體外炎性誘導星形膠質細胞激活及功能分析

程瑩瑩 ， 武建軍， 蔡海燕， 焦旭文， 馬江波， 丁銀秀*

1.寧夏醫科大學基礎醫學院人體解剖學系，寧夏 銀川 750006； 2.西安醫學院第二附屬醫院神經外科，陜西 西安 710038； 3.寧夏回族自治區人民醫院神經內科，寧夏 銀川 751006

神經炎癥作為一種基本的細胞內進展，是腦內穩態喪失的一種預警信號[1]。研究報道，機體受損時，反應性星形膠質細胞可能參與并加劇神經炎癥過程，通過其形態及功能變化、釋放大量炎性物質，如IL-1β、IL-6、NO 等，導致神經變性、死亡[2～4]。研究表明，占大腦內神經膠質細胞85%～95%的星形膠質細胞，在中樞神經系統的發育和功能中起著至關重要的作用，包括支撐營養、維持突觸內穩態、調節并保護神經元、參與血腦屏障等[5,6]，揭示星形膠質細胞幾乎在所有的中樞神經系統疾病中都發揮著重要的神經保護或神經毒性作用[7,8]，而其在炎癥反應中具體的變化及發揮的作用仍不清楚。因此，本實驗通過體外給予LPS、IFN-γ炎性刺激，模擬體內病理狀態下的大腦微環境，通過觀察星形膠質細胞的激活及功能變化，從而為神經炎癥發生發展的作用機制提供初步的實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

C57BL/6 野生型新生仔鼠（1～3 d），由寧夏醫科大學實驗動物中心提供，SPF 級，符合倫理學規定，遵循實驗動物管理條例。

1.2 主要試劑

DMEM 培養基、胎牛血清、0.25% 胰蛋白酶、HBSS 液 購 自Gibco 公 司；lipopolysaccharide (LPS)、interferon-γ (IFN-γ) 購 自Sigma 公 司；兔 抗iNOS、ARG1、β-actin、TNF-α、IL-10，鼠抗IL-6 均購自CST 公司，兔抗GFAP 購自DAKO 公司，TGF-β1 購自Sigma公司；Alexa Fluo594 熒光標記山羊抗兔IgG 和山羊抗鼠IgG、Alexa Fluo488 熒光標記山羊抗兔IgG 和山羊抗鼠IgG 抗體均購自Invitrogen 公司。……