匝迪-5味丸改善心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制預(yù)測(cè)及驗(yàn)證Δ

烏日嘎，威力斯，烏日拉嘎，蘇斯，阿茹罕，佟立軍，布圖雅，呼日樂(lè)巴根 （內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，呼和浩特 010110）

心血管疾病是導(dǎo)致全球死亡和疾病負(fù)擔(dān)的最主要原因之一。我國(guó)心血管病患病率仍處于持續(xù)上升階段，其中缺血性心臟病是導(dǎo)致死亡的主要原因之一[1]。臨床上急性心肌缺血的首選治療策略為及時(shí)采取溶栓或介入等再灌注手段快速恢復(fù)冠脈血流，但再灌注也容易造成心肌的二次損傷，即心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI）。

蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心肌缺血引起的心肌梗死、心絞痛等冠心病均屬于蒙醫(yī)學(xué)“心刺痛”范疇，其蒙醫(yī)病名為“朱日很·哈特勒嘎”，通過(guò)鎮(zhèn)心“赫依”、改善血液“赫依與其蘇”運(yùn)行，可使病情發(fā)展得到控制[2]。匝迪-5味丸是蒙醫(yī)臨床常用的經(jīng)典復(fù)方，主治心律失常、心肌梗死、心絞痛等病癥，療效顯著[3]。該方出自蒙醫(yī)經(jīng)典著作《高氏梅林方》，由肉豆蔻50 g，木香、土木香各40 g，廣棗25 g，蓽茇5 g配伍而成，具有鎮(zhèn)心、養(yǎng)心、安神的功效，主治心煩失眠、心神不安、心悸、胸悶氣喘等病癥[4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，匝迪-5味丸可降低MIRI模型大鼠心肌肌鈣蛋白T（cardiac troponin T，CTn-T）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）等心肌酶的含量，縮小心肌損傷面積[5-6]，但其改善MIRI的作用機(jī)制尚未明確。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選匝迪-5味丸的活性成分及作用靶點(diǎn)，并預(yù)測(cè)其改善MIRI的潛在作用靶點(diǎn)及通路，又通過(guò)建立MIRI大鼠模型驗(yàn)證匝迪-5味丸改善MIRI的作用機(jī)制，旨在為闡明該方的藥效機(jī)制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Synergy H4型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）、RM2016型病理切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）、XSP-C204型顯微鏡（重慶重光實(shí)業(yè)有限公司）、D1008E型離心機(jī)（武漢賽維爾生物科技有限公司）等。

1.2 藥品與試劑

匝迪-5味丸（內(nèi)藥制字M13010062，規(guī)格為60丸/袋）由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院國(guó)家蒙藥制劑中心提供；復(fù)方丹參滴丸（國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950111，規(guī)格為每丸重27 mg）購(gòu)自天力士制藥集團(tuán)股份有限公司；CTn-T酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（貨號(hào)CSB-E16443r）購(gòu)自華美生物工程有限公司；CK、LDH、AST ELISA試劑盒（貨號(hào)分別為C060-b、C018、C072）均購(gòu)自長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司；磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）抗體（貨號(hào)bsm-33219M）購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗、蛋白激酶B（又稱Akt）抗體、HRP標(biāo)記的驢抗山羊二抗、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體、HRP標(biāo)記的山羊抗大鼠二抗、B淋巴細(xì)胞瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗體、HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗、TUNEL檢測(cè)試劑盒、DAB顯色劑、抗原修復(fù)液（貨號(hào)分別為GB23303、GB11689、GB23404、GB12002、GB23302、GB11690、GB23301、GDP1041、G2111、G1202）均購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司；Bcl-2抗體（貨號(hào)BF9103）購(gòu)自江蘇親科生物研究中心有限公司；胱天蛋白酶3（caspase-3）抗體（貨號(hào)66470-2-Ig）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.3 動(dòng)物

8周齡SPF級(jí)SD雄性大鼠72只，體重（200±20）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（北京）2019-0010。所有大鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對(duì)濕度（50±5）%環(huán)境下，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)，倫理批件編號(hào)為YKD202001055。

2 方法

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)（TCMSP，http：//tcmspw.com/）和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/），并查閱文獻(xiàn)，獲取匝迪-5味丸的活性成分。以“肉豆蔻”“廣棗”“蓽茇”“木香”“土木香”為關(guān)鍵詞，在TCMSP中設(shè)置口服生物利用度≥30%、類藥性指數(shù)≥0.18進(jìn)行檢索，在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)置“藥物-靶點(diǎn)參考值”中靶蛋白提取值≥0.90、P＜0.05進(jìn)行檢索。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org/）對(duì)所得活性成分進(jìn)行檢索，找出匝迪-5味丸各活性成分的作用靶點(diǎn)。以“myocardial is-chemia”為關(guān)鍵詞，從GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//genecards.org/）、Dis-GeNET數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.disgenet.org/）和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//go.drugbank.com/）中收集心肌缺血的相關(guān)靶基因。利用Venn Diagram軟件對(duì)匝迪-5味丸活性成分的作用靶點(diǎn)和心肌缺血相關(guān)靶基因取交集，獲得共同靶點(diǎn)。將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），選擇“multiple proteins”，將物種設(shè)置為“Homo sapiens”，置信度設(shè)置為0.7，進(jìn)行蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與數(shù)據(jù)分析。將分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖，分析節(jié)點(diǎn)（成分或靶點(diǎn)蛋白）和邊（成分、靶點(diǎn)蛋白和疾病之間的關(guān)系），突出關(guān)鍵靶點(diǎn)及相關(guān)蛋白。將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape分析平臺(tái)（https：//www.metascape.org），對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（gene onto-logy，GO）和京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（Kyoto encyclope-dia of genes and genomes，KEGG）信號(hào)通路富集分析。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

2.2.1 分組與給藥

將72只SD大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、丹參組（陽(yáng)性對(duì)照組）和匝迪-5味丸高、中、低劑量組，每組12只。模型組和假手術(shù)組大鼠灌胃等體積蒸餾水，丹參組大鼠給予復(fù)方丹參滴丸80 mg/（kg·d）灌胃，匝迪-5味丸高、中、低劑量組大鼠分別給予匝迪-5味丸藥粉1.6、0.8、0.4 g/（kg·d）灌胃，給藥劑量按前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。各組大鼠均按10 mL/kg灌胃，每天1次，連續(xù)14 d。

2.2.2 模型建立

末次灌胃后2 h，將各組大鼠麻醉后取仰臥位固定，監(jiān)測(cè)記錄心電圖；剖開(kāi)左側(cè)L3～L4肋間，暴露心臟，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，使其缺血30 min，再灌注2 h（其中假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎），建模同時(shí)記錄其心電圖。當(dāng)大鼠心肌或心尖蒼白或發(fā)紺，心電圖示ST段升高0.1 mV或QRS波提高增粗，則提示缺血建模成功；當(dāng)大鼠心肌缺血部位充血變紅或ST段緩慢下降約50%，則提示再灌注建模成功[7]。

2.2.3 采樣

大鼠建模完成后，開(kāi)腹，于腹主動(dòng)脈采血，待血凝后，于4 ℃下以3 500 r/min離心15 min，取上清液保存待測(cè)。采血結(jié)束后，摘取各組大鼠結(jié)扎部位以下的心肌組織，每組取6只大鼠的心肌組織用磷酸鹽緩沖液洗凈后待測(cè)，另6只大鼠的心肌組織用福爾馬林固定待測(cè)。

2.2.4 大鼠心肌酶含量檢測(cè)

取各組大鼠血清，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)血清中CK、LDH、AST、CTn-T的含量。

2.2.5 大鼠心肌組織形態(tài)觀察

將福爾馬林固定的心肌組織梯度脫水，常規(guī)石蠟包埋，切片（3.5 μm），用二甲苯脫蠟后進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，中性樹(shù)膠封片。應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件采集圖像，觀察大鼠心肌組織的形態(tài)變化。

2.2.6 大鼠心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)

取“2.2.5”項(xiàng)下的心肌組織切片，按照TUNEL檢測(cè)方法進(jìn)行染色，使用光學(xué)顯微鏡觀察，正常心肌細(xì)胞核呈藍(lán)色，凋亡陽(yáng)性心肌細(xì)胞核呈棕黃色。每張陽(yáng)性切片選取6個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞最多的視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，即細(xì)胞凋亡指數(shù)（cell apoptotic index，CAI）。

2.2.7 大鼠關(guān)鍵通路和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用Western blot法進(jìn)行檢測(cè)。取大鼠洗凈的心肌組織，裂解，勻漿，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，測(cè)定蛋白濃度，煮沸變性。取變性后的蛋白樣品放入凝膠板，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加入PI3K、Akt、Bcl-2、Bax、caspase-3、GAPDH一抗稀釋液（稀釋比例為1∶1 000、1∶1 000、1∶5 000、1∶5 000、1∶500、1∶1 000），4 ℃下孵育過(guò)夜；加入二抗稀釋液（稀釋比例為1∶3 000），室溫下孵育30 min；暗室曝光、顯影，將膠片進(jìn)行掃描存檔，用PhotoShop軟件整理去色，采用AlphaEase FC軟件測(cè)定灰度值。以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白（GAPDH）的灰度值比值表示目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.00軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)均以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果

3.1.1 匝迪-5味丸的活性成分與心肌缺血的共同靶點(diǎn)

共檢索獲得177個(gè)匝迪-5味丸的活性成分及220個(gè)作用靶點(diǎn)，501個(gè)心肌缺血相關(guān)靶基因。將匝迪-5味丸的活性成分作用靶點(diǎn)與心肌缺血相關(guān)靶基因進(jìn)行交叉，共獲得51個(gè)共同靶點(diǎn)。所構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)（圖1）中，有51個(gè)節(jié)點(diǎn)和718條邊，匝迪-5味丸改善MIRI主要以AKT1為核心靶點(diǎn)，協(xié)同IL6、PTGS2、EGFR、IL1B、PPARA、PPARG、STAT3、MTOR等多個(gè)靶點(diǎn)共同發(fā)揮作用。

3.1.2 關(guān)鍵通路及其相互作用靶點(diǎn)

GO富集分析結(jié)果（圖2）顯示，以P≤0.05為篩選條件，共獲得48個(gè)條目，其中生物過(guò)程條目20個(gè)，主要涉及激素調(diào)節(jié)、內(nèi)毒素調(diào)節(jié)、循環(huán)系統(tǒng)、脂質(zhì)定位調(diào)節(jié)、蛋白磷酸化等；細(xì)胞組分條目11個(gè)，主要涉及PI3K復(fù)合酶、細(xì)胞膜、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合酶等；分子功能條目17個(gè)，主要涉及核受體激活、脂質(zhì)合成、亞鐵血紅素合成、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)等。KEGG通路富集分析共得到20條通路（圖3），與心肌缺血有關(guān)的主要涉及PI3K-Akt、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、缺氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）等信號(hào)通路。通過(guò)匝迪-5味丸活性成分與PI3K-Akt信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，君藥肉豆蔻的MF10、MF5、MF9和使藥蓽茇的PL1、PL2等活性成分作用顯著，因此，筆者推測(cè)匝迪-5味丸的作用機(jī)制可能與PI3K-Akt信號(hào)通路密切相關(guān)（圖4）。

圖2 匝迪-5味丸改善MIRI的GO富集分析結(jié)果

圖3 匝迪-5味丸改善MIRI的KEGG通路富集分析結(jié)果

圖4 匝迪-5味丸的MIRI改善作用與PI3K-Akt信號(hào)通路的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

3.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

3.2.1 大鼠心電圖變化

與大鼠麻醉狀態(tài)比較，大鼠心肌缺血時(shí)ST段顯著升高（ST段抬高0.1 mV以上）；與心肌缺血時(shí)比較，大鼠心肌缺血再灌注時(shí)ST段下降約50%，表明MIRI模型復(fù)制成功。

3.2.2 大鼠血清中心肌酶含量變化

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中CK、CTn-T、LDH、AST含量均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，丹參組和匝迪-5味丸高劑量組大鼠血清中CK、CTn-T、AST、LDH含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；匝迪-5味丸低、中劑量組大鼠血清中CTn-T和LDH含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），CK和AST含量變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 匝迪-5味丸對(duì)MIRI模型大鼠血清中心肌酶CK、CTn-T、LDH、AST的影響（±s，n＝12）

3.2.3 大鼠心肌組織形態(tài)變化

假手術(shù)組大鼠心肌組織染色均勻，形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，心肌纖維排列整齊，細(xì)胞分界清晰，紋理清晰，間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常，局部可見(jiàn)少量肥大細(xì)胞浸潤(rùn)；與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂，排列疏松，細(xì)胞分界不清，間質(zhì)可見(jiàn)水腫，心肌纖維斷裂、溶解，伴大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；與模型組比較，丹參組和匝迪-5味丸各劑量組大鼠心肌組織病理形態(tài)均有不同程度改善，細(xì)胞分界相對(duì)清晰，心肌纖維排列相對(duì)規(guī)則，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)相對(duì)減少。結(jié)果見(jiàn)圖6。

3.2.4 大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，丹參組和匝迪-5味丸各劑量組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖7和圖8。

圖7 匝迪-5味丸對(duì)MIRI模型大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響（TUNEL染色，×200）

圖8 匝迪-5味丸對(duì)MIRI模型大鼠心肌細(xì)胞凋亡率的影響（n＝6）

3.2.5 大鼠心肌組織中關(guān)鍵通路和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低，Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，丹參組和匝迪-5味丸各劑量組大鼠心肌組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著升高，Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；丹參組和匝迪-5味丸高、中劑量組PI3K、Akt蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖9和圖10。

圖9 匝迪-5味丸對(duì)MIRI模型大鼠心肌組織中關(guān)鍵通路蛋白和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)影響的電泳圖

圖10 匝迪-5味丸對(duì)MIRI模型大鼠心肌組織中關(guān)鍵通路蛋白和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（n＝6）

4 討論

心肌缺血的病理過(guò)程復(fù)雜，具體病理機(jī)制尚未明確。但已有研究表明，抑制心肌細(xì)胞凋亡是治療MIRI的重要措施[8]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，匝迪-5味丸能有效縮小MIRI模型大鼠的心肌梗死面積[6]，但具體作用機(jī)制尚不明確。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選了匝迪-5味丸的活性成分及作用靶點(diǎn)，以及心肌缺血的相關(guān)靶基因，預(yù)測(cè)了匝迪-5味丸改善MIRI的潛在作用靶點(diǎn)和通路。結(jié)果，共獲得匝迪-5味丸的活性成分177個(gè)，作用靶點(diǎn)220個(gè)，參與改善心肌缺血的靶點(diǎn)51個(gè)，其中核心靶點(diǎn)為AKT1，涉及PI3K-Akt、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、HIF-1等多個(gè)通路。結(jié)合本課題組前期研究，推測(cè)匝迪-5味丸改善MIRI可能與PI3K-Akt通路有關(guān)。

本研究建立了MIRI大鼠模型，在蛋白水平上進(jìn)一步探討了匝迪-5味丸的心肌保護(hù)作用機(jī)制。在建模過(guò)程中，大鼠心肌缺血時(shí)，心電圖ST段顯著抬高（ST段抬高0.1 mV以上），再灌注時(shí)ST段下降約50%，表明MIRI模型復(fù)制成功。已有研究證實(shí)，血清中LDH、CK、AST、CTn-T等心肌酶含量異常升高程度可反映心肌受損程度[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸和匝迪-5味丸可不同程度地降低模型大鼠血清中CK、CTn-T、LDH、AST含量，同時(shí)改善心肌組織病理形態(tài)。

PI3K-Akt是再灌注損傷補(bǔ)救激酶信號(hào)通路。研究表明，PI3K-Akt信號(hào)通路與心血管疾病關(guān)系密切，在MIRI的復(fù)雜病理過(guò)程中處于核心地位，可減輕心肌細(xì)胞凋亡損傷，發(fā)揮心肌保護(hù)作用[10]。Akt是PI3K-Akt信號(hào)通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的關(guān)鍵分子，具有3種同源性亞型（Akt1、Akt2、Akt3），其中Akt1高表達(dá)于心、腦、肺等組織，參與細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸和高、中劑量匝迪-5味丸可顯著升高大鼠心肌組織中PI3K、Akt蛋白表達(dá)水平，可見(jiàn)匝迪-5味丸改善MIRI的作用機(jī)制可能與PI3K-Akt信號(hào)通路有關(guān)。

MIRI病理機(jī)制復(fù)雜，涉及通路、途徑眾多，而凋亡是其中最為重要的病理機(jī)制之一。本研究TUNEL檢測(cè)結(jié)果顯示，MIRI會(huì)引起心肌細(xì)胞凋亡，而匝迪-5味丸可顯著抑制大鼠心肌細(xì)胞凋亡率。在分子水平上，抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax以相對(duì)穩(wěn)定的比例存在于細(xì)胞中，二者的表達(dá)失衡是造成細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素[12]。在內(nèi)源性凋亡途徑中，Bax作用于線粒體外膜可促進(jìn)細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中并活化caspase-3，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；在外源性凋亡途徑中，跨膜受體與配體結(jié)合形成死亡信號(hào)復(fù)合物，可激活caspase-3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，因此caspase-3是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)控因子[13]。而B(niǎo)cl-2可減少線粒體細(xì)胞色素C釋放，從而阻止細(xì)胞凋亡[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，匝迪-5味丸可顯著降低大鼠心肌組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平，顯著升高Bcl-2蛋白表達(dá)水平，表明匝迪-5味丸可能通過(guò)PI3K-Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白，保護(hù)心肌損傷。

綜上所述，匝迪-5味丸可能通過(guò)激活PI3K-Akt信號(hào)通路抑制細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮改善MIRI的作用。然而，MIRI機(jī)制復(fù)雜，且匝迪-5味丸具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用特點(diǎn)，作用機(jī)制也不只涉及PI3K-Akt信號(hào)通路，其他機(jī)制有待今后進(jìn)一步探究。