兩種銅制劑與化學農藥混配對蘭州百合貯存期鱗莖腐爛病防治作用

陳應娥 梁巧蘭 魏列新 藺珂

摘 要 為了篩選出有效防治蘭州百合貯存期鱗莖腐爛病菌高效低毒的銅制劑及其混配劑，延緩病原菌的抗藥性，采用生長速率法，測定兩種銅制劑及其混配劑對裂褶菌（Schizophyllum commune）的抑菌率、抑菌活性及其混配劑的增效作用。結果表明：86.2%氧化亞銅WP和46%氫氧化銅WG以及化學藥劑500 g/L異菌脲SC、80%代森錳鋅WP、75%百菌清WP對裂褶菌抑菌活性均較好，EC50在6.44～89.60 μg/mL；獲得5種具有增效作用的混配劑，分別為86.2%氧化亞銅WP∶500 g/L異菌脲SC（2∶8）、86.2%氧化亞銅 ?WP∶75%百菌清WP（5∶5、8∶2、9∶1）、46%氫氧化銅WG∶75%百菌清WP（6∶4），其EC50和共毒系數為 ?5.06～30.16 μg/mL和137.91～221.03；離體防效測定發現，86.2%氧化亞銅WP∶75%百菌清WP（5∶5）和 ?86.2%氧化亞銅WP∶500 g/L異菌脲SC（2∶8）對裂褶菌引起的蘭州百合鱗莖腐爛病的防效較好，保護作用防效和治療作用防效在86.62%和78.44%以上，分別比86.2%氧化亞銅WP、500 g/L異菌脲SC和75%百菌清WP防效最高提高5.90%、9.61%和11.53%、14.64%，且在發病前、后施藥，混配劑及單劑的保護作用防效均高于治療作用防效。篩選出86.2%氧化亞銅WP∶75%百菌清WP（5∶5）和86.2%氧化亞銅WP∶500 g/L異菌脲（2∶8）對蘭州百合鱗莖腐爛病防效較好的兩種混配劑，其平均防效高達84.40%以上，這兩種混配劑的防效均顯著高于各自單劑的防效。研究結果對指導銅制劑與化學藥劑合理混配，有效防治百合鱗莖腐爛病提供科學依據。

關鍵詞 銅制劑；化學農藥；百合鱗莖腐爛??；增效作用；防治作用

蘭州百合（Lilium davidii ?var.）是百合科百合屬多年生草本植物，中國四大百合品種中唯一一種可食用的品系，不僅有“蔬菜人參”的美譽，而且有“藥、食同源”的特性[1-2]，其營養豐富，是我國唯一的甜百合[3-4]。但隨著蘭州百合種植面積擴大、種植年限延長、種植區域集中以及輪作倒茬困難等問題，導致百合病害日趨嚴重[5-7]，其中百合鱗莖腐爛病是百合生產栽培和貯存期發生嚴重的病害之一，可造成植株枯萎，鱗莖腐爛[8-9]。研究發現，裂褶菌（Schizophyllum commune）可引起蘭州百合貯存期鱗莖腐爛病，造成鱗莖軟化腐爛，發病時鱗莖外層產生褐色病斑，病斑中央呈腐爛狀，并逐漸向四周擴大，腐爛組織不斷增加，最后整個鱗莖呈干腐狀，嚴重影響百合鱗莖的出芽率，易造成缺苗斷壟，對百合的生產和種植造成較大危害[10]。

目前，對于由裂褶菌引起的蘭州百合鱗莖腐爛病主要采用以化學藥劑防治為主的綜合防治策略。其中10%苯醚甲環唑WG、12.5%烯唑醇WP、75%百菌清WP、70%噁霉靈ME、80%代森錳鋅WP等藥劑對蘭州百合鱗莖腐爛病病原菌均有較好的活性和防效[11]，但長期使用化學藥劑不僅讓農業生態環境遭到嚴重破壞，還會導致農藥殘留、病原菌產生抗藥性等問題[12]。因此篩選以天然礦物原料為主要成分的無機化合物礦物源農藥防治蘭州百合病害以成為發展百合產業，提高百合品質的有效舉措，礦物源農藥主要包括硫制劑、銅制劑和磷制劑，目前使用的銅制劑主要為氫氧化銅和氧化亞銅，具有殺菌譜廣、無抗藥性、持效期較長、對農產品和環境較為安全等優點[13]。據報道，37.5%氫氧化銅WG 600倍液對蘋果樹腐爛病病原菌分生孢子的萌發有很好的抑制作用，抑制率達95.69%[14]。

但是，單一藥劑的使用不僅殺菌譜小，而且病害易產生抗藥性[15]，通過將不同作用機理的銅制劑與化學農藥合理混配，不但可以發揮混配劑多位點、多途徑作用的特點，還可擴大防治譜、提高藥效、減少用藥量、延緩病原菌對化學藥劑抗藥性的產生等一系列優勢[16]。本試驗通過測定兩種銅制劑對裂褶菌的抑菌作用、抑菌活性，并與化學農藥進行混配，篩選出對蘭州百合貯存期鱗莖腐爛具有較好防效的混配劑，研究結果對指導蘭州百合貯存期鱗莖腐爛病、延緩病原菌抗藥性、提高百合產量和品質，促進百合產業發展具有重要 ?意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試病原菌：引起蘭州百合鱗莖腐爛病病原菌裂褶菌（S.commune），保存于甘肅農業大學農藥學實驗室。供試培養基：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉14 g，去離子水1 L。供試植株：蘭州百合幼苗，種植于植物保護學院人工氣候室[（25±1）℃，相對濕度60%，光暗交替 ?16 h/8 h]。

供試藥劑：見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 銅制劑和化學農藥對裂褶菌的抑菌作用測定 病原菌活化：挑取保存于4 ℃冰箱中的裂褶菌，接種于PDA培養基中央，置于25 ℃恒溫培養箱培養4 d，保存備用。

在超凈工作臺上用滅菌水將表1中的9種供試藥劑按照推薦使用濃度的50倍配成母液，取 ?1 mL藥液加入到滅菌冷卻至50 ℃的49 mL PDA培養基中，充分搖勻，倒入3個直徑為90 mm提前滅好菌的玻璃培養皿中，制成含藥培養基，最終使各藥劑在培養基中的濃度為各自的推薦濃度，以加入1 mL無菌水的PDA培養基為對照。用打孔器在上述活化好的病原菌菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅，菌絲朝下接入含藥PDA培養基和對照PDA培養基中央，放置于25 ℃恒溫培養箱培養，每個處理重復3次，4 d后采用十字交叉法測量菌落直徑，并按下式計算藥劑的抑菌率。

抑菌率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-5）100%

1.2.2 銅制劑和化學農藥對裂褶菌室內活性比較 采用生長速率法[17]，將抑菌率在60%以上的藥劑，以推薦濃度為最高濃度，用滅菌水稀釋成5個系列濃度，按“1.2.1”中方法制成含毒培養基，接菌，置于25 ℃恒溫培養箱培養，每個處理重復3次，4 d后采用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同藥劑不同濃度的抑菌率，然后將藥劑濃度轉化為濃度對數值，為橫坐標，再將抑菌率轉化為概率值，為縱坐標，求出毒力回歸方程和有效中濃度（EC50），比較各藥劑的活性大小。

1.2.3 銅制劑與化學農藥混配對裂褶菌的毒效比率 采用王小藝等[12]方法進行最佳混配比例的篩選，即在銅制劑與化學農藥單劑活性測定的基礎上，將“1.2.2”中篩選出的毒力相對較強的5種藥劑86.2%氧化亞銅WP、46%氫氧化銅WG、500 g/L異菌脲SC、75%百菌清WP和80%代森錳鋅WP，根據“1.2.2”測得的各藥劑有效中濃度（EC50），用滅菌水擴大50倍配成藥液，并按體積比設0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、 ?7∶3、8∶2、9∶1、10∶0共11個比例進行混配，然后按照“1.2.1”方法制成含毒培養基，最終使各藥劑在培養基中的濃度為各自的有效中濃度（EC50）乘以其在混劑中所占的百分比，接菌，置于25 ℃恒溫培養箱培養，每個處理重復3次，以加入等量無菌水為對照，4 d后采用十字交叉法測量菌落直徑，計算實際抑菌率，按照下式計算各混劑預期抑菌率和混劑毒效比率，根據毒效比 ?率>1為增效作用；毒效比率=1為相加作用；毒效比率<1為拮抗作用的標準進行混配劑協同增效作用測評[18]。

混劑預期抑菌率=（單劑A實際抑菌率×A% +單劑B實際抑菌率×B%）×100%

式中：單劑A為混劑中一種藥劑；單劑B為混劑中的另一種藥劑；A%為單劑A在混劑中所占比例；B%為單劑B在混劑中所占比例。

毒效比率=混劑實際抑菌率/混劑預期抑菌率

1.2.4 銅制劑與化學農藥混配對裂褶菌的協同增效作用測定 采用Sun等[19]的共毒系數法 （co-toxicity coefficient，CTC）對“1.2.3”配比中毒效比率大于1的混配劑的增效作用進行進一步評價，將毒效比率大于1的混配劑配制成母液，稀釋成5個濃度梯度，按照“1.2.1”和“1.2.2”中方法測定各混配劑的抑菌率，求出毒力回歸方程和有效中濃度（EC50），以A藥劑作為標準藥劑，按下式分別計算各單劑毒力指數（TI）、混配劑的毒力指數（ATI）、混配劑的理論毒力指數（TTI）及共毒系數（CTC）。

單劑毒力指數（TI）=標準藥劑EC50/供試單劑EC50100

混劑實際毒力指數（ATI）=標準藥劑EC50/混合藥劑EC50100

混劑理論毒力指數（TTI）=A藥劑毒力指 ?數×A藥劑在混劑中的百分含量+ B藥劑毒力指數×B藥劑在混劑中的百分含量

共毒系數（CTC）=混劑實際毒力指數/混劑理論毒力指數100

共毒系數CTC大于120為增效作用，在 ?80～120為相加作用，小于80為拮抗作用。

1.2.5 銅制劑與化學農藥混配對鱗莖腐爛病的室內防效測定 根據毒效比率和共毒系數法將“1.2.4”中篩選出具有明顯協同增效作用的混配劑，采用離體鱗片法測定不同混配劑及其單劑對裂褶菌引起的蘭州百合鱗莖腐爛病的防治效果，選取大小一致且健康的百合鱗片，放入75%酒精中滅菌1 min、經無菌水清洗用濾紙吸去水分；根據單劑的有效中濃度配制母液以不同體積比配制具有增效作用的混配劑藥液，備用。

保護作用防治效果測定：將滅菌處理的百合鱗片分別浸入20 mL的混配劑及單劑的藥液中3 min，取出用濾紙吸去多余藥液，待藥液稍干后放入滅菌培養皿中（培養皿底部墊有經滅菌水浸濕的海綿，上覆一層濾紙），中間用吸水的脫脂棉球保濕，每皿4片鱗片，在每個鱗片中間接入直徑為5 mm的菌餅，每個處理重復3次，分別以混配劑中的不同礦物源、化學農藥單劑和滅菌水浸泡處理接菌的百合鱗片作為銅制劑對照、化學藥劑對照和空白對照，然后置于氣候箱中（25±1）℃，黑暗條件下培養4 d后，十字交叉法測量病斑直徑，并按下式計算防治效果。

防治效果=（對照病斑直徑-處理病斑直徑）/（對照病斑直徑-5）100%

治療作用防治效果測定：分別在滅菌處理的百合鱗片中間接入直徑為5 mm的菌餅，置于人工氣候箱中，每皿4片，每個處理重復3次，黑暗條件下培養36 h，去掉菌餅，進行藥液處理，參照上述方法設置處理組和對照組進行治療作用 ?測定。

1.3 數據統計與分析

試驗數據用Microsoft Excel 2010整理，采用SPSS 21.0軟件進行分析、卡方檢驗，并用Duncan氏新復極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 銅制劑與化學農藥對裂褶菌抑菌作用

通過抑菌作用試驗結果表明（表2），9種藥劑對裂褶菌均有不同程度的抑菌作用，其中3種銅制劑86.2%氧化亞銅WP、46%氫氧化銅WG、80%波爾多液WP和4種化學藥劑500 g/L異菌脲SC、3%噻霉酮ME、75%百菌清WP、80%代森錳鋅WP對裂褶菌的抑菌作用相同，抑菌率均為 ?100.00%，比化學藥劑70%噁霉靈SP、10%苯醚甲環唑WG抑菌率分別高13.23%和24.65%；且菌落直徑和抑菌率之間均存在極顯著差異 ?（P≤0.05）。

2.2 銅制劑與化學農藥對裂褶菌室內活性比較

活性比較結果表明，3種銅制劑對裂褶菌活性均有一定差異（表3）。其中86.2%氧化亞銅WP、46%氫氧化銅WG對裂褶菌的活性最好，EC50分別為39.42 μg/mL和89.60 μg/mL，但均低于500 g/L異菌脲SC、75%百菌清WP和80%代森錳鋅WP對裂褶菌的活性，分別比3種化學藥劑的EC50值平均高27.92 μg/mL和 ?78.10 μg/mL；經過卡方檢驗表明，3種銅制劑和6種化學農藥對裂褶菌毒力回歸方程的χ2值均小于7.81（p=0.05，df=3時，χ2=7.81），藥劑濃度對數與抑菌率的概率值之間回歸關系顯著，毒力回歸方程符合實際。

2.3 銅制劑與化學農藥混配對裂褶菌的協同增效作用

2.3.1 銅制劑與化學藥劑混配對裂褶菌毒效比率 通過混配劑毒效比率測定結果表明，不同配比下的混配劑對裂褶菌抑菌活性不同，其中 ?86.2%氧化亞銅WP與500 g/L異菌脲SC在 ?2∶8、3∶7、5∶5、6∶4、7∶3和8∶2、86.2%氧化亞銅WP與75%百菌清WP在4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2和9∶1、46%氫氧化銅WG與500? ?g/L異菌脲SC在5∶5、6∶4、7∶3、8∶2和9∶1以及46%氫氧化銅WG與75%百菌清WP在 ?6∶4、7∶3的混配比例下，毒效比率均大于1，表現為增效作用，46%氫氧化銅WG與80%代森錳鋅WP在7∶3、46%氫氧化銅WG與75%百菌清WP在9∶1的混配比例下，毒效比率等于1，表現為相加作用，其他混配劑在不同混配比例下，毒效比率均小于1，表現為拮抗作用（表4和 ?表5）。

2.3.2 銅制劑與化學農藥混配對裂褶菌協同增效作用 共毒系數測定結果表明，86.2%氧化亞銅WP與500 g/L異菌脲SC以2∶8、與75%百菌清WP以5∶5、8∶2、9∶1混配以及46%氫氧化銅WG與75%百菌清WP以6∶4混配后均表現為增效作用，EC50值分別為5.06 μg/mL、 ?12.60 μg/mL、25.47 μg/mL、30.16 μg/mL和21.49 μg/mL，CTC均大于120，在137.91以上；其他各混配劑在不同配比下均表現為相加或拮抗作用，篩選出了5種具有協同增效作用的混配劑，用于對裂褶菌引起的百合鱗莖腐爛病的防效評價 ?（表6）。

2.4 銅制劑與化學農藥混配劑對百合鱗莖腐爛病離體防效

通過對銅制劑與化學農藥混配劑對百合鱗莖腐爛病離體防效測定，結果表明5種混配劑對百合鱗莖腐爛病均有不同程度的防治效果，各混配劑保護作用和治療作用防效均在62.37%和 ?55.72%以上，且混配劑的防效明顯高于各自單劑，其中86.2%氧化亞銅WP與500 g/L異菌脲SC、75%百菌清WP分別以2∶8、5∶5混配后對百合鱗莖腐爛病防效最好，保護作用和治療作用防效分別為86.62%、90.80%和78.44%、 ?82.09%，與86.2%氧化亞銅WP、500 g/L異菌脲SC和75%百菌清WP單劑相比保護作用和治療作用防效平均分別提高5.90%、9.61%和 ?11.53%、14.64%，混配劑與各自單劑防效之間均存在極顯著差異（P≤0.05）；且各單劑及混配劑的保護作用防效均高于其治療作用防效（表7，圖1，圖2）。

3 討? 論

在植物病害防治中，銅制劑作為比較常用的一類藥劑，自開發利用至今已有200余年歷史，具有殺菌范圍廣，不易誘導病菌產生抗藥性，安全性強，對常見的真菌、細菌病害都有較好的防治作用，且耐雨水沖刷，持效期長，被廣泛應用于果樹、蔬菜、農作物病害防治中[20-21]，在現代農作物無公害生產中，隨著銅制劑農藥的多樣化，對銅制劑的選用也有了更多的選擇，其使用前景非常廣闊[22]。目前，在蘭州百合鱗莖腐爛病的防治中，常常使用500 g/L異菌脲SC、80%代森錳鋅WP、75%百菌清WP等化學藥劑進行防治[23-24]，而化學藥劑在使用時由于植物自身或自然環境等因素影響，藥效并不能完全發揮，且存在農藥殘留、污染嚴重等問題，篩選銅制劑及其混配劑對防治蘭州百合病害，延緩病原菌的抗藥性具有重要意義。據報道，當86.2%氧化亞銅WP單獨使用，在其質量濃度為0.17 μg/mL時，可有效防治蘋果斑點落葉病，抑菌率高達93.38%[25]；氧化亞銅與氧化鋅以1∶1混配時，其對辣椒炭疽病菌抑菌率保持在72%左右[26]。本研究也發現46%氫氧化銅WG和86.2%氧化亞銅WP單劑對裂褶菌的抑菌率均為100%，EC50分別為89.60? ?μg/mL和39.42 μg/mL，將86.2%氧化亞銅WP分別與化學藥劑75%百菌清WP、500 g/L異菌脲SC混配后，對裂褶菌引起的蘭州百合鱗莖腐爛病的防效均高于各自單劑的防效，甚至與化學藥劑75%百菌清WP和500 g/L異菌脲SC單劑相比提高的防效高于與86.2%氧化亞銅WP單劑相比提高的防效，并與各自單劑的防效相比，保護作用和治療作用防效平均分別提高5.90%、 ?9.61%和11.53%、14.64%，這兩種混配劑及單劑在發病前施藥的保護作用防治效果明顯高于發病后施藥的治療作用防治效果，且86.2%氧化亞銅WP與75%百菌清WP和500 g/L異菌脲SC混配后，當75%百菌清WP和500 g/L異菌脲SC的量分別減少50%和20%時，混配劑防效高于兩種化學藥劑單劑的防效；由此可見，將銅制劑與化學藥劑混配后應用于百合貯存期鱗莖腐爛病防治中，不僅可以降低化學農藥使用量、減輕污染，提高百合品質及防病效果，而且也有利于延緩病原菌抗藥性的產生，延長各藥劑的經濟使用壽命，對百合病害防治具有重要意義。但是，本研究僅對兩種銅制劑與化學藥劑500 g/L異菌脲SC和75%百菌清WP按不同配比混配后，得到的5種混配劑進行了室內離體防效測定，而有關它們在百合鱗莖低溫貯存期的防治效果、持效期以及與其他化學藥劑之間的配伍性、協同增效作用等問題尚未涉及，還有待進一步研究。

4 結? 論

篩選出了對裂褶菌抑菌作用和抑菌活性較高的兩種銅制劑單劑46%氫氧化銅WG和86.2%氧化亞銅WP以及與化學藥劑混配對蘭州百合貯存期鱗莖腐爛病具有增效作用的混配劑 ?86.2%氧化亞銅WP∶75%百菌清WP（5∶5）和 ?86.2%氧化亞銅WP∶500 g/L異菌脲SC ?（2∶8），保護作用和治療作用防效在86.62%和78.44%。

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Efficiency of? Mixture Copper Preparations and Chemical

Fungicides Agents in Controlling of Lanzhou Lily Bulb Rot Disease during Storage Period

Abstract The aim of this study was to screen the highest efficiency， the lowest-toxicity of copper preparations and their mixtures for controlling Lanzhou lily bulb rot disease during the storage periods， and to alleviate the resistance of pathogen in vitro.The inhibition rate， activity and synergistic effect of the copper preparations and their mixtures against Schizophyllum commune were determined by the growth rating method.The results showed that the cuprous oxide WP? ?（86.2%） and copper hydroxide WG （46%）， as well as chemical fungicides iprodione SC （500 g/L）， mancozeb WP （80%）， chlorothalonil WP （75%） presented higher inhibition activity on S.commune， of which the EC50 value ranged from? 6.44 to? 89.60 μg/mL.Five mixture agents with synergistic effects were obtained， including the cuprous oxide WP? ?（86.2%） with iprodione SC （500 g/L） （2∶8）， cuprous oxide WP? ?（86.2%） with chlorothalonil WP （75%） （5∶5， 8∶2， 9∶1） and copper hydroxide WG （46%） with chlorothalonil WP （75%） （6∶4）， of which their EC50 value and co-toxicity coefficient ranged from? ?5.06-30.16 μg/mL， and 137.91 to 221.03， respectively.Among the five mixture agents， the? ?cuprous oxide WP （86.2%） and chlorothalonil WP （75%） （5∶5）， cuprous oxide WP （86.2%） and iprodione SC （500 g/L） （2∶8） exhibited the highest protection and control effect on the lily bulb rot disease that caused by? S.commune.The protection and control effect of the cuprous oxide WP? ?（86.2%） and chlorothalonil WP （75%） （5∶5）， cuprous oxide WP （86.2%） and iprodione SC （500 g/L） （2∶8） were more than? 86.62% and 78.44%， respectively，compared with the single agents of 86.2% cuprous oxide WP， 500 g/L iprodione SC and 75% chlorothalonil WP.The control effects increased by 5.90%， 9.61% and 11.53%，14.64%， respectively.Additionally， the protection effect of the mixture and single agents were higher than the control effect.Finally， two mixture agents of? ?cuprous oxide WP （86.2%） and chlorothalonil WP （75%） （5∶5）， cuprous oxide WP （86.2%） and iprodione SC （500 g/L） （2∶8） that were screened and obtained， which had higher efficacy for controlling Lanzhou lily bulb rot disease.Its average efficacy was as high as 84.40%， and the efficacy of these two mixtures was significantly higher than that of their respective single doses.The results provide a scientific basis for guiding the rational mixing of copper preparations and chemical agents to effectively prevent and control lily bulb rot disease.

Key words Copper preparations; Chemical fungicides; Lily bulb rot disease; Synergistic effect; Control effect