精子DNA碎片率與年齡、精液參數(shù)和生活習(xí)慣相關(guān)性分析

劉哲琪 孫潔*

單一的精液常規(guī)分析難以對(duì)男性精子質(zhì)量進(jìn)行全面分析和評(píng)估。近些年男性生殖門(mén)診中就診人數(shù)日漸增長(zhǎng)，不育的原因也越來(lái)越復(fù)雜。目前，受到生活方式、飲食習(xí)慣，環(huán)境及壓力等因素，導(dǎo)致發(fā)病率越來(lái)越高［1］。在特發(fā)性不育患者中有近20%的人群患有高水平的精子DNA 損傷，這成為了一個(gè)導(dǎo)致男性不育的重要因素［2］。傳統(tǒng)的精液常規(guī)檢查，已經(jīng)不能夠全面的反映精子功能的指標(biāo)。在精子DNA 損傷程度方面，許多研究發(fā)現(xiàn)增加的DNA 碎片率（DFI）會(huì)對(duì)受孕率產(chǎn)生不利影響，精子中的DNA 損傷會(huì)影響后代的健康和幸福［3］。精子DFI 作為臨床上反映精子遺傳物質(zhì)完整性的重要指標(biāo)，影響男性的生育功能［4］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)精子DFI 這項(xiàng)指標(biāo)可以更好的評(píng)價(jià)男性生殖功能［5］。此外，男性精液質(zhì)量還會(huì)隨著年齡的增長(zhǎng)而下降，這會(huì)導(dǎo)致精子DFI 損傷，其具體表現(xiàn)通常是精子量的減少、精子畸形概率和程度增加以及精子活力減弱等。精子DNA 是重要的遺傳信息載體，而精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性是精卵正常受精以及胚胎發(fā)育的關(guān)鍵保證［6-7］。本資料旨在分析男性精子DFI 與年齡、精液參數(shù)和生活習(xí)慣相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020 年6 月至2022 年6 月于本院就診的405 例男性作為觀察組，觀察組年齡22～55 歲，平均（32.23±4.94）歲，婚后性生活正常，未采取任何避孕措施，未孕＞1 年。納入標(biāo)準(zhǔn)：世界衛(wèi)生組織制定的《人類(lèi)精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；本次研究已充分告知患者，并取得其同意與配合。

1.2 研究方法 （1）精液標(biāo)本采集：患者在禁欲2～7 d后，通過(guò)手淫法采集其全部精液于干燥、潔凈、無(wú)菌的廣口采精杯中，立即送往實(shí)驗(yàn)室，接受并放入37 ℃的恒溫水浴箱中。（2）精液分析：記錄精液液化時(shí)間，待精液完全液化后，觀察并記錄精液量、pH 值、粘稠度及顏色。再將精液標(biāo)本進(jìn)行充分混勻，使用移液器吸取4 μL 精液于精子檢測(cè)板上，采用SAS 賽司計(jì)算機(jī)輔助精子分析（CASA）系統(tǒng)檢測(cè)標(biāo)本，其中對(duì)每份標(biāo)本進(jìn)行≥200 個(gè)的精子隨機(jī)采樣。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用stata15 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。首先進(jìn)行指標(biāo)的描述性統(tǒng)計(jì)分析，其次對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，最后采用Logistic 回歸分析方法研究抽煙、蒸桑拿對(duì)精子DFI 的影響。

2 結(jié)果

2.1 各個(gè)指標(biāo)的水平 見(jiàn)表1。

表1 各個(gè)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)分析

2.2 各指標(biāo)相關(guān)性分析 相關(guān)系數(shù)表反映了兩個(gè)變量間的相關(guān)關(guān)系。從表2 可見(jiàn)，年齡與多個(gè)變量相關(guān)，主要體現(xiàn)在年齡與精子DFI 正相關(guān)、與精子正常形態(tài)率負(fù)相關(guān)、與雌二醇負(fù)相關(guān)。年齡與精子的質(zhì)量指標(biāo)相關(guān)性強(qiáng)。精子DFI 與精子正常形態(tài)、PR 負(fù)相關(guān)（碎片率越高，正常形態(tài)率越低、前向運(yùn)動(dòng)精子也越低）。精子正常形態(tài)與PR 正相關(guān)，與精子濃度正相關(guān)。雌二醇的含量與Zn 含量負(fù)相關(guān)。

表2 各指標(biāo)相關(guān)性分析

2.3 生活習(xí)慣相關(guān)性分析 從表3 可見(jiàn)，在0.05 顯著性水平下不抽煙、不喝酒與精子DFI 相關(guān)，即不抽煙、不喝酒的群體碎片率相對(duì)較高，不抽煙、不喝酒與正常形態(tài)率、PR 前向精子正相關(guān)，即不抽煙、不喝酒的群體正常精子形態(tài)率相對(duì)較高，PR 運(yùn)動(dòng)精子率也較高。蒸桑拿與精子DFI 也具有相關(guān)關(guān)系，蒸桑拿的群體DFI 更高。此外，考慮到本研究中可能存在的其他可變因素，本研究仍需進(jìn)一步的大樣本量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

表3 生活習(xí)慣相關(guān)性分析

2.4 回歸模型變量設(shè)置 以精子碎片率為因變量進(jìn)行基礎(chǔ)回歸，模型變量設(shè)置情況如表4 所示。

表4 回歸模型變量設(shè)置

2.5 回歸分析結(jié)果 模型一用精子DFI 進(jìn)行基礎(chǔ)回歸發(fā)現(xiàn)，抽煙、蒸桑拿都會(huì)增加精子DFI 的程度，并且抽煙對(duì)精子DFI 的影響最大，同時(shí)年齡也是影響精子DFI 的最大因素，隨著年齡的上升，精子DFI 下降。模型二進(jìn)一步將不抽煙、每日抽煙數(shù)量劃分為不抽煙、每日＜10、10～20、＞20 的連續(xù)變量，喝酒劃分為不喝酒、偶爾喝酒、經(jīng)常喝酒的連續(xù)變量，發(fā)現(xiàn)與模型一的結(jié)果一致，吸煙、蒸桑拿都會(huì)導(dǎo)致精子DFI 的提升。模型三中，剔除不抽煙群體，加入是否超過(guò)10 年煙齡這一變量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)每日的抽煙數(shù)量依然會(huì)影響精子DFI，同時(shí)煙齡超過(guò)10 年的群體精子DFI 也更高。

見(jiàn)表5。

表5 回歸分析結(jié)果

3 討論

不育癥作為一項(xiàng)男性生育疾病，嚴(yán)重影響社會(huì)生育質(zhì)量。近年來(lái)流行病學(xué)領(lǐng)域?qū)υ摬“Y進(jìn)行大量且深入的調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)男性精液質(zhì)量在近些年呈現(xiàn)出較為明顯的下降情況，而這一現(xiàn)象和當(dāng)前適育人群的社會(huì)生活方式以及整體生態(tài)環(huán)境污染及惡化存在緊密的聯(lián)系。傳統(tǒng)的精液常規(guī)檢查，已經(jīng)不能夠全面的反映精子功能的指標(biāo)。為減少不育問(wèn)題給家庭及社會(huì)帶來(lái)的負(fù)面影響，需針對(duì)不育癥男性患者的精液進(jìn)行全面且透徹的分析，以更直觀了解其生育功能，采用精子DFI 檢測(cè)來(lái)判斷精子功能好壞已經(jīng)受到越來(lái)越廣泛的關(guān)注。本文研究證實(shí)精子DFI 和男性年齡、生殖激素水平、生活習(xí)慣與精子DFI 有相關(guān)性。生活習(xí)慣或許是造成男性生育力下降的機(jī)制之一，但是考慮到當(dāng)前實(shí)驗(yàn)在選擇研究對(duì)象時(shí)可能存在未有效鑒別和剔除其他可變因素的情況，本研究尚需進(jìn)行大樣本量驗(yàn)證。作者期望通過(guò)本研究分析精液常規(guī)檢查指標(biāo)和形態(tài)學(xué)與精子DNA 完整性的相關(guān)性以及活力、研究者年齡等因素對(duì)精子DNA 完整性的影響，指導(dǎo)臨床中醫(yī)藥的治療。