電針風(fēng)池穴對頸性高血壓模型兔血清腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)指標(biāo)的影響

方浩亮 劉 芳 謝思維 顧逸文 楊雨燁

頸性高血壓是一種繼發(fā)性高血壓，由于頸項(xiàng)部位肌肉群和椎體失衡累及血管及神經(jīng)叢而導(dǎo)致血壓升高，可出現(xiàn)眩暈、頭昏、肢體麻木等癥狀[1]。在頸椎病患者人群中，約18%患者出現(xiàn)血壓升高[2]。中醫(yī)傳統(tǒng)療法廣泛應(yīng)用于高血壓的預(yù)防和治療，包括針刺療法。風(fēng)池穴，因其所處的特殊解剖部位及穴位主治功效，是臨床治療高血壓最常用的穴位之一，研究表明選取風(fēng)池穴進(jìn)行針刺治療能有效發(fā)揮降壓作用[3]。然而，電針風(fēng)池穴對頸性高血壓的治療機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用頸上交感神經(jīng)節(jié)牽拉法建立家兔頸性高血壓模型，經(jīng)電針治療后觀測家兔血清腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS） 相關(guān)指標(biāo)及股動(dòng)脈平均動(dòng)脈血壓（mean arterial pressure，MAP）變化情況，旨在探討電針風(fēng)池穴對頸性高血壓模型兔RAAS 指標(biāo)的影響，以期為針灸治療頸性高血壓提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 成年健康新西蘭家兔18 只，普通級，體質(zhì)量2.3～2.7 kg，雌雄各半，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SYXK（浙）2021-0012。單籠飼養(yǎng)，保證動(dòng)物自由飲水和攝食，室內(nèi)溫度15～25 ℃，相對濕度40%～50%，12 h 明暗交替節(jié)律光照。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將家兔按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組和電針組，每組6只。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：IACUC-2021 0705-11）。

1.2 主要儀器與試劑 SEM 掃描電子顯微鏡（HITACH 公司，型號SU1510）、生物信號采集處理系統(tǒng)（南京美易科技有限公司，型號MedLab-U/4C501H）、life science（深圳市瑞沃德生命科技有限公司，型號Catalog No：R540IE）、酶標(biāo)儀（美國Rayto，型號RT-6100）；血管緊張素原（angiotensinogen，AGT）、血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）、醛固酮（aldosterone，ALD）及去甲腎上腺素（nore-pinephrine，NE）兔酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測盒（批 號MB -9046A、MB -9060A、MB -9047A、MB -9045A，江蘇酶聯(lián)生物科技有限公司）。

1.3 造模方法 參考文獻(xiàn)造模方法[4]，通過牽拉頸上交感神經(jīng)節(jié)法建立兔頸性高血壓模型。正常組不予造模，模型組和電針組于同一時(shí)間進(jìn)行造模。造模方法：家兔麻醉后，置于固定架呈仰臥位。分離股動(dòng)脈，行股動(dòng)脈插口，接MedLab 生物信號采集處理系統(tǒng)記錄股動(dòng)脈血壓。作頸正中切口，暴露雙側(cè)頸交感神經(jīng)和頸上交感神經(jīng)節(jié)，一側(cè)頸上交感神經(jīng)節(jié)穿線備用。每只家兔用20 g 重量向腹側(cè)上方牽拉一側(cè)頸上交感神經(jīng)節(jié)，牽拉和放松時(shí)間均持續(xù)10 min，交替2次。分別于牽拉前和牽拉結(jié)束后，記錄股動(dòng)脈血壓，血壓顯著升高者視為造模成功。

1.4 干預(yù)方法 正常組：僅在電針組治療時(shí)對家兔給予相同的固定。模型組：造模完成后，僅在電針組治療時(shí)對兔給予相同的固定。電針組：造模成功后，即日開始針刺雙側(cè)風(fēng)池穴治療，取穴參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[5]，毫針斜刺深度5 mm，電針連接風(fēng)池穴，選取疏密波，頻率2 Hz，強(qiáng)度2 mA，以家兔安靜無躁動(dòng)且耳廓輕度煽動(dòng)或肌肉局部收縮為度。每次治療30 min，1 天1 次，連續(xù)治療7 d。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 體質(zhì)量測量 分別在造模前、造模后第1、4 及7 天采用電子天平測量各組實(shí)驗(yàn)兔體質(zhì)量變化。

1.5.2 平均動(dòng)脈血壓測量 造模前及治療前、后各檢測1 次。分離股動(dòng)脈，行股動(dòng)脈插管，接MedLab 生物信號采集處理系統(tǒng)監(jiān)測操作過程中的股動(dòng)脈收縮壓、舒張壓，測量三次，取平均值，計(jì)算平均動(dòng)脈血壓。

1.5.3 血清AGT、AngⅡ、ALD 及NE 檢測 各實(shí)驗(yàn)組家兔經(jīng)治療處理7 d 后，于清晨空腹外周采血3 mL，3000 r/min 離心15 min 分離血清，低溫保存?zhèn)錂z。使用ELISA 試劑盒檢測血清AGT、AngⅡ、ALD 及NE 水平，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，選擇相應(yīng)的波長，用多功能酶標(biāo)儀測定樣品的吸光值，并用樣品濃度進(jìn)行標(biāo)化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件包建立實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較使用配對t 檢驗(yàn)。以P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組家兔體質(zhì)量比較 造模期間，電針組由于家兔不耐受麻醉藥物劑量而出現(xiàn)麻醉致死1 例。造模前，各組家兔體質(zhì)量組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。隨著飼養(yǎng)時(shí)間的增加，正常組家兔體質(zhì)量呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢。造模后1 d，各組家兔組間體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后4 d，模型組家兔體質(zhì)量明顯低于正常組（P＜0.05），電針組家兔體質(zhì)量與正常組、模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后7 d，模型組家兔體質(zhì)量仍明顯低于正常組（P＜0.05），電針組與正常組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，電針組家兔體質(zhì)量更高（P＜0.05）。見表1。

表1 各組家兔體質(zhì)量比較（g，±s）

表1 各組家兔體質(zhì)量比較（g，±s）

注：電針組造模，予毫針斜刺風(fēng)池穴5 mm，電針疏密波2 Hz 2 mA，固定30 min；模型組造模，固定30 min；正常組固定30 min；與正常組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05

組別正常組模型組電針組兔數(shù)665造模前2385.22±102.04 2372.38±149.14 2392.95±140.45造模后1 d 2504.67±106.11 2389.10±97.33 2411.55±194.83造模后4 d 2508.33±97.78 2371.00±73.11a 2494.17±146.91造模后7 d 2651.00±97.54 2480.83±82.64a 2625.83±138.56b

2.2 各組家兔平均動(dòng)脈血壓比較 造模前，各組家兔平均動(dòng)脈血壓均在正常值范圍內(nèi)，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模結(jié)束后，模型組、電針組家兔平均動(dòng)脈血壓較同組造模前均明顯升高（P＜0.01）；與同期正常組比較，模型組、電針組家兔平均動(dòng)脈血壓均升高（P＜0.01 或P＜0.05），且模型組與電針組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示造模成功。治療7 d 后，模型組家兔平均動(dòng)脈血壓較治療前無明顯變化（P＞0.05），電針組家兔平均動(dòng)脈血壓較治療前明顯降低（P＜0.05）；兩組組間比較，電針組家兔平均動(dòng)脈血壓較模型組明顯降低（P＜0.05）；與同期正常組比較，模型組家兔平均動(dòng)脈血壓顯著升高（P＜0.01），電針組家兔經(jīng)治療后平均動(dòng)脈血壓與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組家兔治療前后平均動(dòng)脈血壓比較（mmHg，±s）

表2 各組家兔治療前后平均動(dòng)脈血壓比較（mmHg，±s）

注：電針組造模，予毫針斜刺風(fēng)池穴5 mm，電針疏密波2 Hz 2 mA，固定30 min；模型組造模，固定30 min；正常組固定30 min；與同組造模前比較，aP＜0.01；與同組治療前比較，bP＜0.05；與同期正常組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與同期模型組比較，eP＜0.05

組別正常組模型組電針組兔數(shù)665造模前84.33±7.45 80.17±10.21 77.60±9.96治療前80.67±5.28 94.17±7.96ad 89.40±6.19ac治療后79.33±2.66 91.50±6.86d 81.40±4.04be

2.3 各組家兔治療后血清AGT、AngⅡ、ALD 和NE水平比較 治療后，與正常組比較，模型組家兔血清AGT、ALD 及NE 含量均升高（P＜0.05 或P＜0.01），AngⅡ含量與正常組比較無明顯差異（P＞0.05）。電針組家兔血清AGT、AngⅡ、ALD 及NE 水平與正常組比較均無明顯差異（P＞0.05）。與模型組比較，電針組家兔血清ALD 明顯降低（P＜0.05），血清AGT、AngⅡ及NE 含量均無明顯差異（P＞0.05）。見表3。

表3 各組家兔治療后血清AGT、AngⅡ、ALD 及NE 含量比較（pg/mL，±s）

表3 各組家兔治療后血清AGT、AngⅡ、ALD 及NE 含量比較（pg/mL，±s）

注：電針組造模，予毫針斜刺風(fēng)池穴5 mm，電針疏密波2 Hz 2 mA，固定30 min；模型組造模，固定30 min；正常組固定30 min；AGT 為血管緊張素原；AngⅡ?yàn)檠芫o張素Ⅱ；ALD 為醛固酮；NE 為去甲腎上腺素；與正常組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05

組別正常組模型組電針組兔數(shù)665 AGT 71.81±17.40 126.82±43.95b 95.12±26.18 AngⅡ86.04±20.03 118.67±45.62 91.53±17.53 ALD 103.33±29.83 160.07±38.14a 116.32±36.86c NE 19.29±4.48 32.34±12.49a 23.89±8.71

3 討 論

頸性高血壓以眩暈為主要癥狀，可歸于中醫(yī)學(xué)“眩暈”病范疇，肝腎陰虛、肝陽上亢為其常見中醫(yī)證型。風(fēng)池穴是臨床改善眩暈癥狀及發(fā)揮降壓作用的常用穴位[6]。風(fēng)池穴為足少陽膽經(jīng)穴位，足少陽膽經(jīng)與陽維脈會(huì)于風(fēng)池，又稱“諸陽之會(huì)”[3]。風(fēng)性宣散，其性屬木；而池屬水，能夠濡養(yǎng)風(fēng)木，故風(fēng)池穴具平肝熄風(fēng)之效，可治療內(nèi)外風(fēng)動(dòng)[7]。

RAAS 是調(diào)節(jié)血壓的重要途徑之一，在實(shí)現(xiàn)循環(huán)血容量、水鹽代謝以及血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性的調(diào)控過程中扮演重要角色。AngⅡ是RAAS 系統(tǒng)中導(dǎo)致血壓升高的最主要效應(yīng)物質(zhì)，可與對應(yīng)靶器官或組織的AngⅡ1 型受體結(jié)合，直接作用于小動(dòng)脈，引起平滑肌收縮；刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶，促進(jìn)ALD 分泌引起水鈉潴留，增加血容量；同時(shí)刺激交感神經(jīng)元，使NE 分泌增加[8-9]。高血壓狀態(tài)下血清AngⅡ、ALD 含量明顯升高，兩者水平檢測對于診斷與治療繼發(fā)性高血壓具有至關(guān)重要的意義。

目前對于RAAS 系統(tǒng)降壓機(jī)制的研究主要集中于原發(fā)性高血壓領(lǐng)域，電針治療能夠降低AngⅡ、ALD 及NE 水平，從而降低血壓[10]。相關(guān)研究證實(shí)針刺可降低高血壓動(dòng)物模型腎素活性，減少AngⅡ、ALD 含量，使血管擴(kuò)張，外周阻力下降，對RAAS 起到良性調(diào)節(jié)作用，從而達(dá)到降壓目的[11]。臨床選取風(fēng)池穴治療原發(fā)性高血壓，效果顯著，可以減少血液中腫瘤壞死因子-α 等炎性因子分泌，緩解血管纖維化，從而改善血壓狀況[12]。對于頸性高血壓主要以臨床研究為主，目前其公認(rèn)發(fā)病機(jī)制為因頸部肌肉及骨關(guān)節(jié)失衡引發(fā)血管及神經(jīng)功能紊亂從而導(dǎo)致血壓升高，可選取風(fēng)池穴等頸部穴位進(jìn)行針刺、針刀及正骨等治療，松解頸部肌群并恢復(fù)軟組織力學(xué)平衡狀態(tài)，從而解除頸部血管及神經(jīng)受壓情況，達(dá)到降壓目的[13-16]。研究發(fā)現(xiàn)電針風(fēng)池穴能夠改善實(shí)驗(yàn)小鼠腦供血量，以緩解其因動(dòng)脈供血不足引發(fā)的頭痛癥狀[17]。針刺風(fēng)池穴能夠平衡頸區(qū)肌群，改善其緊張度從而緩解神經(jīng)及血管壓迫以發(fā)揮降壓作用[18]。

本研究結(jié)果顯示，電針風(fēng)池穴能夠有效降低頸性高血壓家兔平均動(dòng)脈血壓，同時(shí)能夠維持家兔血清AngⅡ、ALD 以及NE 含量處于正常穩(wěn)定范圍，并降低其血清AGT 含量。因此，我們推測：電針風(fēng)池穴改善頸性高血壓模型兔血壓的機(jī)制不僅與緩解頸部肌群痙攣、改善血管及神經(jīng)受壓情況相關(guān)，與抑制RAAS 系統(tǒng)活性亦存在關(guān)聯(lián)，但由于實(shí)驗(yàn)樣本量受限，具有偶然性及誤差，仍需要進(jìn)一步擴(kuò)大研究。