苯氧威·噻嗪酮懸浮劑的高效液相色譜分析方法

杜秀利，王廣成，李 婷，高立明，吳春先，許艷秋*

(1.瀘定縣農產品質量安全(質量檢測)中心，四川 甘孜 626100；2.四川省農業農村廳植物保護站，四川 成都 610045)

苯氧威(Fenoxycarb)，又名雙氧威、苯醚威，CAS登記號79127-80-3，是一種非萜烯類氨基甲酸酯類化合物。苯氧威既能破壞昆蟲的內分泌激素，干擾昆蟲發育和變態的過程，殺滅蟲卵，又有胃毒和觸殺作用，對鱗翅目、雙翅目等害蟲有特效，是一種廣譜、低毒的昆蟲生長調節劑和殺蟲劑[1-2]。噻嗪酮(Buprofezin)，CAS登記號69327-76-0，是一種噻二嗪類昆蟲生長調節劑，屬昆蟲蛻皮抑制劑，同時也具有觸殺和胃毒作用，對鞘翅目，部分同翅目及蜱螨目害蟲具有持效殺幼蟲活性[3]。目前我國登記的苯氧威與噻嗪酮的混配制劑主要用于柑橘樹上蚧殼蟲的防治。

目前公開報道的文獻和標準中已有苯氧威[1-2]和噻嗪酮[4-5]相關的檢測方法，但未查見二者混配制劑或苯氧威懸浮劑單制劑檢測方法的相關報道，因此，本文采用高效液相色譜儀建立了一種同時測定產品中苯氧威和噻嗪酮有效成分含量的方法，該方法方便、高效、準確，是一種理想的分析方法，可用于苯氧威·噻嗪酮混配制劑，及苯氧威懸浮劑、噻嗪酮懸浮劑等相關產品的質量控制和檢測。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑 苯氧威標準品，99.71%；噻嗪酮標準品，99.0%；苯氧威·噻嗪酮懸浮劑，25%；甲醇，色譜純；超純水。

1.2 儀器條件 高效液相色譜儀：Agilent 1260，配DAD檢測器，美國安捷倫科技有限公司；電子天平：AB204-S，瑞士梅特勒-托利多集團；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

色譜柱：Eclipse plus C18，5.0 μm，250 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱；流動相：Ψ(甲醇+水)=80+20；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm；進樣體積：3.0 μL。采用外標法，峰面積定量。在該色譜條件下，苯氧威的保留時間約為5.3 min，噻嗪酮的保留時間約為11.3 min。典型色譜圖(圖1)。

圖1 相同條件下苯氧威+噻嗪酮標樣和懸浮劑樣品的液相色譜圖

1.3 檢測步驟

1.3.1 標準溶液配制 準確稱取苯氧威標準品約0.03 g(精確至0.000 2 g)，噻嗪酮標準品約0.12 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL的容量瓶，加入適量甲醇超聲至完全溶解后，放置至恢復室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液配置 準確稱取含苯氧威約0.03 g的苯氧威·噻嗪酮樣品(精確至0.000 2 g)，置于50 mL的容量瓶，用水分散后用甲醇溶解，超聲至完全溶解后，放置至恢復室溫，用甲醇稀釋至刻度，用0.45 μm孔徑濾膜過濾，收集濾液備用。

1.3.3 進樣分析 按前文所述的儀器條件運行液相色譜儀，待儀器完全穩定，既基線平穩且無明顯波動，且連續2次進樣的標準溶液苯氧威(噻嗪酮)響應值變化<1.5%后，進行樣品的測定。按照標準溶液、試樣溶液、試樣溶液、標準溶液的順序檢測苯氧威和噻嗪酮的含量。

1.3.4 結果計算 利用工作站對苯氧威(噻嗪酮)積分，并分別將標準溶液和試樣溶液的峰面積平均，待測樣中苯氧威(噻嗪酮)的質量分數ω(%)的計算公式如下：

式中：A1為苯氧威(噻嗪酮)標準溶液峰面積平均值；A2為苯氧威(噻嗪酮)試樣溶液峰面積平均值；m1為稱取苯氧威(噻嗪酮)標準品的質量，g；m2為稱取苯氧威(噻嗪酮)待測樣品的質量，g；ωs為標準品中苯氧威(噻嗪酮)的純度，%。

2 結果與討論

2.1 流動相和檢測波長的選擇 本文優化了檢測體系的流動相比例和檢測波長。試驗采用甲醇+水體系作為流動相，經優化發現當甲醇+水的比例為80+20時，苯氧威和噻嗪酮能夠很好地分離，且無雜質干擾，保留時間適中，因此選擇該比例為試驗的流動相。采用二極管陣列檢測器(DAD)在190～400 nm吸收波長范圍內觀察苯氧威和噻嗪酮的紫外吸收曲線，掃描結果(圖2)，從圖可知苯氧威的最大吸收波長約在202 nm，次大吸收在228 nm，噻嗪酮最大吸收約在202 nm，次大吸收在在244 nm。由于在202 nm附近有紫外吸收的成分較多，容易出現雜質干擾，結合樣品中各組分的含量、出峰峰形及干擾峰情況，最終選擇230 nm為該方法的檢測波長。

圖2 苯氧威+噻嗪酮的紫外吸收光譜圖

2.2 分析方法特異性 試驗分別對苯氧威·噻嗪酮混合標樣和制劑樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度進行檢測，采用HPLC-DAD 峰純度分析法來鑒別苯氧威和噻嗪酮(樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度圖(圖3、4)。試驗結果顯示混合標準溶液中苯氧威和噻嗪酮的純度分別為993.470和999.922，樣品中苯氧威和噻嗪酮的純度分別為991.022和999.986，峰純度結果均>990，有效成分出無其他物質干擾，符合定量分析要求。

圖3 苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品中苯氧威的HPLC-DAD峰純度色譜圖

圖4 苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品中噻嗪酮的HPLC-DAD峰純度色譜圖

2.3 非分析物干擾 用以上方法分別對空白樣品、苯氧威原藥和噻嗪酮原藥進行色譜分析結果(圖5)，由圖可知空白樣品在苯氧威和噻嗪酮的出峰位置無干擾峰，苯氧威原藥與噻嗪酮原藥之間互相沒有其他未分離物質的干擾。

圖5 非分析物干擾

2.4 分析方法的線性相關性 配制一系列不同濃度的標準溶液，苯氧威標準溶液濃度分別為0.188 1、0.408 2、0.592 4 、0.913 8、1.881 0 mg/mL，噻嗪酮濃度分別為0.623 7、1.927 5、2.346 3、2.924 0、5.316 3 mg/mL，分別對苯氧威(噻嗪酮)的進行檢測。以苯氧威(噻嗪酮)的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，分別擬合線性回歸方程并作線性相關圖，所得結果(圖6)，在給定質量濃度范圍內，苯氧威和噻嗪酮的質量濃度與峰面積均呈良好的線性關系。苯氧威的線性方程為Y=9 015.9X-132.2，相關系數(R2)為0.999 5；噻嗪酮的線性方程為Y=5 275.4X+170.04，相關系數(R2)為0.999 7。

2.5 分析方法精密度 對同一25%苯氧威·噻嗪酮懸浮劑樣品按照本方法進行5次平行測定，計算苯氧威和噻嗪酮的質量分數，用以考察方法的精密度，試驗結果(表1)。由表可見，苯氧威的標準偏差為0.002 3，變異系數為0.044%，噻嗪酮的標準偏差為0.005 2，變異系數為0.025%，該結果明顯低于horwitz公式計算的理論變異系數，證明該方法的精密度符合檢測要求。

表1 方法精密度數據表

2.6 方法準確度 稱取一定量的懸浮劑空白樣品5份，分別加入一定量的苯氧威和噻嗪酮標準品，混勻配置成試驗樣品，按照前文所述方法檢測溶液中苯氧威和噻嗪酮的含量，計算回收率，結果(表2)。由表可知，將該方法用于測定苯氧威和噻嗪酮懸浮劑的平均回收率分別為100.03%和100.08%，符合CIPAC的基本要求。

表2 方法準確度數據表

3 結論

實驗結果表明，將本方法用于苯氧威和噻嗪酮懸浮劑中有效成分含量的測定，重現性好，準確度高，線性關系良好，具有簡便、快速、準確及分離效果好的優點，是此類產品的質量控制有效可行的檢測方法。