異常糖鏈糖蛋白水平與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的相關性

李云婷,董曉彤,高建芳,張云香

乳腺癌是全球發病率最高的惡性腫瘤[1],癌細胞轉移是患者死亡的主要原因。乳腺癌患者的預后與病理分期有關,早期乳腺癌患者的5年生存率高達85%,發生遠處轉移的晚期患者5年生存率<30%。因此,早篩查、早診斷和早治療對提高患者預后具有重要意義。腫瘤異常糖鏈糖蛋白(tumor abnormal protein, TAP)又稱腫瘤異常蛋白,是一類細胞癌變初期原癌基因和抑癌基因突變后產生的異常糖蛋白和鈣-組蛋白復合物,腫瘤的發生、發展往往伴隨TAP表達的顯著升高[2]。研究顯示,TAP檢測對乳腺癌早期篩查和判斷預后具有重要意義[3]。目前,文獻尚未報道TAP與乳腺癌分子分型的相關性。本文著重探討TAP表達水平與乳腺癌分子分型、臨床病理特征的關系,分析其在乳腺癌診斷中的價值,以實現患者早診斷和早治療。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2019年9月～2022年9月經我院病理科確診的357例乳腺癌標本,患者年齡29～88歲,平均54歲,均為女性。357例乳腺癌中三陰型31例,HER2陽性型43例,Luminal A型105例,Luminal B型178例。排除標準:(1)合并其他良惡性腫瘤;(2)合并糖尿病、風濕病等影響TAP檢測的疾病;(3)妊娠期或哺乳期婦女;(4)相關資料不全者。本實驗經我院倫理委員會批準,患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1TAP檢測法 采集患者就診時確診為乳腺癌的肘部靜脈血1管,推成厚薄均勻的血片2張,靜置待干后,在每張血涂片上依次垂直滴加3滴TAP凝集素試劑,靜置1.5～2 h自然干燥,形成圓形“斑點”即標本制作完成。檢測:將標本置于顯微鏡下,用4倍平場消色差物鏡,依次掃描觀察血片標本的3個斑點,尋找特異形態的凝聚物。TAP結果判讀:觀察凝聚物顆粒,凝聚物面積<121 μm2為TAP陰性/無明顯凝聚物;凝聚物面積121～225 μm2為TAP弱陽性/凝聚物較小;凝聚物面積>225 μm2為TAP強陽性/凝聚物較大。

1.2.2免疫組化 標本均經10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,切片3 μm厚,免疫組化采用EnVision兩步法染色。一抗ER(SP1)、PR(1E2)和HER2(4B5)抗體,均購自上海羅氏公司;p53(MX008)和Ki67(MXR002)抗體購自福州邁新公司;AR(EP36)抗體購自北京中杉金橋公司。具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行,并設陰、陽性對照。

1.2.3FISH檢測 標本均經10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,3 μm厚切片,HER2探針購自武漢康錄生物公司。具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 結果判讀由兩名副高以上病理醫師復閱免疫組化染色和FISH檢測結果,按2022年中國抗癌協會乳腺癌診療指南與規范進行免疫組化、FISH判讀和臨床分期。HER2陽性定義:(1)經免疫組化檢測(3+、2+)且FISH檢測陽性者,為HER2強陽性;(2)經免疫組化檢測(1+、2+)且FISH檢測陰性者,為HER2弱陽性;(3)經免疫組化檢測(0)為HER2陰性。AR/ER/PR陽性定義:陽性細胞>10%為陽性,≤10%為陰性。p53陽性定義:細胞核染色>10%為陽性[4]。Ki67增殖指數≥20%為強陽性,<20%為弱陽性。

1.4 統計學分析采用SPSS 25.0軟件進行統計學分析,計數資料以百分率(%)表示,應用χ2檢驗、Mann-WhitneyU檢驗分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌中TAP的表達357例乳腺癌患者中TAP陰性/無明顯凝聚物9例(2.52%)(圖1A),TAP弱陽性/凝聚物較小36例(10.08%)(圖1B),TAP強陽性/凝聚物較大312例(87.40%)(圖1C),TAP陽性率(弱陽性+強陽性)為97.48%。

ABC圖1 TAP凝聚物顆粒形態:A.TAP陰性/無明顯凝聚物,凝聚物面積<121 μm2;B.TAP弱陽性/凝聚物較小,凝聚物面積121～225 μm2;C.TAP強陽性/凝聚物較大,凝聚物面積>225 μm2

2.2 免疫表型AR、ER、PR、p53、Ki67陽性均定位于細胞核,HER2陽性染色定位于細胞膜(圖2)。本組結果顯示:AR陽性321例、陰性36例,ER陽性256例、陰性101例,PR陽性214例、陰性143例,HER2強陽性98例、弱陽性214例和陰性45例,p53陽性146例、陰性211例,Ki67增殖指數≥20%者276例、<20%者81例。

ABCDEFGHIJKL

2.3 FISH檢測本組有155例乳腺癌免疫組化HER2(2+)者行FISH檢測,其中140例未發生HER2位點擴增,15例發生HER2位點的擴增(圖3)。

AB

2.4 乳腺癌中TAP表達與臨床病理特征的關系本組357例患者中,年齡≥50歲的乳腺癌TAP表達水平明顯高于年齡<50歲患者(P=0.010)。Ki67強陽性患者的TAP表達水平高于弱陽性患者(P=0.008)。不同臨床分期患者TAP表達差異有統計學意義(P<0.001),乳腺癌臨床分期越高的患者TAP表達水平越高。TAP表達與淋巴結轉移(P=0.322)、乳腺癌分子標志物AR(P=0.807)、ER(P=0.648)、PR(P=0.727)、HER2(P=0.695)和p53(P=0.683)表達差異均無統計學意義(表1)。

表1 乳腺癌中TAP表達與臨床病理特征的關系[n(%)]

2.5 TAP表達與乳腺癌患者分子分型的關系357例不同分子分型(三陰型、HER2陽性型、Luminal A型和Luminal B型)的患者之間,TAP表達量不同(P=0.019,表2)。本組三陰型乳腺癌患者TAP表達水平明顯高于非三陰型,差異有統計學意義(P=0.029);Luminal B型患者TAP表達水平高于非Luminal B型,差異有統計學意義(P=0.044,表3)。

表2 TAP在不同乳腺癌分子分型中的表達差異[n(%)]

表3 TAP表達與不同乳腺癌分子分型的關系[n(%)]

3 討論

TAP檢測是一種簡便、廣譜和高效的惡性腫瘤篩查方法,具有靈敏度與準確度高、損傷性較小和成本相對較低等優點。有報道顯示TAP是消化道癌前病變、膀胱尿路上皮癌、甲狀腺癌的早期篩查和預后評價的有效指標,可輔助臨床診斷和治療[5-9]。國內學者發現,TAP在肺、食管、胃、結直腸、肝膽、甲狀腺、乳腺、口腔、卵巢、子宮和淋巴等實體腫瘤患者的外周血中高表達,且檢測TAP對提高乳腺癌診斷準確率和改善患者預后有重要作用[10]。張麗潔等[11]報道TAP陽性率與乳腺癌患者年齡、治療后腫瘤發生轉移密切相關,提示TAP檢測可作為乳腺癌患者預后的指標。

文獻報道,女性正常絕經年齡45～55歲,多數女性絕經年齡為50歲,其體內的激素水平變化較大,故本組以50歲作為年齡的Cut off值。本組357例乳腺癌患者中,≥50歲患者的TAP表達水平明顯高于<50歲患者。

Ki67增殖活性是決定乳腺癌患者預后的重要因素,單克隆Ki67抗體一直被認為是乳腺癌患者的獨立預后生物學標志物[12]。多項研究顯示,Ki67增殖指數與乳腺癌患者生存率和預后有相關性[13-14]。2022年中國抗癌協會乳腺癌診療指南與規范指出:可采用20%～30%或各實驗室的中位值作為判斷Ki67增殖指數高低表達的閾值,本實驗以20%作為判斷Ki67增殖指數高低表達的閾值。研究顯示,Ki67增殖指數與TAP表達呈明顯的正相關,提示TAP檢測是預測乳腺癌患者生存率和預后的重要手段。

乳腺癌根據ER、PR、HER2和Ki67 增殖指數進行分子分型,按2022年中國抗癌協會乳腺癌診療指南與規范可以分為Luminal A型、Luminal B型、HER2陽性型和三陰型。Luminal A型是最常見的分子亞型,即ER陽性、PR強陽性(以20%作為判斷PR強弱陽性的界值)、HER2陰性且Ki67弱陽性。早期乳腺癌生長緩慢,淋巴結轉移少,復發率低,預后佳,患者主要采用內分泌治療。Luminal B型根據HER2基因表達的不同,分為Luminal B-HER2陰性型和Luminal B-HER2陽性型,HER2陰性型為ER陽性、PR弱陽性、HER2陰性和Ki67 強陽性;HER2陽性型為ER陽性、PR任意陽性、HER2陽性和Ki67任意陽性。Luminal B型比Luminal A型腫瘤生長速度快,惡性程度高,易復發、轉移[15-16]。本組發現Luminal B型TAP陽性率比非Luminal B型高,而Luminal A型TAP陽性率不比非Luminal A型高,進一步證明Luminal B型惡性程度高于Luminal A型,患者預后差。HER2陽性型是指ER和PR均陰性,HER2過表達或擴增,Ki67 任意陽性;臨床特征顯示腫瘤生長快,淋巴結轉移早且多,患者發現時多為晚期,預后較差;對內分泌治療不敏感,抗HER2靶向治療效果好。三陰型是指ER、PR和HER2均陰性,Ki67 任意陽性;其腫瘤大、分化差、增殖能力高、淋巴結多受累和復發轉移風險高,患者預后差。本組三陰型乳腺癌中TAP表達水平明顯高于其他類型,進一步證明TAP在乳腺癌中可預測患者預后。

腫瘤分期是影響乳腺癌患者預后的獨立危險因素,本組乳腺癌中臨床分期越高的患者TAP表達水平越高,提示乳腺癌中TAP表達水平和臨床分期呈正相關,表明TAP在乳腺癌分期中具有一定的意義。

文獻報道,肺腺癌患者中TAP的表達與傳統腫瘤標志物呈正相關[17]。在肺癌中TAP聯合NSE、CYFRA 21-1或NSE、CYFRA 21-1、鱗狀細胞癌抗原檢測,可提高肺癌診斷的準確性[18]。在胃腸腫瘤中TAP與CA199、CA72-4和部分凝血酶原活化時間有相關性,可用于胃腺癌的篩查和診斷[19]。目前,乳腺癌早期篩查指標主要是CEA和CA153,但兩者的陽性率低、特異性差,診斷存在局限性。有研究發現,TAP作為乳腺癌的早期篩查指標,在檢測敏感度、準確度明顯優于CEA和CA153。本組TAP在乳腺癌中的陽性率為97.48%,提示TAP更適合作為乳腺癌的篩查指標。

研究顯示乳腺癌患者取肘靜脈血進行檢驗,能明顯提高檢測結果的準確率和合格率。本實驗取肘靜脈血檢測TAP陽性率為97.48%,比其他采用末梢靜脈血檢測TAP的陽性率高[20],可能與采血部位有關,有待進一步驗證。

綜上所述,乳腺癌患者中TAP陽性程度與患者年齡和Ki67增殖指數呈正相關。三陰型乳腺癌TAP表達水平顯著高于非三陰型乳腺癌,Luminal B型TAP表達水平明顯高于非Luminal B型乳腺癌,TAP表達水平和臨床分期呈正相關。因此,TAP檢測是乳腺癌篩查的重要手段,可為乳腺癌的診斷與預后判斷提供參考。