對(duì)氯間甲酚及復(fù)方對(duì)氯間甲酚對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果

何學(xué)柏 遲依明 梁圣杰 李澍 杜孟澤 李秋明

摘 要 為驗(yàn)證苯酚類(lèi)消毒劑對(duì)雞球蟲(chóng)卵囊的抑殺作用，采用不同濃度的單體和復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑與未孢子化的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊共孵育，檢測(cè)其對(duì)卵囊孢子化率的影響；與孢子囊共同孵育，通過(guò)子孢子脫囊率評(píng)價(jià)其對(duì)子孢子釋放的干擾。孢子化卵囊經(jīng)過(guò)不同濃度消毒劑直接浸泡、糞便干擾下浸泡或噴霧處理后經(jīng)口接種雛雞，通過(guò)OPG和盲腸病變記分探究消毒劑處理對(duì)卵囊的繁殖力和雞的致病性的影響。結(jié)果顯示， 2種消毒劑均可使孢子化率和子孢子脫囊率顯著下降，且3種濃度的復(fù)方對(duì)氯間甲酚與3%氨水對(duì)照組（PC）的消毒效果無(wú)顯著差異。直接浸泡處理試驗(yàn)結(jié)果顯示，2%和3%復(fù)方對(duì)氯間甲酚 （HTS2和HTS3）具有更為顯著的抑殺效果，與PC無(wú)顯著差異；糞便干擾試驗(yàn)結(jié)果顯示，糞便作用下這兩種消毒劑對(duì)球蟲(chóng)卵囊仍有理想的抑殺效果；噴霧處理試驗(yàn)結(jié)果顯示，3%對(duì)氯間甲酚（HT3）對(duì)球蟲(chóng)卵囊抑殺效果最好，顯著優(yōu)于PC組（P＜0.05），而2%對(duì)氯間甲酚（HT2）、HTS2和HTS3組的抑殺效果與PC組無(wú)顯著差異。研究結(jié)果表明，不同濃度下這2種消毒劑對(duì)孢子化和未孢子化的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊都有一定的抑殺作用，綜合比較，復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑具有更強(qiáng)的抑殺球蟲(chóng)卵囊效果，具有代替氨水成為雞球蟲(chóng)消毒劑的潛能。

關(guān)鍵詞 對(duì)氯間甲酚；柔嫩艾美耳球蟲(chóng)；OPG；卵囊孢子化率；子孢子脫囊率

球蟲(chóng)病是目前養(yǎng)禽業(yè)常見(jiàn)的、危害嚴(yán)重的傳染性寄生蟲(chóng)病，可以造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失［1］。據(jù)估計(jì)，2016年全球因雞球蟲(chóng)病造成的經(jīng)濟(jì)損失超過(guò)了10.4億英鎊，其主要包括治療、死亡和控制成本［2］。一直以來(lái)，控制該疾病的策略包括疫苗接種和藥物預(yù)防，雖然疫苗和藥物在控制球蟲(chóng)病方面發(fā)揮了巨大作用，然而，持續(xù)使用不同的抗球蟲(chóng)藥已導(dǎo)致球蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性［3］，且中國(guó)已禁止在飼料中添加抗生素類(lèi)藥物；另外，由于傳統(tǒng)疫苗的局限性，至今仍未在中國(guó)小日齡出欄肉雞中廣泛使用，這為防治球蟲(chóng)病帶來(lái)了很大困難［4］。若能篩選或開(kāi)發(fā)一種有效的球蟲(chóng)卵囊消毒劑，對(duì)禽舍進(jìn)行有效的環(huán)境消毒，將是一種防控球蟲(chóng)病的有效舉措。然而，目前關(guān)于球蟲(chóng)卵囊消毒劑的研究資料十分有限，尚未見(jiàn)有一種臨床上可直接用于雞球蟲(chóng)卵囊消毒的消毒劑［5］。為了尋找廉價(jià)、高效和刺激性小的雞球蟲(chóng)卵囊消毒藥，本試驗(yàn)對(duì)候選的酚類(lèi)消毒劑進(jìn)行體內(nèi)體外測(cè)試，探究以對(duì)氯間甲酚為主要成分的消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊的孢子化率、孢子化卵囊的脫囊率，以及在雞體內(nèi)的繁殖力和致病力的影響，以期為防控球蟲(chóng)病積累相關(guān)的數(shù)據(jù)經(jīng)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)耗材

對(duì)氯間甲酚消毒劑（含對(duì)氯間甲酚100 g/L，CAS編號(hào)59-50-7）、復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑（含對(duì)氯間甲酚100 g/L，CAS編號(hào)59-50-7；含芐氯酚50 g/L ，CAS編號(hào)59-50-7）均購(gòu)自比利時(shí)浩衛(wèi)制藥股份有限公司；氨水、甲醛、重鉻酸鉀和氯化鈉均采自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。

1.2 球蟲(chóng)卵囊與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

柔嫩艾美耳球蟲(chóng)親本株由北京農(nóng)學(xué)院球蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室從河南某雞場(chǎng)分離、純化和保存。經(jīng)14日齡海蘭公雛雞傳代、復(fù)壯后，收集盲腸組織未孢子化的卵囊，一部分用于研究消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響；一部分置于2.5%重鉻酸鉀中，于28 ℃恒溫?fù)u床震蕩培養(yǎng)48 h，至孢子化率達(dá)到80%以上，保存于4 ℃冰箱。1日齡海蘭公雛雞購(gòu)自北京市華都峪口禽業(yè)有限責(zé)任公司，于無(wú)球蟲(chóng)環(huán)境飼養(yǎng)至14日齡。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

每個(gè)試驗(yàn)均分為8個(gè)處理組，即0.9%生理鹽水對(duì)照組（NC）、1%對(duì)氯間甲酚組（HT1）、2%對(duì)氯間甲酚組（HT2）、3%對(duì)氯間甲酚組（HT3）、1%復(fù)方對(duì)氯間甲酚組（HTS1）、2%復(fù)方對(duì)氯間甲酚組（HTS2）、3%復(fù)方對(duì)氯間甲酚組（HTS3）、3%氨水對(duì)照組（PC）。

1.4 消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響

將1×105個(gè)新鮮未孢子化的球蟲(chóng)卵囊分別與10 mL處理液在15 mL離心管中混懸處理18 h，每組3個(gè)重復(fù)。處理后用蒸餾水離心沖洗以除去殘余處理液。而后將離心沉淀的卵囊加入 ?2.5%重鉻酸鉀溶液中，于28 ℃恒溫?fù)u床內(nèi)孢子化48 h。顯微鏡下觀(guān)察100個(gè)以上的卵囊，計(jì)算出孢子化率，用于評(píng)價(jià)不同消毒劑對(duì)新鮮卵囊孢子化的抑制效果。

孢子化率=孢子化卵囊數(shù)/（孢子化卵囊數(shù)+未孢子化卵囊數(shù)）×100%

1.5 消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子脫囊逸出的影響

將1×105個(gè)已孢子化的球蟲(chóng)卵囊分別與各處理液混合，處理方式同“1.4”。將離心沉淀后的卵囊加入200 μL PBS緩沖液重懸，再加入50個(gè)直徑1 mm的玻璃珠，使用渦旋振蕩器震蕩，顯微鏡下觀(guān)察并計(jì)算卵囊的破壁率，至卵囊破壁率達(dá)到70%以上停止震蕩。將破壁后的球蟲(chóng)卵囊加入膽酸鹽消化液中（將0.75% 胰蛋白酶和10% 雞膽汁加入配置好的 PBS中，混勻），37 ℃孵育40 min。孵育完成后在顯微鏡下計(jì)算子孢子的脫囊數(shù)量，同時(shí)也記錄視野中的孢子囊數(shù)量，最后計(jì)算子孢子的脫囊率［6］。

子孢子脫囊率=子孢子數(shù)/（子孢子數(shù)+孢子囊數(shù)×2）×100%

1.6 消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的抑殺效果

將已孢子化的球蟲(chóng)卵囊分別與各處理液混合，處理方式同“1.4”。將處理好后的卵囊經(jīng)口接種14日齡的雛雞，每組6只，每只接種1×104個(gè)卵囊。感染后觀(guān)察血便狀態(tài)。接種第6 天清理糞便，收集第7、8 天的糞便，按照麥克馬斯特計(jì)數(shù)法［7］（McMasters method）計(jì)算OPG值，每一組取糞便樣品5份，每份計(jì)數(shù)2次后求平均值。第8 天剖殺所有試驗(yàn)雞，進(jìn)行盲腸病變記分并拍照［8］。通過(guò)OPG值和盲腸病變記分評(píng)價(jià)不同消毒劑對(duì)孢子化卵囊的感染活性抑殺效果。

1.7 消毒劑在雞糞便的影響下對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的抑殺效果

將1×105個(gè)已孢子化的球蟲(chóng)卵囊與3 g研磨成粉的雞糞便混勻，分別加入10 mL各處理液攪拌均勻處理18 h，用蒸餾水離心沖洗除去殘余處理液，經(jīng)口接種14日齡的雛雞，每組6只，每只雞接種1×104個(gè)卵囊。檢測(cè)指標(biāo)同“1.6”。

1.8 消毒劑對(duì)附著在固體表面上球蟲(chóng)的抑殺效果

使用消毒劑噴霧對(duì)附著在平皿表面的球蟲(chóng)卵囊進(jìn)行消毒效果評(píng)價(jià)，以模擬雞舍消毒場(chǎng)景。室溫條件下，每組取1×105個(gè)已孢子化的球蟲(chóng)卵囊平鋪于塑料培養(yǎng)皿（直徑=8.5 cm）中，自然風(fēng)干后，分別用各處理液噴霧6次，一共噴灑液體約0.85 g，且每次噴出的液體質(zhì)量為 （0.14±0.02）g。處理液作用1 h后用蒸餾水沖洗平皿，收集其中的卵囊，經(jīng)過(guò)離心沉淀后將卵囊最終加入2 mL清水混勻，經(jīng)口接種14日齡雛雞，每組5只，每只雞接種1×104個(gè)卵囊。檢測(cè)指標(biāo)同“1.6”。

1.9 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2019軟件繪圖以及使用SPSS 21軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。對(duì)于符合正態(tài)分布的兩組數(shù)據(jù)，方差不齊時(shí)使用帶有Welchs校正的非配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，方差等齊時(shí)使用非配對(duì)t檢驗(yàn)。當(dāng)兩組數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布時(shí)，使用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)。當(dāng)需要多組比較時(shí)，如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布則使用ANOVA檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布時(shí)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。當(dāng) ?P＜0.05時(shí)認(rèn)為數(shù)據(jù)“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響

與NC組相比，不同濃度下2種消毒劑對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊孢子化都有較強(qiáng)的抑制作用（P＜0.001）。其中HTS3組孢子化率最低，接近氨水對(duì)照組，并且兩者無(wú)顯著差異（P＞0.05，圖1）。表明3%復(fù)方對(duì)氯間甲酚對(duì)球蟲(chóng)卵囊孢子化的抑制效果最好。

與NC組相比，***表示具有極其顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001）；與PC組相比，ns表示無(wú)顯著差異（P＞0.05）。下同

2.2 不同消毒劑對(duì)球蟲(chóng)卵囊子孢子逸出的影響

為檢測(cè)不同濃度下2種消毒劑對(duì)孢子化卵囊的感染是否也有抑殺效果，使用不同濃度的消毒劑與孢子囊孵育，觀(guān)察其對(duì)子孢子釋放的干擾。結(jié)果顯示（圖2），與NC對(duì)照組相比，HT2、HT3、HTS1、HTS2和HTS3組在一定程度上抑制雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的脫囊（P＜0.001），其中HTS1、HTS2、HTS3這3個(gè)處理組子孢子脫囊率與氨水對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。表明同等濃度下，復(fù)方對(duì)氯間甲酚對(duì)孢子化卵囊的體外消毒效果要優(yōu)于對(duì)氯間甲酚，且與氨水效果一致（圖3）。

2.3 不同消毒劑直接浸泡處理下對(duì)球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果

雛雞感染模型試驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)價(jià)了這2種消毒劑對(duì)孢子化卵囊的消毒效果，將不同濃度消毒劑與孢子化的球蟲(chóng)卵囊處理18 h后，經(jīng)口接種雛雞。結(jié)果顯示，與NC組相比，2種消毒劑處理組的OPG值極顯著下降（P＜0.001）；與單方相比，HTS2和HTS3組具有更為顯著的抑殺效果；與PC組無(wú)顯著差異。盲腸評(píng)分結(jié)果與OPG結(jié)果相符（表1）。表明直接浸泡處理下2%和3%的復(fù)方對(duì)氯間甲酚對(duì)孢子化球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果 ?顯著。

2.4 不同消毒劑在雞糞便干擾下浸泡處理對(duì)球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果

糞便干擾試驗(yàn)結(jié)果顯示，與NC組相比（表2），被消毒劑處理后的所有組OPG值均顯著下降，其中HTS2、HTS3組具有較為良好的抑殺效果，與PC組無(wú)顯著差異（P＞0.05），HTS2、HTS3組盲腸評(píng)分較低。試驗(yàn)結(jié)果與無(wú)雞糞干擾試驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)一致，表明糞便作用下2%和3%的復(fù)方對(duì)氯間甲酚對(duì)球蟲(chóng)卵囊依然有理想的抑殺 ?效果。

2.5 不同消毒劑在噴霧處理下對(duì)球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果

使用消毒劑對(duì)附著在平皿表面的球蟲(chóng)卵囊進(jìn)

行噴霧處理后，與NC組相比（表3），不同濃度下2種消毒劑處理后OPG值均極顯著降低（P＜ ?0.001），其中HTS2組和HTS3組的OPG值與PC組相當(dāng)，無(wú)顯著差異（P＞0.05），而HT3組顯著低于PC組（P＜0.05）。盲腸病變記分顯示HT3、HTS2和HTS3組評(píng)分較低，與PC組無(wú)顯著差異。表明噴霧處理下2種消毒劑都具有較為良好的抑殺效果，其中HTS2組和HTS3組對(duì)球蟲(chóng)的抑殺效果與PC組相當(dāng)，而HT3組抑殺效果優(yōu)于PC組。

3 討? 論

雞感染球蟲(chóng)是由于經(jīng)口吞食了孢子化的球蟲(chóng)卵囊，在體外抑制球蟲(chóng)卵囊的孢子化進(jìn)程或殺滅孢子化卵囊，可從源頭上控制球蟲(chóng)病。本研究檢測(cè)對(duì)氯間甲酚和復(fù)方對(duì)氯間甲酚2種消毒劑對(duì)球蟲(chóng)卵囊的抑殺效果，結(jié)果表明，不同濃度下2種消毒劑對(duì)孢子化的和未孢子化的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊都有一定的抑殺作用，其中復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑具有較強(qiáng)的抑殺效果，且呈劑量依賴(lài)。

雞球蟲(chóng)的卵囊壁是一個(gè)堅(jiān)固的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且能夠耐受機(jī)械性損傷，卵囊對(duì)于化學(xué)制品、消化酶、洗滌液以及低滲溶液的破壞具有相當(dāng)?shù)牡挚沽ΓＲ?guī)的消毒劑很難破壞球蟲(chóng)的卵囊壁結(jié)構(gòu)［9］。陳漢忠等［10］經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)百毒消、七消液和2%的燒堿均對(duì)卵囊無(wú)效；安健等［11］的試驗(yàn)也說(shuō)明卵囊對(duì)許多消毒劑，如福爾馬林、84消毒液、來(lái)蘇兒等具有較強(qiáng)的抵抗力；近期，郝桂英等［12］發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化氫、碘酊、獸用百毒殺對(duì)球蟲(chóng)卵囊孢子化無(wú)明顯影響； Gadelhaq等［13］發(fā)現(xiàn)艾美耳球蟲(chóng)卵囊在使用Dettol、TH4、苯酚、Virkon○[KG-*3/4][HT6”SS]R[HT]后，能夠進(jìn)行正常的孢子化過(guò)程以及顯示出完整的卵囊壁；韓利方等［5］研究顯示，250 mg/L妥曲珠利、3%甲醛、4%苯酚、0.5%過(guò)氧乙酸、5%NaOH+10%NaCl和5%NaOH對(duì)球蟲(chóng)卵囊活性具有一定的抑制作用，孢子化抑制率超過(guò)10%，但是對(duì)孢子化卵囊?guī)缀鯚o(wú)抑殺作用。目前，經(jīng)過(guò)多人反復(fù)研究證實(shí)合適濃度的氨水對(duì)球蟲(chóng)卵囊具有高效的抑殺作用［5，14-15］，韓利方等［5］研究發(fā)現(xiàn)1%～8%的氨水與未孢子化卵囊作用1 h以上，均可100%抑殺球蟲(chóng)卵囊活性；周作勇等［14］發(fā)現(xiàn)，7%氨水處理組球蟲(chóng)卵囊的孢子化率僅為2.18%。本試驗(yàn)中3%氨水組作為陽(yáng)性對(duì)照，孢子化率為0.33%，極顯著降低卵囊產(chǎn)量和病變記分，這都證實(shí)氨水對(duì)球蟲(chóng)卵囊發(fā)育具有極強(qiáng)的抑殺作用。然而，氨水強(qiáng)烈的刺激性氣味使其在密集的養(yǎng)殖方式下使用顯然是不適合的［16］。因此，在生產(chǎn)實(shí)踐中缺少控制球蟲(chóng)的消毒劑。各種酚類(lèi)消毒劑在日常生活中常被使用，但關(guān)于它們抑殺艾美耳球蟲(chóng)卵囊效力的信息十分有限［17］。因此，本研究選用對(duì)氯間甲酚和復(fù)方對(duì)氯間甲酚兩種酚類(lèi)消毒劑對(duì)雞球蟲(chóng)卵囊進(jìn)行抑殺試驗(yàn)。

有研究報(bào)告提出一些針對(duì)球蟲(chóng)的消毒策略，這些策略對(duì)獸醫(yī)和人類(lèi)健康都具有重要意義［18-19］。盡管球蟲(chóng)在禽的流行病學(xué)中具有重要意義，但關(guān)于使用化學(xué)消毒劑降低環(huán)境中，特別是在被污染表面上的艾美耳卵囊的活力或傳染性的報(bào)道有限［20］。球蟲(chóng)卵囊極小， 容易與灰塵一起漂浮在空氣中，散布到鄰近雞舍和區(qū)域，亦可造成感染［21］。因此，本試驗(yàn)用不同濃度消毒劑對(duì)物體表面噴灑消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，結(jié)果表明不同濃度下2種消毒劑對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊都具有一定的抑殺效果，其中HT3組抑殺效果最好，優(yōu)于氨水對(duì)照組。本試驗(yàn)中氨水組采用噴灑方式作用雞球蟲(chóng)卵囊，與直接浸泡處理相比，糞便卵囊排出量要更高，原因可能是氨水易揮發(fā)，不易起到確實(shí)的消毒效果。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，3%復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑既能很好地抑制卵囊孢子化又能抑制子孢子出囊率，表明該消毒劑可控制環(huán)境中球蟲(chóng)卵囊孢子化和抑制子孢子脫囊，用該消毒劑對(duì)球蟲(chóng)進(jìn)行物體表面噴灑消毒效果模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)時(shí)，能夠減輕腸道病變，減少糞便中卵囊的排出量，表明通過(guò)噴霧可削弱球蟲(chóng)的感染能力，進(jìn)一步說(shuō)明復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑可作為球蟲(chóng)消毒劑。球蟲(chóng)消毒劑還能與各種抗球蟲(chóng)藥聯(lián)合應(yīng)用，將環(huán)境撲殺與抗球蟲(chóng)藥物控制雞體內(nèi)球蟲(chóng)卵囊排出的作用結(jié)合，減少抗藥性的產(chǎn)生，共同防治雞球蟲(chóng)病。而且球蟲(chóng)消毒劑是外用消毒藥，它能減輕球蟲(chóng)藥所引起的毒副作用和藥物殘留，提高經(jīng)濟(jì)效益，保證人們的生命健康［22］。這提示復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑在預(yù)防和控制雞球蟲(chóng)病方面有廣闊的應(yīng)用前景。

本研究結(jié)果表明，不同濃度下對(duì)氯間甲酚和復(fù)方對(duì)氯間甲酚這2種消毒劑對(duì)孢子化的和未孢子化的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊都有一定的抑殺作用，其中復(fù)方對(duì)氯間甲酚消毒劑具有更強(qiáng)的抑殺效果。

參考文獻(xiàn) Reference：

［1］ FATOBA A J，ADELEKE M A.Diagnosis and control of chicken coccidiosis：a recent update［J］.Journal of Parasitic Diseases，2018，42（4）：483-493.

［2］ BLAKE D P，KNOX J，DEHAECK B，et al.Re-calculating the cost of coccidiosis in chickens［J］.Veterinary Research，2020，51（1）：115.

［3］ 郝振凱，畢菲菲，韓貞艷，等.雞球蟲(chóng)耐藥性研究進(jìn)展［J］. ?中國(guó)獸醫(yī)雜志，2019，55（6）：64-68.

HAO ZH K，BI F F，HAN ZH Y，et al.Research progress on resistance of coccidiosis in chicken ［J］.Chinese Journal of Veterinary Medicine，2019，55（6）：64-68.

［4］ 湯新明，索 勛，劉賢勇.集約化養(yǎng)殖模式下雞球蟲(chóng)病的防控［J］.寄生蟲(chóng)與醫(yī)學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2018，25（4）：279-286.

TANG X M，SUO X，LIU X Y.Control of chicken coccidiosis in the modern poultry industry in China ［J］.Acta Parasitologica et Medica Entomologica Sinica，2018，25（4）：279-286.

［5］ 韓利方，閆文朝，李亞云，等.球蟲(chóng)消毒劑的篩選及氨水對(duì)艾美耳球蟲(chóng)卵囊抑殺條件的優(yōu)化［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2018， ?45（12）：3601-3607.

HAN L F，YAN W CH，LI Y Y，et al.Screening of disinfectants against coccidian and optimization of inhibitory conditions of ammonia hydroxide against oocysts of Eimeria tenella ［J］.China Animal Husbandry & Veterinary Medicine，2018，45（12）：3601-3607.

［6］ 吳惠賢，魏文康，謝宏料，等.判斷消毒劑對(duì)雞球蟲(chóng)孢子化卵囊抑殺效果的新方法脫囊抑制試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1998，18（6）：619-620.

WU H X，WEI W K，XIE H L，et al.Excyst inhibition? ?test- a new method for judging disinfectants inhibition effect on coccidia oocyst［J］.Chinese Journal of Veterinary Science，1998，18（6）：619-620.

［7］ LARSEN S，HAUG A，WILLIAMS R B.Counting coccidial oocysts in chicken faeces：a comparative study of a standard McMaster technique and a new rapid method［J］.Veterinary Parasitology，2006，136（3/4）：233-242.

［8］ 王偉偉，王新莊，張寶龍，等.中藥復(fù)方口服液對(duì)雞柔嫩艾美爾球蟲(chóng)病的療效［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18（6）：56-58.

WANG W W，WANG X ZH，ZHANG B L，et al.Pharmacodynamics of chinese herbal medicine prescription on Eimeria tenella in chickens［J］.Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica，2009，18（6）：56-58.

［9］ 邢 濤，周光勝，郁星星，等.亞硝基谷胱甘肽對(duì)雞球蟲(chóng)脫囊的影響［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，54（9）：2173-2175.

XING T，ZHOU G SH，YU X X，et al.Effects of s-nitroso-glutathione on excystation of Eimeria tenella in chicken ［J］.Hubei Agricultural Sciences，2015，54（9）：2173-2175.

［10］陳漢忠，王忠田，蘇 勇，等.消毒劑抑殺雞球蟲(chóng)卵囊的初步試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸藥雜志，2005，39（10）：37-39.

CHEN H ZH，WANG ZH T，SU Y，et al.Primary studies on the effect of several disinfectants restraining oocyst sporulation ［J］.Chinese Journal of Veterinary Drug，2005，39（10）：37-39.

［11］ 安 健，王黎霞，汪 明，等.離體條件下球蟲(chóng)卵囊子孢子囊的釋放［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，21（1）：18-20.

AN J，WANG L X，WANG M，et al.The release conditions of coccidia sporozoites oocyst in vitro ［J］.Journal of Beijing University of Agriculture，2006，21（1）：18-20.

［12］ 郝桂英，何學(xué)謙，陳永霞.8種消毒藥對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（2）：171-173.

HAO G Y，HE X Q，CHEN Y X.The effect of 8 disinfectants on sporulation of rabbit coccidian［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2018（2）：171-173.

［13］ GADELHAQ S M，ARAFA W M，ABOLHADID S M.In vitro activity of natural and chemical products on sporulation of? Eimeria species oocysts of chickens［J］.Veterinary Parasitology，2018，15（251）：12-16.

［14］ 周作勇，王芝英，胡世君，等.6種殺蟲(chóng)劑對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊孢子化率及致病力的影響［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2015，51（3）：91-94.

ZHOU Z Y，WANG ZH Y，HU SH J，et al.Effect of 6 insecticides on the sporulation rate and pathogenicity of Eimeria tenella［J］.Chinese Journal of Veterinary Medicine，2015，51（3）：91-94.

［15］ 索 勛，李國(guó)清.雞球蟲(chóng)病學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1998.

SUO X，LI G Q.Avian Coccidian and Coccidiosis［M］.Beijing：China Agricultural University Press，1998.

［16］ 季 輝，張軍忍，江善祥.球蟲(chóng)消殺劑（Oo-stat）的配方優(yōu)化研究［J］.中國(guó)家禽，2009，31（2）：23-25.

JI H，ZHANG J R，JIANG SH X.Study on optimized trial of Oo-stat formula ［J］.China Poultry，2009，31（2）：23-25.

［17］ WILLIAMS R B.Laboratory tests of phenolic disinfectants as oocysticides against the chicken coccidium Eimeria tenella［J］.The Veterinary Record，1997，141（17）：447-448.

［18］ KING B J，MONIS P T.Critical processes affecting cryptosporidium oocyst survival in the environment［J］.Parasitology，2007，134（3）：309-323.

［19］ DUMETRE A，MOULIN L，DUBEY J P，et al.Effects of ozone and ultraviolet radiation treatments on the infectivity of Toxoplasma gondii oocysts［J］.Veterinary Parasitology，2008，153（3/4）：209-213.

［20］ DAUGSCHIES A，BANGOURA B，LENDNER M.Inactivation of exogenous endoparasite stages by chemical disinfectants：current state and perspectives［J］.Parasitology Research，2013，112（3）：917-932.

［21］ 張宏偉，韓曉輝，侯繼勇，等.雞球蟲(chóng)病暴發(fā)的流行病學(xué)因素［J］.中國(guó)獸醫(yī)科技，2004，34（5）：75-77.

ZHANG H W，HAN X H，HOU J Y，et al.Epidemiology factors of coccidiosis outbreaks among chicken［J］.Chinese Journal of Veterinary Science and Technology，2004， ?34（5）：75-77.

［22］ 易永萍，李美娣，武 力.一種球蟲(chóng)消毒劑預(yù)防雞球蟲(chóng)病的效果試驗(yàn)［J］.福建畜牧獸醫(yī)，2018，40（1）：21-24.

YI Y P，LI M D，WU L.Study on effect of oocide to prevent chicken coccidiosis ［J］.Fujian Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2018，40（1）：21-24.

Inhibitory and Killing Effect? of p-chloro-meta-cresol and p-chloro-meta-cresol Compound on Eimeria tenella Oocysts

Abstract To investigate the inhibitory effect of phenolic disinfectants on chicken coccidial oocysts，different concentrations of monomer or compound formulated p-chloro-m-cresol disinfectants were incubated with un-sporulated Eimeria tenella oocysts in vitro，and their effects on the sporulation rate of oocysts were detected. Besides，the sporozoite oocysts were incubated，and the interference of different disinfectants on the release of sporozoites was evaluated by sporozoite decapsulation rate. And then the sporulated oocysts were treated with three different ways：1） immersion with different concentrations of disinfectants; 2） immersion with feces; 3） spray，and then infect chicks by oral administration. The fecundity and pathogenicity of sporulated oocysts treated with disinfectants were measured by two indicators：oocysts per gram of feces （OPG） and cecal lesion score. The results showed that application of each disinfectant significantly reduced the rate of sporulation as well as release of sporozoites of Eimeria tenella，which had comparable effect with chlorom-cresol and 3% ammonia solution （P＞0.05）. Under the other two different treatments，the fecundity and pathogenicity of Eimeria tenella on chicken? significantly decreased. There was no significant difference between HTS2，HTS3，and the PC group （P＞0.05）.? The spraying treatment showed that 3% para-chloro-m-cresol （HT3） inhibited the killing activity of coccidial oocyst，which was even better than PC （P＜0.05），while 2% para-chloro-m-cresol （HT2），HTS2，and HTS3 had similar inhibitory effect compared with PC，and there was no significant difference （P＞0.05）. This study revealed that these two disinfectants （at different concentrations） have notable inhibitory effects on both sporulated and unsporulated Eimeria tenella oocysts. Generally，the compound formula has better effect than the monomer formular，suggesting that it has potential of compound p-chloro-m-cresol disinfectant on coccidial oocyststo to replace ammonia solution.

Key words p-chloro-meta-cresol；Eimeria tenella；OPG;? Sporulation rates of oocysts；Excystation rate of sporozoites