IL-37在浸潤性乳腺癌中的表達及臨床意義

陳荏槐，崔小光，曹偉強，鄭金花，趙 青，朱新宇，陳昌偉

（東莞東華醫院病理科，廣東 東莞 523110）

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，全球發病率不斷上升，2020年全球乳腺癌新發病例200多萬，取代肺癌成為世界第一大癌［1-3］。IL-37 屬于細胞因子IL-1 家族，又被稱為IL-1F7，包括5 個剪切變異體（a～e），其中IL-1F7b 是最大的變異體，研究最為廣泛，無特殊說明，IL-37 指的就是IL-37b［4-5］。IL-37 在人體淋巴結、胸腺、骨髓等部位均有不同程度表達，但在乳腺癌中的表達及其意義少見報道，本研究旨在分析IL-37 在浸潤性乳腺癌（Invasive breast carcinoma， IBC）中的表達并探討其與IBC 相關病理參數之間的關系及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料收集2014年1月26日—2021年6月19日于東莞東華醫院病理科確診為IBC 的104 例患者的臨床資料及蠟塊，所有患者均未行治療，免疫組化一抗雌激素受體（Estrogen receptor，ER）、孕激素受體（Progesterone receptor，PR）、細胞增殖核抗原（Cell proliferating nuclear antigen，Ki-67）、人表皮生長因子受體2（Human epidermal growth factor receptor 2，HER2）、表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）均購自基因公司，IL-37購自Abcam公司。

1.2 方法蠟塊切片，行HE 和免疫組化染色檢測。免疫組化步驟如下：將石蠟切片粘貼在防脫載玻片上，烤片機烤30 min。石蠟切片脫蠟和水化后，用蒸餾水洗，在0.3% H2O2甲醇液中室溫下孵育15 min，然后蒸餾水洗。將耐高溫染色架上的組織切片放入已沸騰的修復液中高壓修復2.5 min，自來水沖淋使之冷卻，取出切片，蒸餾水沖洗1 次，PBS沖洗3 次。除去PBS 液，每張切片加相應的一抗，室溫下孵育60 min，PBS 洗3 次，每次3 min。除去PBS液，每張切片加二抗，室溫下孵育20 min，PBS 沖洗3次，每次3 min。除去PBS液，每張切片中新鮮配制的DAB 溶液，顯微鏡下觀察2～5 min，放入蒸餾水終止，自來水沖洗，蘇木素復染1～2 min，水洗。自來水沖洗10 min 返藍。經梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 判讀標準免疫組化結果判定標準：

1.3.1 IL-37（定位于細胞漿）依據陽性強度與陽性面積兩個維度進行評價，其中完全無著色評0分，淺黃色評1分，黃色評2分，棕黃色評3分；陽性面積≤10%評1 分，陽性面積＞10%評2 分，總分為6 分，0分為陰性，1～2分為低表達，＞2分為高表達。

1.3.2 ER/PR（定位于細胞核）≥1%為陽性，＜1%或無著色為陰性，其中1%～10%為低表達［6］。

1.3.3 Ki-67（定位于細胞核）選定熱點區域，至少計數500 個細胞，計算陽性細胞百分比，＜14%為低增殖指數（低表達），≥14%為高增殖指數（高表達）。

1.3.4 HER2（定位于細胞膜）0：無著色或≤10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色；1+：＞10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色；2+：有2 種情況，＞10%的浸潤癌細胞呈現弱至中等強度的完整細胞膜染色和≤10%的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色；3+：＞10%的浸潤癌細胞呈現強、完整且均勻的細胞膜染色。0 或1+判為陰性，3+判為陽性，2+判為不確定，進一步行FISH方法檢測進行判定。

1.3.5 EGFR（定位于細胞膜）呈棕黃色著色為陽性，無著色為陰性。分子分型依據2011年St Gallen國際乳腺癌會議中專家提出的基于IHC 乳腺癌分子分型系統［7］。組織學分級分為1～3 級，3～5 分為1級，6～7分為2級，8～9分為3級。

1.4 統計學處理采用SPSS 26.0 統計軟件進行數據分析，計數資料以n（%）表示，采用卡方檢驗IL-37在IBC 中的表達，IL-37 與各臨床病理參數的關系用Spearman相關系數表示。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 IBC 的臨床病理特征⑴組織學類型：非特殊型（Invasive breast carcinoma of no spceial type，IBC-NST）98 例（94.23%，圖1A、圖1B、圖1C），其他類型6 例（5.77%），主要包括伴有大汗腺分化的癌（圖1D）、小葉癌（圖1E）及小管癌（圖1F）。⑵組織學分級：1 級7 例（6.73%），2 級64 例（61.54%），3 級33 例（31.73%）。⑶分子分型：Luminal A 型21 例（20.19%），Luminal B 型49 例（47.12%），HER2 過表達型11 例（10.58%），三陰型（Triple negative breast cancer，TNBC）23 例（22.11%）。（4）年齡：29～76 歲，平均（45.12±8.03）歲。

2.2 IL-37 在IBC 中的表達IL-37 陰性10 例（9.61%）（圖2A），低表達25例（24.04%）（圖2B），高表達69例（66.35%）（圖2C）。

圖2 IL-37在IBC中表達（EnVision×200）

2.3 ER、PR、Ki-67、HER2 及EGFR 在IBC 中的表達⑴ER 陰性34 例（32.69%）、陽性70 例（67.31%）（圖3A），其中低表達1例。⑵PR陰性48例（46.15%）、陽性56例（53.85%）（圖3B），其中低表達10例。⑶Ki-67低增殖指數24例（23.08%）（圖3C），高增殖指數80 例（76.92%）（圖3D），共104 例。⑷HER2陰性78例（75%）、陽性26例（25%）（圖3E）。EGFR 陰性54 例（63.53%）、陽性31 例（36.47%）（圖3F），共85例，未檢測19例。

圖3 ER、PR、Ki-67、HER2及EGFR在IBC中表達（EnVision×200）

2.4 IL-37 與臨床病理參數相關性IL-37 與ER、PR 表達呈正相關，與Ki-67、EGFR 表達及組織學分級、分子分型呈負相關，與組織學分型、HER2 表達及年齡無明顯相關性（P＞0.05）（表1）。

表 1 IL-37在浸潤性乳腺癌中的表達及與其他臨床病理特征的關系/n

3 討論

IBC組織學類型為IBC-NST，包括小葉癌、小管癌及伴有大汗腺分化的癌等，本研究納入的IBC病例中IBC-NST占94.23%。根據ER、PR、Ki-67及HER2的表達情況，IBC 的分子分型分為Luminal A 型、Luminal B 型、HER2 過表達型及TNBC，Luminal A 型和Luminal B型統稱激素依賴型，本研究激素依賴型約占70%，非激素依賴型僅占30%，與第5 版WHO乳腺腫瘤分類IBC分子分型大致相同［6］。

IL-37是最新的白介素家族成員之一，具有強大的抗炎特性，于2010 年正式命名。IL-37基因位于人類2 號染色體的長臂上（2q13），大小為3.617 kb，具有β三葉草結構。該基因在人體多個器官中均有不同程度表達，如胸腺、淋巴結、腎臟等，另外，IL-37在機體的多種細胞都有表達，如內皮細胞、淋巴細胞、漿細胞等，但其在人體正常乳腺組織及IBC中的表達情況尚不清楚。本研究共納入IBC 病例104例，運用免疫組化技術檢測IL-37 的表達。結果提示，66.35%的病例組織中IL-37 高表達，24.04%病例組織中IL-37低表達，其余9.61%病例組織中IL-37表達陰性。進一步分析發現，IL-37 的表達與IBC 的多個臨床病理特征之間存在著密切的關系。IL-37在IBC 中的表達與組織學分級呈負相關。眾所周知，IBC的組織學分級低，IBC的分化則較好，其惡性程度較低，本研究結果發現IL-37 的表達隨著組織學分級的升高而下降，提示IL-37 高表達可能揭示了IBC 惡性程度較低，而其低表達往往預示了腫瘤具有較高的惡性程度。對IBC 患者進行IL-37 表達檢測，有助于更準確地判斷腫瘤惡性程度。

有研究［8-9］發現，雌激素能夠刺激腫瘤細胞分裂，促進乳腺癌細胞的增殖和侵襲，表明雌激素在乳腺癌的發生發展中起著重要的作用。本研究進一步檢測發現，IL-37表達與ER和PR呈正相關。在激素依賴型IBC 中IL-37 表達較高，非激素依賴型IBC 中IL-37 的表達較低。已有研究［10-14］證實，激素依賴型IBC 的患者其治療預后往往較非激素依賴型好。盡管激素受體的不同表達模式可能一定程度上影響其預后，激素依賴型的IBC（Luminal A 型、Luminal B 型）可以使用拮抗激素受體藥物進行治療，且治療的效果和預后往往比非激素依賴型IBC（HER2過表達型及TNBC）的好。本研究發現，IL-37的表達與ER和PR呈正相關，IL-37的高表達可能提示了IBC 較好的預后，在臨床上進行IL-37的檢測對于患者的治療和預后具有一定的提示作用。

本研究結果還發現，IL-37 的表達與EGFR 的表達呈負相關，而后者往往在TNBC 中高表達。TNBC的組織學分級高、可用藥物少、侵襲性強、預后差。有研究［15-18］表明，EGFR 在TNBC 中的陽性表達明顯高于其他分子分型，而且組織分級越高，EGFR 的陽性表達率越高。而IL-37 與EGFR 呈負相關，這提示IL-37 的低表達可能對患者較差的預后具有一定的提示作用。

綜上所述，IL-37 的表達與IBC 激素受體表達、組織學分級及分子分型等臨床病理特征密切相關，為后續進一步探討IL-37 與乳腺癌的關系提供了病理學基礎。