淺談牛布氏桿菌病的診斷及防控措施

孫 祎

北票市五間房動物衛生監督所，遼寧北票 122100

牛布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的人畜共患傳染病，可分為急性型或慢性型，慢性型病例為多數。牛、羊感染本病的概率較大，其次是豬。人和其他家畜也可感染本病。主要特征是母牛表現為流產，公牛表現為睪丸炎。

1 病原

布氏桿菌可分為羊、牛、豬、沙林鼠、綿羊、犬布氏桿菌。在我國發現的主要為羊、牛、豬布氏桿菌，而沙林鼠、綿羊、犬布氏桿菌在我國沒有得到證實。在形態上它們幾乎是一樣的，都是細小呈短桿狀或球桿狀，革蘭氏染色為陰性，幾乎靜止不動，不產生芽孢。布氏桿菌不耐熱，對溫度非常敏感，當溫度達到70℃時，加熱10min可將其殺死，在腐敗病料中的布氏桿菌陽光直接照射1d，很快失去活力。布氏桿菌對多數消毒藥敏感，一般的消毒藥都可將其殺死，用2%石炭酸、來蘇爾、燒堿溶液消毒，可在1h內將其殺死[1]。布氏桿菌對鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素敏感，對青霉素不敏感。

布氏桿菌的抗原結構復雜，它可分兩種，即屬內抗原與屬外抗原。屬內抗原包括A、M、R等表面抗原，A抗原和M抗原存在于光滑型布氏桿菌中，R抗原存在于大多數非光滑型布氏桿菌中。可用凝集試驗鑒別到種和生物型。布氏桿菌胞漿內的可溶性抗原是布氏桿菌屬特異抗原，成分非常復雜。布氏桿菌的屬外抗原可與大腸桿菌、巴氏桿菌、假單胞菌、沙門氏菌等屬的細菌發生交叉凝集反應。進行血清學診斷時，可用巰基化合物處理血清，能明顯地甚至是完全消除交叉反應。

侵入動物機體的細菌雖然被巨噬細胞吞噬，但卻避免了消化道內的消化，且能在巨噬細胞內增殖。感染初期本菌可廣泛分布于機體全身各部位，后期僅局限于乳房及其周圍淋巴結。妊娠動物感染時，與其他臟器相比本菌更易在胎盤和胎兒體內增殖。布氏桿菌能特異地在胎盤子葉的巨細胞中增殖，由于細菌的增殖，子葉巨細胞的功能被破壞，而成為流產的誘因之一。本菌經過子葉巨細胞進一步感染胎兒，胎兒對母體而言是一種異物，為了抑制免疫排斥反應并維持妊娠，母本內產生以Th2為主的白細胞介素。布氏桿菌屬細菌感染后，宿主產生針對性的免疫應答并誘導Th1反應以阻止其在細胞內的增殖，從而抑制病情的惡化。妊娠動物被感染后，同樣也會誘導以Th1為主的反應，這可能是破壞了Th1/Th2的平衡從而引發流產[2]。

2 流行病學

本病流行范圍廣，分布世界各國，但主要集中在印度阿拉伯灣地區、南美洲、地中海地區。2007年以來我國連續開展了布氏桿菌病定點調查，調查結果表明，我國牛羊布氏桿菌病發病率最高的地區是內蒙古、黑龍江、河北，其次是遼寧、吉林、山東、河南、新疆，呈現“北方高、南方低”的特點。牛羊個體、群體陽性率均高于控制標準。存在多種型布氏桿菌并存和跨種間感染現象。本病的易感動物主要是羊、牛、豬，除此之外還可感染水牛、野牛、羚羊、鹿、駱駝、野豬、貓、狐、狼以及一些嚙齒動物。動物的易感性隨性成熟年齡接近而增高。性別對易感性無明顯差別，但母牛相對公牛感染的概率比較大。布氏桿菌病可通過口腔、黏膜、皮膚、配種、接生等途徑感染。本病不僅動物之間相互傳染，而且帶菌的動物也可傳染給人，主要傳播途徑皮膚劃破后接觸過帶菌動物或者是給母畜接產。母畜流產后的胎兒、黏液、分泌物、胎盤、乳汁和公畜的精液中都帶有細菌，成為了傳染源。如果是帶菌的動物污染了飼料和飲水，同圈或同群飼養的動物就會被感染。如果母畜帶菌，那么流產后排出的分泌物污染了圈舍也會傳染給同群的家畜。布氏桿菌可隨病牛乳汁排出傳染給乳牛，在夏季蚊蟲比較多的季節吸血昆蟲也可傳播本病。與帶菌家畜或流產病畜直接接觸比較多的獸醫或飼養人員，給帶菌奶牛擠奶人員都有感染過本病的病例。因此，對布氏桿菌病的防控應采取有效措施，對人和動物的健康具有重要意義。

3 臨床癥狀

潛伏期因個體差異而不同，最短的20～30d,長的可達180d，但流產指的是大多數病例，多數母牛流產都是在妊娠后180～240d。母牛流產前表現為時起時坐、食欲不振、精神萎靡，陰唇光亮紅腫，有紅褐色分泌物從陰道中流出，流產產出的胎兒多數為死胎，也有的是木乃伊胎，流產后常常出現胎衣不下，有的出現子宮炎。多數母牛流產后通過治療可正常懷孕和分娩，但是也有少數母牛流產后終生不孕。奶?；急静∵€會出現乳房炎，會使奶牛的產奶降低，嚴重的會失去泌乳能力。除此之外，有的病例出現關節炎，表現為關節腫脹，觸摸腫脹處有疼痛感，多數關節炎患病部位為腕關節和膝關節，嚴重者關節變形、疼痛，走路一瘸一拐[3]。公牛患病后主要的臨床癥狀是睪丸炎，雙側睪丸一大一小，有的出現附睪炎。有的病例是化膿性壞死睪丸炎，睪丸明顯腫大。發生睪丸炎，附睪炎的初期表現為腫痛，后期變為無熱痛。采集公牛精液進行檢測，精子活力降低，嚴重的失去活力，甚至失去性欲。

4 病理變化

病牛流產后胎衣發生水腫，絨毛膜下組織呈膠凍樣浸潤，顏色為淡黃色。有些部位有出血點，表面有膿液和纖維素滲出物。部分絨毛葉表面覆有纖維素，顏色為灰色或黃綠色，同時上面還有脂肪狀滲出物或膿液絮片。流產的胎兒皮下水腫，打開胸腹腔可見淡黃色積液，關節腔內也出現積液。胎兒的肝臟、腎臟、全身淋巴結都有不同程度的腫脹，腎臟看上去呈葡萄樣，顏色為紫色。在子宮的內部，子宮絨毛之間有黃色無味的粘稠樣滲出物，絨毛膜表面有壞死灶，覆有黃色壞死物。切開胎兒的胃，胃內有黃色絮狀物，有的是白色黏液絮狀物，牛的四個胃中最嚴重的是皺胃。胃腸黏膜和膀胱黏膜下出現點狀出血或線狀出血，胎兒的臍帶紅腫、肥厚呈漿液性浸潤。皮下呈出血性漿液性浸潤。公牛的精囊內有出血點和壞死灶，睪丸和附睪有壞死和化膿性病變。

5 診斷要點

5.1 初步診斷

根據流行特點，母牛流產，公牛睪丸炎和附睪炎主要臨床特征，再結合剖檢癥狀進行初步診斷。

5.2 細菌學診斷

可采取流產胎兒胃內容物、病變面積大的肝臟、脾臟、母牛流產排出的胎衣，絨毛膜水腫嚴重的部分，制作涂片用美藍染色法染色：①制作涂片后，讓其自然干燥，最后用火焰進行固定；②固定后在涂片上滴加2%沙黃水溶液將圖片全部覆蓋，用酒精燈進行加熱，直到出現小氣泡為止；③用水洗后用堿性美藍溶液染色30～60s；④染色后用水洗、干燥后在油鏡下觀察，觀察的結果為紅色，可確定為布氏桿菌。根據實際需要，可對布氏桿菌采取進一步分離。分離的方法主要為病料直接分離培養和感染動物進行間接分離。一般選擇豚鼠作為感染動物，感染后進行分離。分離布氏桿菌多數選擇用老式方法，相比直接分離培養法，分離出的陽性率要高一些。

5.3 血清學診斷

布氏桿菌病的血清學診斷，可采用凝集反應、補體結合反應等，以上方法的優點是特異性和敏感性高。在應用時要根據實際情況選擇合適的方法。動物感染布氏桿菌病7d左右，血液中就會出現凝集素，凝集滴度便不斷增高，一般可操持1～2年甚至更長。凝集滴度顯著增高的時期一般是在動物流產后的7～15d。對需要進行檢疫的群體采血并分離血清，進行血清凝集反應。

5.3.1 虎紅平板凝集試驗

將分離后的血清裝管編號，把編號后的血清每個血清抽取0.03mL滴入到帶有編號的平板上，然后在每個受檢血清旁滴入0.03mL的抗原，全部滴加完后，使受檢血清和抗原充分混合，混合后3～4min受檢血清肉眼能夠觀察到發生凝集反應者判為陽性（+），受檢血清不發生凝集反應呈均勻粉紅色，判為陰性（-）。

5.3.2 試管凝集試驗

對受檢動物進行采血分離血清。如果是送檢血清3d內不能送達的，要在血清中加入5%的石碳酸生理鹽水以防變質，按照血清和石炭酸生理鹽水9:1的比例添加。送檢的血清防止受熱和冷凍，要采用4～8℃冷藏的方式進行運輸。以牛為例對受檢血清進行稀釋，每份血清要使用4支凝集試管，按照操作規則和程序處理完畢后放入37～40℃溫箱中24h，取出仔細觀察并將結果記錄好。

每一次試驗都設有陽性、陰性血清與抗原對照。參照對比管，按照試管上層液體清亮度進行判定。分層明顯上層液體完全透明，下層完全凝集下沉，可判定為++++；上層液體透明度為75%，下層幾乎完全凝集，可判定為+++；上層液體透明度為50%，下層明顯凝集，可判定為++；上層液體透明度為25%，既有凝集物又有沉淀，可判定為+；整管液體混濁程度均勻無沉淀，有凝集物無沉淀，可判定為陰性。

5.3.3 補體結合反應

由于本方法敏感特異性高，應用的非常多，范圍也比較廣。特別是第一次感染的病牛，補體結合反應比凝集反應判斷出來結果的速度快。在有些發病速度比較慢的病牛中，使用血清凝集法判定結果為陰性或可疑時，則補體結合反應可準確判定為陽性。所以補體結合反應對確診牛羊布氏桿菌病有著重要的意義。

6 防控措施

6.1 本病要以預防為主，提倡自繁自養

根據實際需要確實需要引進時，不要從流行本病多的地域引進。如果條件允許直接從引進地直接采血進行布氏桿菌病監測，如果引進的數量少可做全群檢測，數量多要抽取全群30%以上樣本進行檢測。檢測結果為陰性確認健康后運回本地進行隔離飼養一個月。有獨立的空舍或專門隔離場是最好的選擇，在隔離飼養期間進行一次布氏桿菌病的監測，在隔離飼養結束時再進行一次監測，確定健康檢測結果為陰性可混群飼養。

6.2 定期監測和免疫接種

如果是舍飼比較健康的牛群，進行定期監測，檢出病牛根據實際情況淘汰或隔離。如果是牧區，放牧的牛數量比較多，沒有隔離飼養的條件，采用免疫接種不檢疫的方法。根據實際需要選擇合適的疫苗，目前接種比較多的有馬爾他布氏桿菌5號弱毒疫苗和豬布氏桿菌2號弱毒疫苗，這兩種疫苗免疫效果比較好。奶牛不能接種疫苗，只能監測，發現病牛立即淘汰。

6.3 進行科學地飼養管理

牛舍中的糞便及污染物要及時清理，保持牛舍的清潔，如果是封閉牛舍要及時通風換氣，牛舍內外要定期徹底消毒，為牛群的健康生長提供一個優良的環境。

6.4 保證牛群的飼料飲水清潔

如果是夏季放牧，要到有優質青草的放牧地進行放牧。沒有青草的季節，要選擇優質的干草，干草或草塊要存放在干燥通風好的地方防止受潮、發霉變質。在飼喂青草和干草的同時還要飼喂精飼料，全價料要選擇大廠家生產的，自己配比要保證原料的質量。

6.5 發現病牛及時采取防控措施

如果在牛群中發現疑似病牛，要第一時間隔離飼養，并對疑似病牛進行采血檢測。在檢測結果沒出來之前，牛場內要實行嚴格管理，牛和飼養人員保證原地不同，所有的牛和人不出場，奶牛擠出的奶也不能出場。進出場的車輛、飼養用具、工作人員等要進行嚴格全面地消毒。從源頭上控制傳染源，防止疫病傳播。因為牛布氏桿菌屬于人畜共患疾病，一旦某個區域大面積發病，還要對人進行監測。

6.6 無害化處理

經化驗室檢測將疑似病牛確定陽性，立即將病牛從牛群中分離出來，組織人力進行撲殺。撲殺時要嚴格按照無害化處理操作規程進行，撲殺后的病牛尸體的掩埋要選擇在人員和動物很少走動或不經過的地方，遠離村莊、水源地、主要公路在1km以上。掩埋尸體的坑要在3m以上，將生石灰鋪在坑底，病牛尸體鋪在生石灰的上方，將每個尸體充分澆上柴油后焚燒，焚燒后再用生石灰填埋，上方再用土填埋，填埋后尸體距地面要1m以上。

6.7 做好疫病凈化工作

制定布氏桿菌病疫情監測和疫病凈化方案，定期對牛群進行采血監測，監測次數根據實際情況來確定，一般每個月進行監測一次，監測出的病牛從牛群中隔離出來立即撲殺，檢測出病牛所在牛群的圈舍要立即進行全面徹底消毒。按照每個月一次的頻率進行監測，直到飼養場中沒有病牛為止。

7 結語

牛布氏桿菌病是養牛業中經常發生的，一般根據臨床癥狀和病理變化可進行初步診斷，采血送往化驗室進行監測做出最后診斷，確診后對癥下藥及時治療。平時做好預防工作，加強飼養管理，從源頭上切斷傳染源，控制本病的發生，從而減少因發病帶來的經濟損失。