應(yīng)用白僵菌防治花生蠐螬的研究

時榮榮 王慶雷

（滄州市農(nóng)林科學(xué)院 河北滄州 061001）

花生是我國最重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物，總產(chǎn)量占全球的40%左右[1-2]。 蠐螬是花生田的地下害蟲優(yōu)勢種群，主要啃食花生種芽、幼根、果針、初生果莢和莢果， 造成缺苗斷壟以及花生產(chǎn)量和品質(zhì)的下降，花生因蠐螬危害一般造成減產(chǎn)20%～40%，嚴(yán)重的減產(chǎn)70%～80%，甚至絕收[3-4]。 傳統(tǒng)蠐螬防治以化學(xué)防治為主，但化學(xué)農(nóng)藥長期過度使用引起的安全性差、高殘留、抗藥性、環(huán)境污染等一系列問題越來越受到人們的重視[5]。 且蠐螬長期棲息于土壤中，為害隱蔽，通常使發(fā)現(xiàn)為害和施用藥劑滯后，不好把握防治時機[6]，導(dǎo)致地下害蟲防治成為花生生產(chǎn)中的難題。

白僵菌以其殺蟲譜廣、致病力強、應(yīng)用效果好、無殘留、對非靶標(biāo)生物安全等特點，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)病蟲害防治中。 但白僵菌專化性較強，各菌株之間毒力差別較大， 因此在應(yīng)用真菌進(jìn)行生物防治的過程中，針對不同地區(qū)、不同種類的害蟲經(jīng)常要挖掘土著病原真菌和篩選高毒力菌株。

本研究根據(jù)白僵菌可以在野外長期存活的特點，將篩選到的高毒力白僵菌菌株制成可濕性粉劑，在播種期時隨花生一起施入土壤中， 考察評價其對蠐螬的控制效果。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株：布氏白僵菌（Beauveria brongniartii）BJ4-28 分離自河北滄州采集的金龜子僵死成蟲，菌種保存于滄州市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所。

供試?yán)ハx：供試暗黑鰓金龜（Holotrichia parallela）幼蟲由滄州市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

1.2 白僵菌對蠐螬的藥效試驗

1.2.1 孢子懸浮液的配置 取培養(yǎng)15 d 左右的白僵菌，在超凈工作臺內(nèi)加入含0.05% Tween-80 的蒸餾水刮除菌落，洗出平皿內(nèi)的孢子，轉(zhuǎn)移到滅菌的三角瓶中，使用恒溫磁力攪拌器中速攪拌20 min，使其均勻分散，配置成母液。

按照10 倍稀釋法將菌液稀釋，在顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)分生孢子數(shù)，5 次重復(fù)。 然后將分生孢子濃度稀釋至1×108CFU/mL、1×107CFU/mL、1×106CFU/mL、1×105CFU/mL、1×104CFU/mL 5 個濃度的孢子懸浮液備用。

孢子濃度（CFU/mL）=每小格內(nèi)孢子數(shù)平均值×4×106×稀釋倍數(shù)

1.2.2 對蠐螬的室內(nèi)毒力測定 將不同濃度孢子懸

浮液分別拌于100 g 滅菌的干燥土中， 并混勻，使土的濕度為18%， 最終生測濃度為2×107CFU/g、2×106CFU/g、2×105CFU/g、2×104CFU/g、2×103CFU/g。六孔生測板每個孔內(nèi)接入1 頭2 齡暗黑鰓金龜幼蟲，并放入5～6 粒浸泡發(fā)芽的麥粒，將拌好的土均勻分裝至相應(yīng)濃度下的生測板中， 然后放置于溫度為26°C，光照L∶D 為14∶10 的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)。 每個重復(fù)36 頭，3 個重復(fù)。 以0.05% Tween-80 無菌水作為陰性對照，將其加入到滅菌的干燥土中，以使土的濕度為18%。 每5 d 觀察1 次，并視取食情況添加新的麥粒，保持六孔板內(nèi)的土壤濕度適宜，連續(xù)觀察30 d。統(tǒng)計死蟲數(shù)，并計算試蟲死亡率、校正死亡率。

死亡率=（試蟲總數(shù)－活蟲數(shù)）/試蟲總數(shù)×100%

校正死亡率=［（處理組死亡率－對照組死亡率）/（1－對照組死亡率）］×100%。

1.2.3 田間藥效試驗 將上述BJ4-28 菌株制成含量為1×1010CFU/g 的可濕性粉劑，備用。 田間試驗于2023 年5 月在滄州市農(nóng)林科學(xué)院前營試驗站進(jìn)行，該地塊常種植花生，蟲口基數(shù)較大，土壤肥力中上、地勢平坦、排灌方便、周圍無高稈作物。 播前撒施復(fù)合肥40 kg，深耕旋地，平整土面。 起壟種植，壟寬0.6 m，雙行雙粒播種，12 000 株/畝。

（1）試驗設(shè)計：試驗共設(shè)5 個處理，①用4 kg/畝菌劑穴施處理； ②用6 kg/畝菌劑穴施處理； ③用8 kg/畝菌劑穴施處理； ④化學(xué)藥劑處理區(qū)用高巧（60%吡蟲啉）30 mL +水250 mL 拌種； ⑤空白對照區(qū)。 每個處理3 次重復(fù)， 每小區(qū)面積為66.7 m2，共15 個小區(qū)。

（2）蟲口密度調(diào)查：花生收獲前7 d 進(jìn)行取樣調(diào)查，每個處理隨機取5 點，每點取1 m2，調(diào)查蠐螬頭數(shù)，計算防蟲效果。

（3）花生被害情況及產(chǎn)量調(diào)查：收獲時每小區(qū)隨機5 點取樣，對花生進(jìn)行受害調(diào)查，每點取1 m2，調(diào)查花生莢果受害情況， 并根據(jù)花生受害程度做分級處理，計算出各處理的受害指數(shù)，最后對試驗小區(qū)收獲的花生進(jìn)行測產(chǎn)，計算花生產(chǎn)量。

花生莢果分級標(biāo)準(zhǔn)[7]，0 級：莢果完好，無被害狀；1 級：果皮受害，形成麻果，果仁完好；2 級：果皮穿孔，半數(shù)果仁受害；3 級：果仁全部受害，無完好果仁。

計算各處理對蠐螬的防治效果及增產(chǎn)效果，并使用DPS 對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

防蟲效果=［（對照區(qū)蟲口數(shù)－藥劑處理區(qū)蟲口數(shù)）／對照區(qū)蟲口數(shù)］×100%

受害指數(shù)=（各級受害數(shù)×相對級數(shù)值）／（調(diào)查總數(shù)×最高級值）×100%

防治效果=［（對照區(qū)莢果受害指數(shù)－藥劑處理區(qū)莢果受害指數(shù)）／對照區(qū)莢果受害指數(shù)］×100%

干果畝產(chǎn)量=濕果畝產(chǎn)量×50%×85%

增產(chǎn)效果=（藥劑處理區(qū)產(chǎn)量－對照區(qū)產(chǎn)量）／對照區(qū)產(chǎn)量×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 白僵菌對暗黑鰓金龜幼蟲的室內(nèi)毒力測定

由圖1 可知，處理30 d 后，在含有白僵菌BJ4-28濃度2×103CFU/g、2×104CFU/g、2×105CFU/g、2×106CFU/g、2×107CFU/g 的土壤中， 暗黑鰓金龜2 齡幼蟲的死亡率分別是5.56% 、8.33% 、27.78% 、61.11%、83.33%。 證明該菌株能夠有效侵染目標(biāo)昆蟲，且濃度越高致死作用越強。 該菌株對暗黑鰓金龜2 齡幼蟲的致死中濃度LC50為1.53×105CFU/g，而在2×107CFU/g 濃度菌量條件下，LT50為15.69 d （R2=0.976 4）（圖2）。

圖1 白僵菌BJ4-28 菌株對暗黑鰓金龜幼蟲的毒力

圖2 白僵菌BJ4-28 菌株對暗黑鰓金龜幼蟲的毒力回歸線

2.2 田間防治效果

由表1 可知，隨著施用劑量的增加，防蟲效果明顯提升，畝施白僵菌BJ4-28 菌劑4 kg、6 kg、8 kg 3 個處理的防治效果分別為28.30%、45.28%、81.13%，使用高巧拌種防治效果為77.36%。由表2 可知，每畝施用8 kg 菌劑劑量處理下，花生好果數(shù)明顯增加，受害指數(shù)顯著低于空白對照，防效最高為79.45%，增產(chǎn)效果18.21%，此處理與化學(xué)農(nóng)藥處理效果差異不顯著。

表1 不同處理蠐螬平均蟲口密度

表2 不同劑量白僵菌處理對花生防治及增產(chǎn)效果的影響

3 討論與結(jié)論

鑒于病原真菌的毒力易受其地理種群及目標(biāo)害蟲的影響， 所以應(yīng)用昆蟲病原真菌防治害蟲必須篩選針對靶標(biāo)昆蟲具有高毒力的菌株。 除此之外， 還要把握防治時機及使用方法， 才能取得良好的防治效果。

金龜子除成蟲期外均在土壤中生活， 發(fā)育歷期較長，對花生的整個生育期皆可為害。 近年由于秸稈還田，使用未腐熟的有機肥吸引金龜子產(chǎn)卵，暖冬、防治不利等因素使得蟲量逐年積累， 造成蠐螬危害日益嚴(yán)重[8-9]。 且由于蠐螬隱蔽于地下，難以預(yù)期為害，現(xiàn)花生又多為覆膜種植，加大了施藥難度[10]。本試驗根據(jù)白僵菌能夠在土壤中存活的特性， 在花生播種期施用，將施菌與播種同時進(jìn)行，既簡化了農(nóng)事操作，又能達(dá)到防蟲的效果，易于被農(nóng)民接受。

白僵菌需要一定劑量才能達(dá)到有效的殺蟲目的，且不同菌株的有效殺蟲劑量也不盡相同，所以明確該菌株的施藥劑量及施藥方式是必須的。

本研究所述BJ4-28 菌株對暗黑鰓金龜毒力較強， 而暗黑鰓金龜是滄州地區(qū)花生田蠐螬最大優(yōu)勢種，約占蠐螬總發(fā)生量的88.2%[11]，所以田間試驗效果較好， 而其對于其他種類地下害蟲的防治效果有待進(jìn)一步驗證。