蛋雞禽腺病毒與大腸桿菌混合感染的診治

趙偉偉

山東省寧津縣畜牧業(yè)發(fā)展中心，山東寧津 253400

禽腺病毒病是1種危害蛋雞養(yǎng)殖業(yè)的傳染性疾病，該病原感染可以引發(fā)3種臨床病癥，分別是雞包涵體肝炎、產(chǎn)蛋下降綜合征和火雞出血性腸炎。禽腺病毒對(duì)雞群造成的危害非常嚴(yán)重，一旦發(fā)生腺病毒感染，就容易繼發(fā)大腸桿菌，這樣就會(huì)導(dǎo)致2種病共同危害，使得蛋雞出現(xiàn)發(fā)病急、病程長和高死亡率等特點(diǎn)，甚至?xí)?dǎo)致雞群喪失產(chǎn)蛋性能并出現(xiàn)大量死亡，給養(yǎng)殖場帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病原簡介

禽腺病毒（avian adenovirus）是一種屬于腺病毒科（adenoviridae）的DNA 病毒，不具有囊膜、二十面體對(duì)稱的病毒顆粒。病毒粒子大小75～90 nm，其中核心大小55～65 nm[1]，禽腺病毒有12個(gè)血清型，分3個(gè)群，其中Ⅰ群和Ⅲ群主要感染雞，流行的主要病原類型包括禽腺病毒1型（FAdV-1）和禽腺病毒4型（FAdV-4），其中FAdV-4 是目前最為常見和致病性最高的類型。

禽腺病毒的病毒顆粒在環(huán)境中相對(duì)穩(wěn)定，病毒顆粒的外殼由蛋白質(zhì)構(gòu)成，能夠保護(hù)內(nèi)部的DNA避免外界環(huán)境的影響，在干燥的環(huán)境中能夠維持一定的活性。禽腺病毒顆粒在低溫和低濕環(huán)境下能夠存活較長時(shí)間，尤其是在冷凍條件下，其對(duì)高溫也有一定的抵抗能力，可以在60 ℃下存活1 h 左右，但隨著溫度的升高和持續(xù)時(shí)間的延長，病毒的活性會(huì)逐漸降低。禽腺病毒在酸性條件下（pH 3～5）仍能保持一定的活性，而在堿性條件下（pH 9～11）則會(huì)迅速失活；該病毒對(duì)一些常用的消毒劑具有一定的抵抗力，對(duì)含氯消毒劑（如次氯酸鈉）和醇類消毒劑（如乙醇）的抵抗力較強(qiáng)，需要使用更高濃度或更長的消毒時(shí)間才能有效殺滅。

雞大腸桿菌存在多個(gè)菌株，其中一部分是致病性菌株，可以引起蛋雞大腸桿菌病。致病性菌株通常具有特定的毒力因子，如腸毒素、腸毒性質(zhì)粒和附著因子等，這些因子使其具有致病性。一些蛋雞大腸桿菌菌株已經(jīng)產(chǎn)生多重耐藥性，對(duì)多種抗生素均耐藥。蛋雞大腸桿菌適應(yīng)于溫暖濕潤的環(huán)境，適宜的生長溫度為20～45 ℃，最適生長溫度為37 ℃。

2 流行病學(xué)

禽腺病毒的傳染源主要是感染禽類動(dòng)物，包括家禽（如雞、鴨、鵝等）和野禽（如鴿子、鶴等）。感染禽類動(dòng)物的禽腺病毒可以通過糞便、呼吸道分泌物、眼淚、唾液等排泄物傳播給其他禽類動(dòng)物。禽腺病毒的傳播途徑主要有直接接觸傳播和間接接觸傳播2種方式。禽腺病毒通過禽類動(dòng)物之間的直接接觸（如接觸感染禽類動(dòng)物的分泌物、排泄物等）傳播給其他禽類動(dòng)物，禽腺病毒還可通過污染的環(huán)境、飲水、飼料、工具等間接接觸傳播給其他禽類動(dòng)物。此外，該病毒還可以進(jìn)行垂直傳播，病雞產(chǎn)出的蛋內(nèi)含有病毒，孵出的雛雞也帶有病毒[2]。腺病毒感染的易感動(dòng)物主要是禽類，尤其是家禽。禽腺病毒的發(fā)病季節(jié)主要與氣候條件和禽類動(dòng)物的養(yǎng)殖管理有關(guān)，在溫暖濕潤的季節(jié)更為常見，如春季和秋季。此外，禽腺病毒的發(fā)病季節(jié)還與禽類動(dòng)物的養(yǎng)殖密度、環(huán)境衛(wèi)生狀況、養(yǎng)殖管理措施等因素有關(guān)。

大腸桿菌病的傳染源主要是已經(jīng)感染雞，它們的糞便、腸道內(nèi)容物和呼吸道分泌物中均含有大量的大腸桿菌。部分蛋雞可能是隱性感染，不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，但仍然可以排出病原，成為傳播病原體的潛在傳染源。蛋雞大腸桿菌病主要通過糞-口傳播途徑傳播，病原菌還可以通過空氣中的飛沫或氣溶膠傳播，當(dāng)感染的蛋雞咳嗽、打噴嚏或呼吸時(shí)，病原菌可以通過空氣傳播給其他蛋雞。蛋雞之間共用飲水器、飼料器、籠子等，也可能傳播病原，青年雞更容易受到感染，免疫功能低下的蛋雞更容易受到感染。蛋雞大腸桿菌病在夏季和秋季的發(fā)病率較高，這與氣溫升高和環(huán)境濕度增加有關(guān)，這些條件有利于病原菌的生長和繁殖。

3 臨床癥狀

混合感染禽腺病毒和大腸桿菌的病雞表現(xiàn)出食欲不振、消化不良，甚至完全停食，雞冠和肉髯蒼白，被羽蓬亂，還可見有呼吸困難、喘息、咳嗽、打噴嚏等癥狀，發(fā)病嚴(yán)重的病雞還可能出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如運(yùn)動(dòng)障礙、肌肉顫動(dòng)、抽搐、癱瘓等。嚴(yán)重感染時(shí)可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥和神經(jīng)損傷等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。有的病雞還可能出現(xiàn)生殖障礙、卵巢炎、睪丸炎等癥狀，嚴(yán)重感染時(shí)可導(dǎo)致生殖系統(tǒng)疾病和生殖功能受損。病雞還會(huì)出現(xiàn)腹瀉，表現(xiàn)為糞便稀薄、呈現(xiàn)黃綠色水樣，甚至帶有黏液和血液，產(chǎn)蛋期的雞群還表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率下降的情況。

4 病理變化

剖檢后，病雞表現(xiàn)為嚴(yán)重的心包積液，液體呈現(xiàn)出淡黃色，有時(shí)呈現(xiàn)膠凍狀，有的病雞可見心臟腫大嚴(yán)重，心肌變得松軟，有時(shí)可見心包膜渾濁。病雞腸道黏膜充血、水腫、糜爛和潰瘍，糜爛和潰瘍可能出現(xiàn)在小腸或大腸的不同部位，嚴(yán)重時(shí)可見有腸道出血，也可能同時(shí)出現(xiàn)。肝臟充血、水腫、黃染，在肝臟表面有大量斑點(diǎn)狀的出血。在繼發(fā)大腸桿菌病后，肝臟表面常被纖維素性膜所覆蓋，還表現(xiàn)出氣囊渾濁；鼻腔和氣管黏膜充血、水腫、糜爛和呼吸道分泌物增多，肺臟出現(xiàn)不同程度的水腫和淤血，脾臟可見顏色變深，失去彈性；卵巢和輸卵管部位也會(huì)有炎癥和大量的分泌物。

5 診斷方法

這2 種病混合感染的診斷較為困難，由于臨床癥狀和病理變化較為復(fù)雜，僅通過對(duì)癥狀和病變的觀察難以確診，還需要通過實(shí)驗(yàn)室技術(shù)輔助診斷。

通過血清學(xué)檢測方法中的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）或血凝試驗(yàn)可以檢測蛋雞血清中的腺病毒特異性抗體，以確定是否感染腺病毒。ELISA 的結(jié)果通常通過比較待測樣品的信號(hào)強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛悠返男盘?hào)強(qiáng)度來判定。標(biāo)準(zhǔn)曲線法是通過制備一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，測量其信號(hào)強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，將待測樣品的信號(hào)強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而確定待測樣品中目標(biāo)分子的濃度。對(duì)照樣品法是設(shè)置正對(duì)照樣品和負(fù)對(duì)照樣品，正對(duì)照樣品中含有目標(biāo)分子，負(fù)對(duì)照樣品中不含目標(biāo)分子。測量待測樣品、正對(duì)照樣品和負(fù)對(duì)照樣品的信號(hào)強(qiáng)度，通過對(duì)照樣品的信號(hào)強(qiáng)度來判斷待測樣品中是否存在目標(biāo)分子。

還可以對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測，可以檢測到腺病毒的抗原，進(jìn)一步確認(rèn)感染的腺病毒的類型和分布情況。試驗(yàn)是通過收集組織樣本，進(jìn)行固定、切片和染色等處理后將特異性的一抗體加入樣品中，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合。加入酶標(biāo)記二抗或熒光標(biāo)記二抗，與一抗體結(jié)合。根據(jù)使用的標(biāo)記物（如酶、熒光物質(zhì)等），使用適當(dāng)?shù)臋z測方法進(jìn)行信號(hào)的可視化或測量。其結(jié)果判定通常可以根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)度和位置判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和亞細(xì)胞定位或組織分布情況，并做好陰陽性對(duì)照，輔助判斷。也可利用電子顯微鏡觀察蛋雞組織或糞便中的腺病毒顆粒的形態(tài)特征，禽腺病毒顆粒為非包膜的多面體病毒顆粒，直徑70～100 nm。它們呈現(xiàn)為規(guī)則的六角形或二十面體形狀，禽腺病毒顆粒表面通常具有6 個(gè)突起的二十面體結(jié)構(gòu)。

聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是1 種敏感且特異的檢測方法，可通過檢測蛋雞糞便、組織或血清中的腺病毒核酸來確認(rèn)感染情況。常用的PCR 方法包括傳統(tǒng)PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR 和逆轉(zhuǎn)錄PCR 等，應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳或者通用對(duì)熒光信號(hào)的觀察，可以確定有無病原特異性基因序列片段（圖1），對(duì)PCR 擴(kuò)增的腺病毒核酸進(jìn)行測序，可以進(jìn)一步研究其遺傳變異、毒力因子和抗原性等特征。

圖1 禽腺病毒PCR擴(kuò)增電泳鑒定圖

大腸桿菌的檢測是采集發(fā)病蛋雞的腸道內(nèi)容物或挑取病死雞的肝臟和脾臟等病變組織接種于營養(yǎng)瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)過37 ℃培養(yǎng)24 h，可見在普通瓊脂上有邊緣整齊，光滑的灰白色菌落，而在麥康凱瓊脂上為紅色菌落（圖2），經(jīng)革蘭氏染色呈陰性桿菌（圖3）。也可以通過血清學(xué)檢測方法，如凝集試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測蛋雞血清中的大腸桿菌特異性抗體，以確定感染的大腸桿菌的類型和感染程度。有條件的也可以通過PCR檢測來更準(zhǔn)確地判斷病雞是否感染致病性大腸桿菌。

圖2 大腸桿菌麥康凱培養(yǎng)

圖3 大腸桿菌染色鏡檢

6 防控措施

6.1 預(yù)防措施

1）生物安全管理。建立合理的隔離和分區(qū)制度，將不同批次、不同健康狀況的蛋雞進(jìn)行隔離，防止疾病的傳播和擴(kuò)散，加強(qiáng)人員的衛(wèi)生和健康管理，包括定期體檢、穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備、嚴(yán)格遵守衛(wèi)生操作規(guī)程等，以避免人員攜帶病原對(duì)蛋雞造成感染的風(fēng)險(xiǎn)。定期清潔和消毒雞舍、設(shè)備和工具，確保良好的生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)施衛(wèi)生。

2）環(huán)境控制。維持適宜的雞舍溫度和濕度，提供良好的生長環(huán)境，減少蛋雞的感染風(fēng)險(xiǎn)。保持良好的通風(fēng)系統(tǒng)，確保新鮮空氣的流通，減少空氣中病原的濃度，確保飲水系統(tǒng)的清潔和無污染。

3）疫苗接種。根據(jù)當(dāng)?shù)氐牟∏楹土餍兄辏x擇合適的禽腺病毒疫苗和大腸桿菌疫苗進(jìn)行接種，當(dāng)前主要是新城疫-禽流感-禽腺病毒病三聯(lián)疫苗以及各種大腸桿菌的蜂膠滅活苗，以提高蛋雞的免疫力，減少感染風(fēng)險(xiǎn)。

4）健康監(jiān)測。定期對(duì)蛋雞進(jìn)行健康監(jiān)測，包括糞便樣本、血清樣本等的采集和實(shí)驗(yàn)室檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和診斷感染情況，定期對(duì)雞舍環(huán)境、飼料和水源進(jìn)行病原菌監(jiān)測，了解病原的分布情況，采取相應(yīng)的防控措施。

6.2 治療措施

1）禽腺病毒病的治療。禽腺病毒病是由病毒感染所引起，沒有相應(yīng)的藥物進(jìn)行治療，一旦發(fā)現(xiàn)有雞發(fā)病，應(yīng)立即將發(fā)病雞隔離并進(jìn)行徹底的消毒，防止病原體的傳播和擴(kuò)散，給予高營養(yǎng)、易消化的飼料，適當(dāng)?shù)木S生素和微量元素，維持蛋雞體內(nèi)的水電解質(zhì)平衡，減輕病情，提高蛋雞的抵抗力和康復(fù)能力。根據(jù)臨床癥狀的嚴(yán)重程度，選擇合適的抗炎藥物進(jìn)行治療，減輕炎癥反應(yīng)。

2）大腸桿菌病的治療。使用抗生素可以治療大腸桿菌病，在用藥前需要進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果選擇合適的抗生素，并按照規(guī)定的劑量和療程使用，以減少抗生素濫用和耐藥菌株的產(chǎn)生。在臨床上常用的藥物有卡那霉素、阿米卡星、氟苯尼考和恩諾沙星等。根據(jù)蛋雞的體重和病情，確定抗生素的給藥途徑（口服、注射等）和劑量，保證藥物的有效濃度；根據(jù)病情的嚴(yán)重程度，確定抗生素的療程和間隔，避免過度使用和抗藥性的產(chǎn)生；根據(jù)需要，可以考慮聯(lián)合使用不同類別的抗生素，以增強(qiáng)治療效果，定期觀察蛋雞的臨床癥狀和體征變化，評(píng)估抗生素治療的療效，對(duì)于需要長期使用抗生素的蛋雞，可以進(jìn)行藥物濃度監(jiān)測，確保抗生素在治療期間的有效濃度。還可以應(yīng)用中草藥治療大腸桿菌病，用0.2 kg 穿心蓮、黃柏和大青葉，0.15 kg龍膽草、大黃和黃連等混合后加入8 kg水[3]，煎汁供雞群飲用，效果良好。