倒掉液體，甩干，浸泡30 s洗板，重復(fù)5次。每孔分別加顯色劑TMB 90 μL，覆膜后在36 ℃環(huán)境下孵育15 min，加終止液50 μL，終止反應(yīng)。當(dāng)藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色時立即使用酶標(biāo)儀測量3個孔的吸光度（450 nm波長下）。分別以標(biāo)準(zhǔn)品、吸光度為橫、縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算ICAM-1、ANGPTL4濃度（即表達(dá)水平）。

1.4 隨訪及預(yù)后評估

對本研究中涉及到的ROP Ⅲ期閾值病變患兒行激光治療，Ⅳ期—Ⅴ期閾值病變患兒行手術(shù)治療，進(jìn)行門診復(fù)查。根據(jù)治療效果[6]對患兒預(yù)后進(jìn)行評估，若視網(wǎng)膜血管區(qū)病變完全消退為預(yù)后良好，反之為預(yù)后不良。隨訪3個月，2020年3月31日停止隨訪，隨訪截止期以患兒出現(xiàn)預(yù)后不良為準(zhǔn)，中位隨訪時間1.43個月且無失訪。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，行χ2檢驗(yàn);符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用x±s表示，組間比較行t檢驗(yàn);ROC評估血清ICAM-1、ANGPTL4對ROP的診斷價(jià)值;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平

ROP組血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)水平均比對照組高（P<0.05），見表1。

2.2 血清ICAM-1、ANGPTL4對眼底視網(wǎng)膜病變早產(chǎn)兒的診斷價(jià)值

血清ICAM-1、ANGPTL4診斷ROP的AUC分別為0.931、0.731，截?cái)嘀捣謩e為542.24 pg/mL、40.77 μg/mL，靈敏度分別為91.7%、55.6%，特異度分別為77.8%、89.6%。兩者聯(lián)合診斷的AUC為0.946，靈敏度為77.8%，特異度為98.6%，見圖1。

2.3 血清ICAM-1、ANGPTL4表達(dá)與患兒預(yù)后的相關(guān)性

以血清ICAM-1、ANGPTL4的截?cái)嘀祵OP組分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，其中高ICAM-1組20例、低ICAM-1組16例，高ANGPTL4組19例、低ANGPTL4組17例。高ICAM-1組及高ANGPTL4組患兒預(yù)后不良發(fā)生率均明顯高于對應(yīng)的低表達(dá)組（P<0.05），見表2。

3 討論

ROP是發(fā)生于新生兒中的一種眼底疾病。該疾病以視網(wǎng)膜血管異常增殖為主要臨床特征，是損害兒童視力和導(dǎo)致兒童永久性失明的重要原因之一[7]。ROP在全世界范圍內(nèi)的發(fā)病率為10%左右，占致盲因素的6%～18%，影響患兒健康及生長發(fā)育。吸氧、輸血、低胎齡等均是影響ROP發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素。導(dǎo)致ROP發(fā)生的主要機(jī)制可能是高氧或缺氧環(huán)境影響視網(wǎng)膜毛細(xì)血管生長受阻或血管內(nèi)皮生長因子等血管生成因子水平異常升高，最終導(dǎo)致視網(wǎng)膜無血管區(qū)的血管組織生成，患兒視力受損。

細(xì)胞黏附因子（cellular adhesion molecules，CAMs）是一種糖蛋白，主要分布于細(xì)胞表面，是細(xì)胞間、細(xì)胞與胞外基質(zhì)功能連接的載體。CAMs通過與相應(yīng)受體結(jié)合進(jìn)行細(xì)胞間信號傳遞，進(jìn)而調(diào)控機(jī)體功能。ICAM-1主要存在于巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、T細(xì)胞等，屬于CAMs中免疫球蛋白家族中重要的細(xì)胞黏附因子之一。有研究報(bào)道，ICAM-1在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性中發(fā)揮重要作用[8]。李開元等[9]研究發(fā)現(xiàn)，老年DR患者血清ICAM-1水平異常升高，推測與病情進(jìn)展、微血管損傷關(guān)系密切。本研究結(jié)果顯示，ROP患兒血清ICAM-1表達(dá)水平較對照組高，提示ICAM-1可能通過調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-1、腫瘤壞死因子-β等炎癥因子水平，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)患兒視網(wǎng)膜微血管損傷發(fā)生，促進(jìn)ROP發(fā)生發(fā)展。粒細(xì)胞表面β2整合素與ICAM-1的相互作用，導(dǎo)致粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞緊密黏附，進(jìn)而釋放氧自由基等細(xì)胞毒性因子，最終導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管通透性改變和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。這可能是ICAM-1水平升高影響ROP發(fā)生發(fā)展的主要原因和機(jī)制之一。王夢斐等[3]研究發(fā)現(xiàn)，ICAM-1在DR患者中表達(dá)水平升高，與DR的發(fā)生密切相關(guān)，且對DR具有一定的診斷價(jià)值。本研究結(jié)果中，血清ICAM-1診斷ROP的AUC為0.931，截?cái)嘀禐?42.24 pg/mL，靈敏度和特異度分別為91.7%、77.8%，提示ICAM-1對ROP的診斷價(jià)值較高，可作為一種臨床指標(biāo)評估ROP。

ANGPTL4屬于血管生成素樣蛋白家族，是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的分泌性蛋白。該物質(zhì)相對分子質(zhì)量為45 200，定位于染色體19p13.3上，可參與細(xì)胞凋亡、血管生成、糖脂代謝等過程[10]。ANGPTL4主要表達(dá)于脂肪組織中。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ANGPTL4在眼底中少量表達(dá)，在眼部疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮非常重要的作用。有研究顯示，ANGPTL4在DR患者血清中表達(dá)水平升高，可能促進(jìn)DR新生血管形成[11]。肝癌組織中ANGPTL4也存在水平異常升高情況，推測與微血管生成相關(guān)[12]。本研究中，ROP患兒血清ANGPTL4水平明顯高于無ROP早產(chǎn)兒，提示ANGPTL4水平升高可能與ROP發(fā)生有關(guān)。ANGPTL4水平可能通過促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子等分泌上調(diào)，誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管生成，最終促進(jìn)ROP發(fā)展。ANGPTL4還可能與整合素α5β1、缺氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1α相互作用，減弱了視網(wǎng)膜部位的血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能或增加了視網(wǎng)膜血管病變通透性，進(jìn)一步加重視網(wǎng)膜病變。本研究通過ROC分析表明，血清ANGPTL4診斷ROP的AUC為0.731，截?cái)嘀禐?0.77 μg/mL，靈敏度及特異度分別為55.6%、89.6%，提示血清ANGPTL4對診斷ROP有一定價(jià)值，但診斷靈敏度較低。為提高臨床診斷價(jià)值，本研究將二者聯(lián)合診斷，結(jié)果顯示，聯(lián)合診斷AUC為0.946，遠(yuǎn)高于單項(xiàng)診斷，提示血清ICAM-1、ANGPTL4聯(lián)合檢測對ROP診斷效果優(yōu)于二者單獨(dú)檢測。二者聯(lián)合檢測能有效幫助醫(yī)師盡早診斷ROP，從而及時采取治療措施，改善患兒預(yù)后。

本研究根據(jù)患兒的預(yù)后情況進(jìn)行分組，發(fā)現(xiàn)高ICAM-1、ANGPTL4患兒預(yù)后不良發(fā)生率均顯著高于對應(yīng)的低表達(dá)組，提示血清ICAM-1、ANGPTL4水平升高可能與治療后ROP患兒視網(wǎng)膜無血管區(qū)病變未完全消退等預(yù)后不良密切相關(guān)。血清ICAM-1、ANGPTL4水平上調(diào)可能通過影響血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖水平影響ROP患兒預(yù)后。治療后密切關(guān)注二者水平變化，有助于及時評估ROP患兒恢復(fù)情況并給予相應(yīng)治療，降低ROP患兒預(yù)后不良發(fā)生率。

綜上所述，ROP患兒血清中ICAM-1和ANGPTL4表達(dá)水平明顯升高，與患兒預(yù)后不良密切相關(guān)，可作為潛在生物學(xué)指標(biāo)，對臨床診治、評估有積極意義。

參考文獻(xiàn)

[1] QUINN G E，YING G S，BELL E F，et al.Incidence and early course of retinopathy of prematurity：secondary analysis of the postnatal growth and retinopathy of prematurity（G-ROP）study[J].JAMA Ophthalmol，2018，136（12）：1383-1389.

[2] BAS A Y，DEMIREL N，KOC E，et al.Incidence，risk factors and severity of retinopathy of prematurity in Turkey（TR-ROP study）：a

prospective，multicentre study in 69 neonatal intensive care units[J].Br J Ophthalmol，2018，102（12）：1711-1716.

[3] 王夢斐，王瑞夫，劉毅，等.四種血管內(nèi)皮功能指標(biāo)在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用[J].國際眼科雜志，2017，17（1）：110-112.

[4] 程四華，童巧珍，趙艷，等.康柏西普輔助玻璃體切除治療PDR及對炎癥因子及ANGPTL4的影響[J].國際眼科雜志，2019，19（12）：2093-2096.

[5] 中華醫(yī)學(xué)會眼科分會眼底病學(xué)組.中國早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變篩查指南（2014）[J].中華眼科雜志，2014，50（12）：933-935.

[6] 孫爽.早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變激光光凝治療效果及預(yù)后影響因素[J].實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2017，17（9）：98，123.

[7] DROST F J，KEUNEN K，MOESKOPS P，et al.Severe retinopathy of prematurity is associated with reduced cerebellar and brainstem volumes at term and neurodevelopmental deficits at 2 years[J].Pediatr Res，2018，83（4）：818-824.

[8] 張曉鳴，朱海濤，常明.血管細(xì)胞間黏附分子-1在毛細(xì)支氣管炎患兒中的表達(dá)及意義[J].中國當(dāng)代兒科雜志，2018，20（1）：43-47.

[9] 李開元，艾明.血清ICAM-1、VEGF水平與老年糖尿病視網(wǎng)膜病變患者微血管損傷的相關(guān)性研究[J].中華保健醫(yī)學(xué)雜志，2019，21（1）：39-41.

[10] 卜艷龍，劉媛媛，卞文.2型糖尿病下肢血管病變的血清脂肪因子血管生成素樣蛋白4水平及其臨床意義研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019，18（23）：2540-2543.

[11] 梁迎娟.ANGPTL4和HMBG-1在增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變中的表達(dá)及其相關(guān)研究[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2017.

[12] 衛(wèi)銀銀，吳方雄，閔亞莉，等.ANGPTL4的表達(dá)與肝癌微血管生成的關(guān)系[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，49（5）：457-460.

（編輯：徐亞麗）

作者簡介：高? 雅，女，本科，主治醫(yī)師。