豬繁殖與呼吸綜合征病毒2型TaqMan MGB探針熒光定量PCR方法的建立

徐之恒，孫少輝，董友富，唐偉明，徐孝宙，邢軍，李豪，孫劉妹，萬進，王聰*，張振東*

(1. 揚州大學醫學院(轉化醫學研究院)，江蘇 揚州 215001；2. 中牧實業股份有限公司，北京 100070；3. 江蘇科技大學生物技術學院，江蘇 鎮江 212018；4. 江蘇農林職業技術學院，江蘇 句容 212400)

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以母豬的繁殖障礙、生長豬的呼吸道疾病以及感染豬的繼發感染為主要臨床表現的重要疫病，給我國生豬產業帶來了巨大的經濟損失[1-2]。PRRSV分為PRRSV1(歐洲型)與PRRSV2(美洲型)兩個種，我國主要以PRRSV2的流行為主[3]。根據ORF5基因序列，PRRSV2共分為9個譜系，我國主要流行4個譜系(譜系1、3、5、8)[4]。2006年我國暴發高致病性PRRSV(HP-PRRSV)，其nsp2基因存在30個氨基酸的缺失(1+29)[5]；2013年類NADC30毒株傳入我國，其nsp2基因存在131個氨基酸的缺失(111+1+19)[6]；2017年開始，類NADC34毒株在我國多個省份被檢出，其nsp2基因的缺失特征為連續的100個氨基酸[7]。近年來，疫苗演化毒株、譜系1的類NADC30/NADC34毒株及不同譜系之間的重組毒株頻繁檢出[8-9]，使得PRRSV田間流行毒株呈現出明顯的多樣性和復雜性，嚴重困擾著我國豬場的生產發展，尤其在生物安全防控較差的豬場，PRRS時有暴發流行。為做好PRRS的預警、防控及凈化工作，臨床生產中往往通過對新生仔豬睪丸處理液、家豬口水液、臨斷奶弱仔豬血液等樣本的檢測，及時了解豬群PRRSV的感染狀態，進而適時采取不同的控制措施。因此，建立一種特異性強、靈敏度高、操作簡單的檢測方法對PRRS的篩查、診斷、防控及凈化工作意義重大[10]。本研究根據國內PRRSV2不同……