探討熒光定量PCR 法與免疫膠體金法用于骨質(zhì)疏松癥手術(shù)住院患者感染監(jiān)控的診斷價(jià)值

吳敏芳，董明治，楊越，張艷，陳啟

曲靖市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)中心，云南曲靖 655099

住院患者感染是醫(yī)療機(jī)構(gòu)中一項(xiàng)嚴(yán)重的醫(yī)療安全問(wèn)題，不僅給患者帶來(lái)痛苦，還增加了醫(yī)療成本和治療難度[1]。隨著抗生素耐藥性的增加和新興感染病原體的出現(xiàn)，感染控制變得更加復(fù)雜和緊迫。因此，建立有效的感染監(jiān)控與預(yù)防體系對(duì)于保障患者安全和提高醫(yī)療質(zhì)量至關(guān)重要。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）法作為感染疾病診斷的關(guān)鍵手段之一，具有高度的敏感性和特異性，能夠快速準(zhǔn)確地檢測(cè)病原體，指導(dǎo)臨床醫(yī)生及早制訂合理的治療方案[2]。在過(guò)去的幾十年中，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光定量PCR 法檢驗(yàn)已經(jīng)成為感染控制和預(yù)防中不可或缺的工具[3]。基于此，本研究選取2020 年3 月—2023年4 月曲靖市第一人民醫(yī)院收治的180 例骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行手術(shù)治療疑似住院感染患者為研究對(duì)象，探討熒光定量PCR 法檢驗(yàn)的臨床應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的180 例骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行手術(shù)治療疑似住院感染患者作為研究對(duì)象，所有患者均先后接受熒光定量PCR 法與免疫膠體金法檢測(cè)。其中男98 例，女82 例；年齡21～71 歲，平均（42.83±5.79）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 歲；愿意參與本研究并簽署知情同意書(shū)；精神意識(shí)狀態(tài)正常；無(wú)血液系統(tǒng)疾病；無(wú)嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病或免疫抑制癥狀。

排除標(biāo)準(zhǔn)：其他明確感染病因的患者，如外傷感染、手術(shù)感染等；在研究期間已接受抗生素治療的患者；患有嚴(yán)重肝腎功能損害或其他重要器官功能障礙的患者。

1.3 方法

熒光定量PCR 法檢測(cè)儀器為ABI 公司的7500型熒光定量PCR 儀，具體檢測(cè)步驟如下：收集樣本使用特定的核酸提取試劑盒從樣本中提取出核酸，將提取出的RNA 通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶的作用轉(zhuǎn)化為cDNA。根據(jù)目標(biāo)基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物，將引物、dNTPs、MgCl2、熒光染料、Taq 酶等按照一定比例加入到PCR 反應(yīng)液中，將配置好的PCR 反應(yīng)液加入到PCR 儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。根據(jù)Ct 值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，判斷樣本中是否存在目標(biāo)基因，并計(jì)算出其含量。免疫膠體金法具體檢測(cè)步驟如下：將一定濃度的氯金酸溶液與還原劑（如檸檬酸三鈉）混合，加熱攪拌，將待標(biāo)記的抗原或抗體與膠體金溶液混合形成復(fù)合物。將標(biāo)記好的復(fù)合物用洗滌液洗滌數(shù)次，去除未結(jié)合的膠體金顆粒和多余的抗原或抗體。將洗滌后的復(fù)合物與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物。用肉眼或光學(xué)顯微鏡觀察溶液的顏色變化，判斷待測(cè)樣本中是否存在目標(biāo)抗原或抗體。細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)步驟如下：采集樣本進(jìn)行稀釋、離心以及加入抑菌劑等處理，并接種到適宜的培養(yǎng)基上。將接種好的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。觀察培養(yǎng)基上細(xì)菌的生長(zhǎng)情況和形態(tài)特征，如菌落大小、形狀、顏色等，判斷目標(biāo)細(xì)菌的種類(lèi)。

1.4 觀察指標(biāo)

①統(tǒng)計(jì)比較兩種檢驗(yàn)方法的陽(yáng)性檢出率。②比較兩種檢驗(yàn)方法的診斷效能，包括準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等項(xiàng)目。具體計(jì)算方法如下：準(zhǔn)確度=（真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%；靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，診斷效能診斷結(jié)果為計(jì)數(shù)資料，以例數(shù)（n）和率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種診斷方法檢驗(yàn)結(jié)果比較

細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性37 例，熒光定量PCR 法結(jié)果顯示陽(yáng)性35 例，免疫膠體金法結(jié)果顯示陽(yáng)性26 例。見(jiàn)表1。

2.2 兩種診斷方法的診斷效能比較

熒光定量PCR 法的檢驗(yàn)準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于免疫膠體金法檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩種診斷方法的診斷效能比較（%）

3 討論

住院患者感染是醫(yī)療機(jī)構(gòu)面臨的嚴(yán)重挑戰(zhàn)之一。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和患者病情的復(fù)雜化，住院患者感染的發(fā)生率逐漸上升，給患者的康復(fù)和治療帶來(lái)了重大障礙[5]。感染不僅導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行手術(shù)治療患者身體狀況的進(jìn)一步惡化，還會(huì)延長(zhǎng)患者住院時(shí)間和增加醫(yī)療費(fèi)用。抗生素的廣泛使用導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使得原本可治愈的感染病變?yōu)殡y治性疾病，嚴(yán)重影響患者的治療效果和生存率[6]。面對(duì)這一嚴(yán)峻的形勢(shì)，建立科學(xué)的感染監(jiān)控與預(yù)防體系顯得尤為重要。

熒光定量PCR 法檢驗(yàn)可以快速確定感染的病原體、判定其對(duì)抗生素的敏感性，從而進(jìn)行個(gè)體化治療[7-8]。本研究結(jié)果顯示，細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性37 例，熒光定量PCR 法結(jié)果顯示陽(yáng)性35 例，免疫膠體金法結(jié)果顯示陽(yáng)性26 例，這說(shuō)明熒光定量PCR 法檢驗(yàn)可提高病原菌檢出率。曲奎堯等[9]研究結(jié)果顯示，免疫膠體金法的MP檢測(cè)陽(yáng)性率為46.3%，明顯低于熒光定量PCR法檢驗(yàn)的陽(yáng)性率（73.9%）（P＜0.05）。熒光定量PCR法的檢驗(yàn)準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于免疫膠體金法檢驗(yàn)（P均＜0.05），提示熒光定量PCR 法檢驗(yàn)具有良好的檢驗(yàn)效能，在感染監(jiān)控中對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)感染、及時(shí)采取干預(yù)措施具有重要意義。劉小琳等[10]研究結(jié)果顯示，熒光定量PCR 法診斷CT 感染的靈敏度、陰性預(yù)測(cè)值、準(zhǔn)確度、Kappa值分別為96.47%、60.00%、96.11%、0.700，均顯著高于免疫膠體金法的85.56%、27.27%、88.89%、0.323（P均＜0.05），與本研究結(jié)果具有較高一致性。熒光定量PCR 法提高病原菌檢出率及檢驗(yàn)效能的原因主要有以下幾點(diǎn)：①熒光定量PCR 法可以檢測(cè)到非常低濃度的病原體，因此，可以更早地發(fā)現(xiàn)感染，及時(shí)進(jìn)行干預(yù)和治療[11-12]；②熒光定量PCR 法的特異度也比免疫膠體金法更高。熒光定量PCR 法可以特異性地?cái)U(kuò)增目標(biāo)病原體的核酸序列，減少非特異性擴(kuò)增和交叉反應(yīng)的可能性[13]；③熒光定量PCR 法可以進(jìn)行定量檢測(cè)，通過(guò)測(cè)定熒光信號(hào)的強(qiáng)度和變化，可以計(jì)算出起始模板的數(shù)量，從而了解感染的嚴(yán)重程度和治療效果[14-15]。

綜上所述，熒光定量PCR 法檢驗(yàn)在骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行手術(shù)治療住院患者感染監(jiān)控中具有顯著的臨床效果。通過(guò)快速準(zhǔn)確地檢測(cè)病原體和合理選擇抗生素，有助于降低傳播風(fēng)險(xiǎn)。