犬細小病毒層析純化方法的建立

代昕宇，胡博，鄧效禹，張成琪，李昀真，李甜甜，孫亞杰，許麗文，白雪

(中國農業科學院特產研究所，吉林 長春 130112)

犬細小病毒(canine parvovirus，CPV)屬于細小病毒科、細小病毒亞科的原細小病毒屬。細小病毒科由具有4～6 kb線性基因組的無囊膜單鏈DNA病毒組成，直徑18～26 nm，可感染多種動物[1]。原細小病毒屬包括貓細小病毒(feline parvovirus，FPV)、CPV、水貂腸炎病毒(mink parvovirus，MEV)和浣熊細小病毒(rabbacon parvovirus，RPV)[2]。CPV于20世紀70年代末從一種類似FPV的原始病毒中出現，可能是通過物種間跳躍獲得了感染家養犬的能力[3]。CPV的線性單鏈DNA(ssDNA)基因組全長約5 kb，具有2個開放閱讀框(ORF)，編碼2個非結構蛋白(NS1和NS2)和2個形成病毒衣殼的結構蛋白(VP1和VP2)[4]。

CPV感染是引起犬死亡的主要原因之一，潛伏期3～7 d，發病犬出現嚴重的腸胃炎、嗜睡、嘔吐、發熱等癥狀，病程中腸道組織中廣泛自溶，腸道固有層塌縮，隱窩數量減少，可見的隱窩中增生性細胞發生大量堆積[5-7]。CPV對未接種疫苗幼犬的感染率和致死率都很高，可能會在衛生條件較差或未接種疫苗的犬舍暴發大規模的疫情[4]。

病毒純化是制備高質量抗體或更高安全性疫苗的必要條件。常規的實驗室純化病毒方法包括差速離心、蔗糖密度梯度離心、大分子沉淀和層析純化等。蔗糖密度梯度離心的方法通常在實驗室中采用，純化少量細小病毒或病毒樣顆粒[8-9]，但該方法所用儀器昂貴，基本無法進行擴大生產。層析方法對病毒粒子損傷較小，操作簡便，并且能夠實現大量制備，已應用于多種病毒和病毒樣顆粒的純化，以去除生物制品中的病毒污染物[10]。……