蘿卜硫素調(diào)節(jié)腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息調(diào)節(jié)器1/過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α信號(hào)通路對(duì)妊娠高血壓大鼠妊娠結(jié)局的影響

馬合紅，侯秀真，馮妙肖，張俊峰

作者單位：滄州市中心醫(yī)院產(chǎn)科，河北 滄州061001

妊娠期高血壓疾病（HDP）嚴(yán)重威脅母親和嬰兒的健康［1］。HDP的主要生理變化是全身性血管痙攣和各器官灌注減少，主要臨床癥狀為高血壓、水腫和蛋白尿［2］。但HDP的病因尚未完全闡明。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，也是調(diào)節(jié)生物能量代謝的關(guān)鍵分子，其調(diào)節(jié)沉默信息調(diào)節(jié)器1（SIRT1）的活性，活化的AMPK和SIRT1進(jìn)一步調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α）的活性，AMPK/SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路充當(dāng)能量傳感網(wǎng)絡(luò)，在線(xiàn)粒體生物合成、能量代謝和氧化應(yīng)激中起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用［3-4］。已有研究證明AMPK在胚胎和胎盤(pán)發(fā)育中起著至關(guān)重要的作用，其失調(diào)可能導(dǎo)致妊娠相關(guān)疾病，如宮內(nèi)生長(zhǎng)受限、胎盤(pán)功能不全或先兆子癇［5-6］。蘿卜硫素（SFN）是硫代葡萄糖苷的主要水解活性產(chǎn)物，屬于異硫氰酸酯家族，廣泛存在于西蘭花、羽衣甘藍(lán)、胡蘿卜等十字花科蔬菜中，其具有抗氧化、抗炎、抗癌和免疫調(diào)節(jié)功能［7］。已有報(bào)道，SFN可改善妊娠高血壓婦女的內(nèi)皮功能和血壓，但并未對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行研究闡述［8］。另外也有研究表明SFN可以通過(guò)抑制c-Jun氨基末端激酶/p38絲裂原活化蛋白激酶（JNK/p38 MAPK）通路的激活減輕左旋硝基精氨酸甲基酯（L-NAME）誘導(dǎo)的胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的炎癥反應(yīng)并可以抑制細(xì)胞凋亡［9］。基于A(yíng)MPK/SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路在胚胎發(fā)育過(guò)程中的重要影響以及SFN對(duì)胚胎的積極影響，本研究推測(cè)SFN可通過(guò)AMPK/SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路影響妊娠結(jié)局。因此，本研究從2021年3月至2022年12月，通過(guò)建立L-NAME誘導(dǎo)的HDP大鼠模型，探討SFN是否可通過(guò)AMPK/SIRT1/PGC-1a信號(hào)通路影響HDP大鼠妊娠結(jié)局。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 70只SD雌性大鼠和35只SD雄性大鼠購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所［生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2021-0012］。所有大鼠飼養(yǎng)在（23±2）℃（55±5）%恒溫恒濕動(dòng)物房中，人工12 h光暗循環(huán)，自由飲水飲食。本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 L-NAME（批號(hào)orb134513）購(gòu)自武漢博歐特生物科技有限公司；蘿卜硫素（批號(hào)BJ-0406）購(gòu)自北京凱詩(shī)源生物科技有限公司；硫酸鎂注射液（10 mL∶2.5 g，H41025692，批號(hào)20220421）購(gòu)自裕松源藥業(yè)有限公司；AMPK抑制劑Compound C（批號(hào)HY-13418A）購(gòu)自MCE公司；尿蛋白定量測(cè)試盒（批號(hào)C035-2-1）、血肌酐（SCr）測(cè)定試劑盒（批號(hào)C011-2-1）、血尿素氮（BUN）測(cè)試盒（批號(hào)C013-2-1）購(gòu)自南京建成生物工程研究所；胎盤(pán)生長(zhǎng)因子（PLGF）抗體（批號(hào)ab9542）、可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1（sFLT-1）抗體（批號(hào)ab176561）和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗（批號(hào)ab6721）購(gòu)自英國(guó)abcam公司；內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOs）抗體（批號(hào)PA5-16887）、p-eNOs抗體（批號(hào)36-9100）、p-AMPK抗體（批號(hào)PA5-17831）、AMPK抗體（批號(hào)PA5-17398）、SIRT1抗體（批號(hào)MA5-15677）、PGC-1a抗體（批號(hào)PA5-72948）和β肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體（批號(hào)MA1-140）購(gòu)自美國(guó)賽默飛公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及分組 將大鼠雌雄比例為2∶1合籠飼養(yǎng)，觀(guān)察雌鼠陰栓判斷雌鼠受孕情況，共有70只雌鼠受孕成功，當(dāng)可以觀(guān)察到雌鼠陰栓時(shí)記為妊娠第1天。所有妊娠大鼠分為對(duì)照組、HDP組、SFN-L組［10］（SFN 5 mg/kg）、SFN-M組（SFN 15 mg/kg）、SFN-H組（SFN 30 mg/kg）、硫酸鎂組［11］（硫酸鎂注射液100 mg/kg）、Compound C組［3］（SFN 30 mg/kg+AMPK抑制劑Compound C 0.25 mg/kg），每組10只。

除對(duì)照組大鼠外其余大鼠妊娠第13天起尾靜脈注射7 mg/kg L-NAME，連續(xù)注射4 d，對(duì)照組大鼠尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液，于妊娠第13天和第16天檢測(cè)大鼠尾動(dòng)脈壓驗(yàn)證造模是否成功，當(dāng)收縮壓高于110 mmHg時(shí)，顯示造模成功［12］。造模成功后，將70只雌性孕鼠分為各從造模成功第1天（妊娠第17天）起，SFN-L、M、H組、硫酸鎂組每日通過(guò)肌內(nèi)注射相應(yīng)劑量的SFN和硫酸鎂鎂注射液，對(duì)照組、HDP組每日肌內(nèi)注射相應(yīng)劑量的0.9%氯化鈉溶液，抑制劑組在肌肉注射SFN的同時(shí)尾靜脈注射相應(yīng)劑量的Compound C，其余組注射相應(yīng)劑量的0.9%氯化鈉溶液，連續(xù)給藥至妊娠第20天。給藥結(jié)束后（妊娠第21天）使用3%戊巴比妥鈉麻醉各組大鼠，腹主動(dòng)脈取血，并進(jìn)行剖宮術(shù)取出胎鼠和胎盤(pán)組織，取出大鼠腎臟組織，觀(guān)察胎鼠，胎盤(pán)組織快速稱(chēng)重后在液氮中保存。

1.4 血壓測(cè)量?jī)x檢測(cè)HDP大鼠尾動(dòng)脈壓 分別在妊娠第17天和第20天，使用血壓儀檢測(cè)各組大鼠尾動(dòng)脈壓。

1.5 試劑盒法檢測(cè)各組大鼠24 h尿蛋白含量和血清SCr、BUN水平 將各組妊娠大鼠放入代謝籠中收集第17天和第20天24 h尿液，檢測(cè)24 h尿蛋白含量。腹主動(dòng)脈收集的血液在4 ℃下3 000 r/min轉(zhuǎn)速，離心半徑15 cm離心10 min獲得血清，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清SCr和BUN水平。

1.6 觀(guān)察檢測(cè)妊娠結(jié)局指標(biāo) 妊娠第21天，各組大鼠剖腹取胎，記錄胎鼠質(zhì)量，記錄胎死率和產(chǎn)仔數(shù)。

1.7 HE染色觀(guān)察胎盤(pán)組織和腎臟組織變化 取各組5只大鼠胎盤(pán)和腎臟組織，經(jīng)固定、脫水、包埋、切片后，使用HE染色，顯微鏡下觀(guān)察胎盤(pán)和腎臟組織病理情況。

1.8 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白水平 另外各組5只大鼠胎盤(pán)組織使用放射免疫沉淀法裂解緩沖液（RIPA）裂解后提取蛋白質(zhì)并用二喹啉甲酸（BCA）方法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。蛋白質(zhì)經(jīng)變性后使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離蛋白并轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，然后使用5%脫脂奶粉封閉，再加入一抗sFLT-1、PLGF、peNOs、eNOs、p-AMPK、AMPK、SIRT1、PGC-1a和β-actin，4 ℃孵育過(guò)夜，然后加入二抗在室溫下孵育2 h，洗膜后加入顯色液觀(guān)察，使用Image J軟件量化各組蛋白灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并表示為。數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血壓和24 h尿蛋白情況 妊娠第17天，與對(duì)照組比較，HDP組、SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組、硫酸鎂組、Compound C組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量水平升高（P＜0.05），但各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明HDP大鼠模型建立成功；妊娠第20天，與對(duì)照組相比，HDP組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量水平升高（P＜0.05）；與HDP組相比，SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組和硫酸鎂組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量水平降低（P＜0.05）；與SFN-H組相比，Compound C組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量比較/

表1 各組大鼠血壓和24 h尿蛋白定量比較/

注：HDP為妊娠期高血壓疾病，SFN-L為蘿卜硫素低劑量，SFN-M為蘿卜硫素中劑量，SFN-H為蘿卜硫素高劑量。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與HDP組相比，P＜0.05。③與SFN-L組相比，P＜0.05。④與SFN-M組相比，P＜0.05。⑤與SFN-H組相比，P＜0.05。

組別對(duì)照組HDP組SFN-L組SFN-M組SFN-H組硫酸鎂組Compound C組F值P值血壓/mmHg 24 h尿蛋白定量/（mg/L）妊娠第20天123.17±20.19 679.38±64.32①595.91±53.05②532.23±49.76②③461.16±35.15②③④482.74±39.58②558.85±41.23⑤153.84＜0.001鼠數(shù)10 10 10 10 10 10 10妊娠第17天102.42±4.22 149.77±5.16①151.85±5.07①148.62±4.96①154.46±4.59①150.17±5.01①153.28±5.38①142.72＜0.001妊娠第20天101.63±4.15 152.52±4.79①136.91±5.16②129.25±4.54②③117.33±4.19②③④121.72±4.61②137.96±4.73⑤127.97＜0.001妊娠第17天122.72±20.06 676.66±63.94①669.43±61.09①673.51±65.57①662.92±69.61①679.43±74.16①682.25±60.25①114.82＜0.001

2.2 各組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)、胎鼠病死率及胎盤(pán)質(zhì)量 與對(duì)照組相比，HDP組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)及胎盤(pán)質(zhì)量降低，胎鼠病死率升高（P＜0.05）；與HDP組相比，SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組和硫酸鎂組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)及胎盤(pán)質(zhì)量升高，胎鼠病死率降低（P＜0.05）；與SFN-H組相比，Compound C組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)及胎盤(pán)質(zhì)量降低，胎鼠病死率升高（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)、胎鼠病死率及胎盤(pán)質(zhì)量比較/

表2 各組大鼠胎鼠質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)、胎鼠病死率及胎盤(pán)質(zhì)量比較/

注：HDP為妊娠期高血壓疾病，SFN-L為蘿卜硫素低劑量，SFN-M為蘿卜硫素中劑量，SFN-H為蘿卜硫素高劑量。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與HDP組相比，P＜0.05。③與SFN-L組相比，P＜0.05。④與SFN-M組相比，P＜0.05。⑤與SFN-H組相比，P＜0.05。

組別對(duì)照組HDP組SFN-L組SFN-M組SFN-H組硫酸鎂組Compound C組F值P值胎盤(pán)質(zhì)量/g 0.58±0.12 0.32±0.06①0.38±0.05②0.43±0.09②③0.51±0.10②③④0.49±0.08②0.41±0.06⑤10.99＜0.001鼠數(shù)10 10 10 10 10 10 10胎鼠質(zhì)量/g 4.75±0.43 2.32±0.19①2.86±0.26②3.27±0.29②③3.95±0.21②③④3.84±0.32②3.18±0.25⑤※76.66＜0.001產(chǎn)仔數(shù)/個(gè)11.70±0.69 7.10±0.57①8.40±0.62②9.20±0.51②③10.10±0.65②③④9.80±0.59②8.60±0.63⑤57.12＜0.001胎鼠病死率/%0.96±0.11 28.57±2.08①20.06±1.74②13.12±1.69②③5.71±0.53②③④5.99±0.61②15.53±1.17⑤520.03＜0.001

2.3 各組大鼠胎盤(pán)病理情況 如圖1，對(duì)照組大鼠胎盤(pán)結(jié)構(gòu)正常；較對(duì)照組大鼠，HDP組大鼠胎盤(pán)組織胎盤(pán)絨毛數(shù)量減少，胎盤(pán)結(jié)構(gòu)縮小，部分絨毛顯示纖維蛋白樣壞死；SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組和硫酸鎂組較HDP組，胎盤(pán)結(jié)構(gòu)異常程度減輕，胎盤(pán)病變得到緩解，然而Compound C組加劇了胎盤(pán)病變程度。

圖1 各組大鼠胎盤(pán)組織病理情況（HE染色×400）

2.4 各組大鼠腎臟病變情況 對(duì)照組大鼠腎臟組織形態(tài)良好，腎小球結(jié)構(gòu)正常；較對(duì)照組，HDP組大鼠腎小球數(shù)目減少，結(jié)構(gòu)異常，血清SCr和BUN水平升高（P＜0.05）；與HDP組比較，SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組和硫酸鎂組腎小球結(jié)構(gòu)異常程度減輕，病變情況有所改善，血清SCr和BUN水平降低（P＜0.05）；與SFN-H組相比，Compound C組大鼠腎小球病變程度加重，血清SCr和BUN水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表3，圖2。

圖2 各組大鼠腎臟組織病理情況（HE染色×400）

表3 各組大鼠血清SCr和BUN水平比較/

表3 各組大鼠血清SCr和BUN水平比較/

注：SCr為血肌酐，BUN為血尿素氮，HDP為妊娠期高血壓疾病，SFN-L為蘿卜硫素低劑量，SFN-M為蘿卜硫素中劑量，SFN-H為蘿卜硫素高劑量。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與HDP組相比，P＜0.05。③與SFN-L組相比，P＜0.05。④與SFN-M組相比，P＜0.05。⑤與SFN-H組相比，P＜0.05。

BUN/（mmol/L）3.96±0.27 8.17±0.72①6.93±0.67②6.28±0.64②③5.53±0.49②③④5.79±0.55②6.46±0.61⑤49.89＜0.001組別對(duì)照組HDP組SFN-L組SFN-M組SFN-H組硫酸鎂組Compound C組F值P值鼠數(shù)10 10 10 10 10 10 10 SCr/（μmol/L）37.49±2.97 75.93±5.94①67.56±5.52②59.18±5.09②③48.67±5.33②③④49.72±4.86②62.64±5.71⑤63.58＜0.001

2.5 各組大鼠胎盤(pán)組織蛋白表達(dá)情況 較對(duì)照組，HDP組大鼠胎盤(pán)組織PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1a蛋白表達(dá)降低，sFLT-1表達(dá)升高（P＜0.05）；與HDP組比較，SFN-L組、SFN-M組、SFN-H組和硫酸鎂組大鼠胎盤(pán)組織PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1a蛋白表達(dá)升高，sFLT-1表達(dá)降低（P＜0.05）；與SFN-H組相比，Compound C組大鼠胎盤(pán)組織PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1a蛋白表達(dá)降低，sFLT-1表達(dá)升高（P＜0.05），見(jiàn)圖3，表4。

圖3 各組大鼠胎盤(pán)組織sFLT-1、PLGF、p-eNOs和AMPK/SIRT1/PGC-1a通路蛋白表達(dá)情況

表4 各組大鼠胎盤(pán)組織sFLT-1、PLGF、p-eNOs和AMPK/SIRT1/PGC-1a通路蛋白表達(dá)情況/

表4 各組大鼠胎盤(pán)組織sFLT-1、PLGF、p-eNOs和AMPK/SIRT1/PGC-1a通路蛋白表達(dá)情況/

注：sFLT-1為可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1，PLGF為胎盤(pán)生長(zhǎng)因子，eNOs為內(nèi)皮型一氧化氮合酶，p-eNOs為磷酸化eNOs，SIRT1為沉默信息調(diào)節(jié)器1，PGC-1α為過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α，AMPK為腺苷酸活化蛋白激酶，p-AMPK為磷酸化AMPK，β-actin為β肌動(dòng)蛋白，HDP為妊娠期高血壓疾病，SFN-L為蘿卜硫素低劑量，SFN-M為蘿卜硫素中劑量，SFN-H為蘿卜硫素高劑量。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與HDP組相比，P＜0.05。③與SFN-L組相比，P＜0.05。④與SFN-M組相比，P＜0.05。⑤與SFN-H組相比，P＜0.05。

p-AMPK/AMPK 0.94±0.13 0.36±0.07①0.49±0.09②0.63±0.10②③0.75±0.12②③④0.73±0.11②0.57±0.08⑤17.32＜0.001組別對(duì)照組HDP組SFN-L組SFN-M組SFN-H組硫酸鎂組Compound C組F值P值鼠數(shù)10 10 10 10 10 10 10 sFLT-1/β-actin 0.53±0.09 0.98±0.10①0.91±0.15②0.79±0.12②③0.66±0.11②③④0.68±0.14②0.75±0.12⑤8.14＜0.001 PLGF/β-actin 1.34±0.16 0.73±0.14①0.81±0.11②0.94±0.13②③1.16±0.15②③④1.13±0.12②0.89±0.09⑤13.84＜0.001 p-eNOs/eNOs 0.96±0.14 0.32±0.05①0.41±0.08②0.55±0.09②③0.69±0.11②③④0.67±0.05②0.53±0.07⑤27.43＜0.001 SIRT1/β-actin 0.89±0.12 0.31±0.04①0.42±0.07②0.55±0.09②③0.67±0.10②③④0.64±0.11②0.48±0.08⑤21.89＜0.001 PGC-1a/β-actin 1.02±0.14 0.59±0.12①0.68±0.14②0.77±0.11②③0.89±0.13②③④0.85±0.14②0.74±0.15⑤5.68＜0.001

3 討論

HDP是妊娠母親在妊娠約20周后突然出現(xiàn)高血壓，這種疾病在正常妊娠過(guò)程中出現(xiàn)，是孕婦和圍產(chǎn)期兒童死亡的主要原因，在所有妊娠中發(fā)生率約為6%～8%，主要并發(fā)癥包括子癇、胎盤(pán)早剝（AP）、宮內(nèi)發(fā)育遲緩（IUGR）、低出生體質(zhì)量（LBW）嬰兒甚至?xí)l(fā)生新生兒死亡［13-14］。在本研究中，HDP大鼠血壓升高，24 h尿蛋白定量水平增加，胎盤(pán)和胎鼠質(zhì)量以及產(chǎn)仔數(shù)降低，并導(dǎo)致了嚴(yán)重的胎盤(pán)和腎臟組織學(xué)的改變，表明HDP大鼠造模成功。

SFN是一種天然存在于十字花科蔬菜中的有機(jī)硫，已證明SFN具有保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，改善缺血再灌注損傷后的視網(wǎng)膜、腎臟和肝臟功能，另外，SFN也可改善心血管疾病（如慢性高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化等）［15］。Padron等［16］也發(fā)現(xiàn)SFN可通過(guò)激活核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）來(lái)調(diào)節(jié)胎膜中的抗氧化反應(yīng)，從而改善妊娠結(jié)局。本研究發(fā)現(xiàn)SFN可以降低HDP大鼠血壓，降低HDP大鼠胎鼠病死率和胎盤(pán)病變程度，增加HDP大鼠胎盤(pán)質(zhì)量、產(chǎn)仔數(shù)、胎鼠質(zhì)量，表明SFN對(duì)HDP大鼠妊娠結(jié)局也具有改善作用，并且發(fā)現(xiàn)SFN對(duì)HDP大鼠妊娠結(jié)局的改善作用隨著給藥劑量的增加，效果更加明顯，SFN高劑量組作用效果與臨床常用藥硫酸鎂效果相當(dāng)。本研究還發(fā)現(xiàn)SFN可增加HDP大鼠胎盤(pán)組織PLGF、p-eNOs的蛋白表達(dá)，降低sFLT-1的表達(dá)。sFLT-1可以通過(guò)抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的合成來(lái)影響滋養(yǎng)層細(xì)胞的浸潤(rùn)，從而導(dǎo)致胎盤(pán)絨毛的淺層植入和先兆子癇的發(fā)展，已有研究表明sFLT-1水平隨著HDP嚴(yán)重程度的增加而顯著增加［17］。sFLT-1的表達(dá)會(huì)促進(jìn)胎盤(pán)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，導(dǎo)致局部炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而促進(jìn)平滑肌痙攣并導(dǎo)致胎盤(pán)灌注阻力系數(shù)增加。PLGF對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的血管生成，增殖，遷移和侵襲表現(xiàn)出促進(jìn)作用，在胎盤(pán)組織中高度表達(dá)［18］。另外，通過(guò)研究懷孕小鼠發(fā)現(xiàn)，一氧化氮（NO）在調(diào)節(jié)免疫力和血壓方面起著重要作用，一氧化氮合酶（NOS）的急性阻斷抑制NO合成導(dǎo)致血壓升高，抑制eNOS表達(dá)可導(dǎo)致高血壓，蛋白尿，血小板減少癥，腎損傷和胎兒生長(zhǎng)受限［19］。由此表明SFN是通過(guò)調(diào)節(jié)HDP大鼠胎盤(pán)組織PLGF、peNOs和sFLT-1的表達(dá)來(lái)改善HDP大鼠妊娠結(jié)局。

HDP的發(fā)生伴有腎損傷和蛋白尿，HDP病人腎動(dòng)脈血管痙攣而致血流量減少，腎臟灌注壓下降，腎小球梗死，基底膜受損，通透性增加，導(dǎo)致大量蛋白尿的生成［20］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SFN緩解HDP大鼠腎小球結(jié)構(gòu)病變情況，降低血清SCr和BUN水平，并呈劑量依賴(lài)性，其高劑量作用效果與硫酸鎂作用效果相當(dāng)。Scr和BUN的升高可能是腎小球損傷的信號(hào)，會(huì)增加氧化應(yīng)激和自由基導(dǎo)致腎小球壞死并影響腎臟過(guò)濾能力［21］。Li等［22］也研究發(fā)現(xiàn)預(yù)防性給予他達(dá)拉非可改善L-NAME誘發(fā)的高血壓、蛋白尿、孕期母體體質(zhì)量減輕、胎兒生長(zhǎng)受限，并減輕胎盤(pán)和腎組織的炎癥反應(yīng)。Hamza等［23］也研究發(fā)現(xiàn)G蛋白耦聯(lián)受體APJ的內(nèi)源性配體（apelin-13）可降低L-NAME 誘發(fā)的先兆子癇大鼠血清SCr和BUN水平，并可改善先兆子癇大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)。而本研究結(jié)果與其有相似之處，表明SFN可緩解HDP大鼠腎損傷，改善妊娠結(jié)局。

作為一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，AMPK對(duì)生物能量的代謝具有觸發(fā)作用，當(dāng)AMPK被激活時(shí)，它可以監(jiān)測(cè)線(xiàn)粒體的功能和細(xì)胞的能量狀態(tài)，并激活SIRT1的活性，進(jìn)一步激活PGC-1α［24］，已有研究報(bào)道AMPK參與妊娠期血壓的控制和腎臟生理學(xué)［25］。另有研究發(fā)現(xiàn)SFN可通過(guò)上調(diào)了p-AMPK，SIRT1和PGC-1a的表達(dá)激活A(yù)MPK/SIRT1/PGC-1a信號(hào)通路，緩解LPS誘導(dǎo)的腸上皮損傷，其抑制劑拮抗了SFN對(duì)腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用［27］。值得注意的是本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SFN呈劑量依賴(lài)性增加p-AMPK、SIRT1和PGC-1a的蛋白表達(dá)激活A(yù)MPK/SIRT1/PGC-1a通路改善HDP大鼠妊娠結(jié)局，AMPK抑制劑Compound C的加入減弱了SFN對(duì)HDP大鼠妊娠結(jié)局的改善作用，有研究顯示白藜蘆醇會(huì)改善高脂飲食和L-NAME聯(lián)合誘發(fā)的孕鼠后代的程序性高血壓，其通過(guò)激活A(yù)MPK/PGC-1α通路降低氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)后代血壓以防止發(fā)育性高血壓［26］。本結(jié)果與其基本一致，提示SFN可能是通過(guò)激活A(yù)MPK/SIRT1/PGC-1a通路改善HDP大鼠妊娠結(jié)局。

綜上所述，SFN可以改善HDP大鼠蛋白尿、高血壓、腎損傷和妊娠結(jié)局，其通過(guò)激活A(yù)MPK/SIRT1/PGC-1a發(fā)揮作用。這一結(jié)果可為SFN治療HDP提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。