不同比例雌雄激素誘導(dǎo)大鼠前列腺炎癥、纖維化的研究

王曉東 張雪圓 田野△ 王元林 江克華 李凱 王振 李濤

(1.貴州省人民醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽 550002;2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽 550004)

下尿路癥狀(lower urinary tract symptoms,LUTS)是老年男性常見病、多發(fā)病,表現(xiàn)為排尿躊躇、尿流變細(xì)、夜尿增多、尿頻、尿急及尿不盡感[1],是多種致病因素共同作用結(jié)果,除動力性、機械性梗阻外,還可能與前列腺其他病變相關(guān),如炎癥、纖維化等。前列腺是性激素依賴器官,N.Enatsu等人[2]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服度他雄胺組以及去勢組大鼠相比對照組大鼠前列腺纖維化程度明顯更嚴(yán)重。而F.Cantiello等人[3]也認(rèn)為前列腺纖維化使得前列腺部尿道彈性變差,增加了膀胱出口的阻力。前列腺纖維化程度及膠原含量與LUTS癥狀程度呈正比關(guān)系[4]。本研究通過不同比例濃度雌雄激素作用于SD大鼠,觀察其前列腺組織炎癥、纖維化程度的表現(xiàn)差異。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 主要設(shè)備石蠟脫水機(武漢俊杰電子有限公司);石蠟包埋機(武漢俊杰電子有限公司);病理切片機(上海徠卡儀器有限公司);組織攤片機(科迪儀器設(shè)備有限公司);烤箱(天津萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司)光學(xué)顯微鏡(Nikon,日本);全波長酶標(biāo)儀(Molecular Devices美國)。

1.1.2 主要試劑雌二醇E2(APEXBIO,美國);雙氫睪酮 DHT(APEXBIO,美國);無水乙醇(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);二甲苯(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);HE染液(武漢賽維爾生物科技有限公司);E2定量試劑盒(酶免);DHT定量試劑盒(酶免);Masson染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司):中性樹膠(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 實驗方法(1)4月齡大鼠根據(jù)不同比例濃度雌雄激素隨機分為未去勢對照組;未去勢對照+溶藥媒介(玉米油)組;去勢對照+溶藥媒介(玉米油)組;去勢后(手術(shù)切除雙側(cè)睪丸)不同比例濃度雌雄激素處理組:去勢+0.15 mg/kg DHT 組;去勢+0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2組;去勢+0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2組;去勢+0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2組;去勢+0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2組;去勢+0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2組;去勢+0.05 mg/kg E2組;去勢+0.05 mg/kg E2 +0.005 mg/kg DHT組;去勢+0.05 mg/kg E2 +0.015 mg/kg DHT組;去勢+0.05 mg/kg E2 +0.05 mg/kg DHT組;去勢+0.05 mg/kg E2 +0.15 mg/kg DHT組;去勢+0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT組,共十五組。DHT及 E2使用玉米油溶解配制成為不同濃度,根據(jù)大鼠不同分組采用每日皮下注射連續(xù)1個月,手術(shù)獲取大鼠前列腺標(biāo)本。(2)通過HE染色、Masson染色顯微鏡下進行前列腺組織病理炎癥分級(參考國際前列腺炎組織學(xué)診斷與分度標(biāo)準(zhǔn))及纖維化程度的觀察。

2 結(jié) 果

2.1 不同比例雌雄激素對去勢大鼠前列腺組織學(xué)炎癥的影響通過HE染色探究雌雄激素對去勢大鼠前列腺炎癥浸潤的影響,結(jié)果顯示未去勢對照組和未去勢對照+溶藥媒介組前列腺組織結(jié)構(gòu)完整、腺腔和間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤,無充血和水腫;與未去勢對照+溶藥媒介相比,去勢對照+溶藥媒介組前列腺腺腔和間質(zhì)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(P<0.001);與去勢對照+溶藥媒介組相比,去勢大鼠添加0.15 mg/kg DHT組前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤減少(P<0.001);與0.15 mg/kg DHT組相比,同時添加雌激素E2組(0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2)前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤進一步增多;與去勢大鼠添加0.05 mg/kg E2相比,同時添加DHT組(0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.05 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.15 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT)前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤減少。見表1,圖1。

圖1 HE染色檢測各組大鼠前列腺組織炎癥浸潤

表1 各組大鼠前列腺組織學(xué)炎癥分級

2.2 不同比例雌雄激素對去勢大鼠前列腺纖維化的影響通過Masson染色探究雌雄激素對去勢大鼠前列腺纖維化的影響,結(jié)果顯示未去勢對照組和未去勢對照+溶藥媒介組前列腺組織無明顯纖維化;與未去勢對照+溶藥媒介相比,去勢對照+溶藥媒介組前列腺膠原纖維化程度高(P<0.001);與去勢對照+溶藥媒介組相比,去勢大鼠添加0.15 mg/kg DHT組前列腺膠原纖維化含量下降3.08倍(P<0.001);與0.15 mg/kg DHT組相比,進一步添加雌激素E2組(0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2)前列腺膠原纖維化程度增加;與去勢大鼠添加0.05 mg/kg E2相比,進一步添加DHT組(0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.05 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.15 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT)前列腺膠原纖維化減少。見圖2,表2。

圖2 Masson染色檢測各組大鼠前列腺組織纖維化

表2 各組大鼠前列腺組織膠原含量半定量結(jié)果

3 討 論

大量證據(jù)表明前列腺纖維化與前列腺炎癥反應(yīng)二者關(guān)系密切[5],而前列腺纖維化是老年男性患者下尿路癥狀的重要病因[6]。雄激素是促進前列腺正常生長以及病理性增生[7]。而雌激素是促進組織對DHT的吸收轉(zhuǎn)化及雄激素與雄激素受體的結(jié)合[8-9]。前列腺細(xì)胞能分泌多種炎癥因子,同時也是炎性因子作用的主要靶點[10-11]。在去勢大鼠體內(nèi)添加外源性的雌雄激素模擬人體內(nèi)雌雄激素的失衡,通過HE染色,發(fā)現(xiàn)去勢大鼠添加0.15 mg/kg DHT抑制了前列腺腺腔和間質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤,而在此基礎(chǔ)上進一步添加E2誘導(dǎo)前列腺炎的發(fā)生。相反地,在去勢大鼠添加0.05 mg/kg E2的基礎(chǔ)上,進一步添加DHT抑制了前列腺炎的進展。此結(jié)果與研究一致[12-14],即在正常或高于正常水平的DHT具有抑制前列腺炎癥的作用。

前列腺組織的炎癥發(fā)展到一定程度后前列腺細(xì)胞、炎癥細(xì)胞以及促炎因子之間相互促進,炎癥反應(yīng)循環(huán)放大,誘發(fā)前列腺細(xì)胞合成及分泌功能紊亂,導(dǎo)致前列腺細(xì)胞外成分重構(gòu)及纖維化的發(fā)生,成纖維細(xì)胞和成肌纖維細(xì)胞聚集并活化、膠原沉積、細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)以及組織的彈性減弱為特征[6,15]。雌激素對纖維化形成和發(fā)展起到促進作用[16]。在接受內(nèi)分泌治療的前列腺癌標(biāo)本中可發(fā)現(xiàn)在非腫瘤區(qū)域的前列腺發(fā)生了纖維化[17]。通過添加不同比例的DHT和E2,Masson染色結(jié)果表明,與假手術(shù)組相比,去勢大鼠組的前列腺膠原含量更高,而添加0.15 mg/kg DHT后,前列腺膠原含量明顯下降。

中青年血漿雌/雄激素濃度為1∶150,老年人為1∶120～1∶80,老年人前列腺內(nèi)雌/雄激素濃度高達1∶8。男性隨著年齡增長,雌雄激素比例失調(diào),從而誘導(dǎo)前列腺炎癥,進而導(dǎo)致纖維化。本研究雖以大鼠為研究對象,探討不同比例濃度雌雄激素作用下去勢大鼠前列腺炎癥、纖維化程度,其結(jié)果對于臨床前列腺炎、前列腺纖維化的治療提供了思路,能否通過改變老年男性雌雄激素比例,以改變、延緩前列腺炎癥、纖維化病程,進而緩解LUTS癥狀,尚需進一步研究。

利益沖突說明/Conflict of Intetests

所有作者聲明不存在利益沖突。

倫理批準(zhǔn)及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通過貴州省人民醫(yī)院倫理委員會(科學(xué)倫理委員會)批準(zhǔn)。