WAS基因c.1339-12T>A 新發(fā)變異及表達分析

何 蕊,高變變,裴利國,3,黃 蕾,許曉雪,趙君利,劉春蓮,3

濕疹血小板減少伴免疫缺陷綜合征(WAS)是一種罕見的X連鎖隱性遺傳病,女性攜帶基因,男性發(fā)病[1]。以濕疹、血小板減少和免疫缺陷為臨床表現(xiàn)[2],易患自身免疫病和惡性腫瘤,人群中發(fā)病率約為1/10萬至1/100萬,多于六個月以內(nèi)的嬰兒期起病,目前研究認為,該疾病是由在造血細胞中表達的WAS基因變異引起的[3]。WAS位于Xp11.22-p11.23,編碼一種WAS蛋白(WASp),WASp表達變化將影響淋巴細胞、血小板內(nèi)信號轉導和細胞骨架組合,從而影響血小板生成、聚集和淋巴細胞遷移等功能[4]。本研究篩選并驗證該WAS家系的致病基因位點,為疾病臨床診斷、遺傳咨詢及PGT治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年2月就診于寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院生殖醫(yī)學中心遺傳門診的一例WAS家系,見圖1(封二)。咨詢者(Ⅱ2)曾生育2個男孩,均在1歲左右不幸夭折,以反復面色蒼白、皮膚黏膜出血為主要臨床表現(xiàn),多次血常規(guī)提示貧血、血小板減少,額部可見散在濕疹,臨床確診WAS綜合征,無近親結婚。咨詢者哥哥(Ⅱ4)在四歲因流鼻血去世,其弟弟、妹妹均正常,咨詢者父母表型均正常。

1.2 方法

1.2.1 外周血RNA提取及cDNA擴增 采集外周靜脈血3～5mL,2%乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)抗凝,采用血液/組織/細胞總RNA提取試劑盒,提取咨詢者及其父母三人樣本RNA,進行反轉錄得到cDNA。

1.2.2 全外顯子測序 采用靶向捕獲技術+高通量測序技術檢測人類基因組中約2萬個基因的外顯子區(qū)域以及上下游20bp信息(本檢測由貝康醫(yī)學檢驗實驗室完成)。……