郭棟偉，唐文富，陳峭

1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，南寧 530200；2 柳州市中醫(yī)醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科；3 柳州市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科

靜脈血栓栓塞（VTE）包括深靜脈血栓形成（DVT）和肺血栓栓塞癥（PTE），而DVT 和PTE 是VTE 在不同部位、不同階段的兩種臨床表現(xiàn)形式。DVT 好發(fā)于下肢，而下肢深靜脈血栓脫落是導(dǎo)致PTE的重要原因［1］。PTE是僅次于心肌梗死、腦卒中的第三大心血管疾病死亡原因［2］。目前，肺動(dòng)脈造影是診斷PTE的金標(biāo)準(zhǔn)，但其為有創(chuàng)性檢查，價(jià)格昂貴，且造影劑會(huì)加重腎臟負(fù)擔(dān)，對(duì)于腎功能不全患者會(huì)導(dǎo)致腎功能進(jìn)一步惡化。紅外熱成像技術(shù)是一種利用物體發(fā)射的紅外輻射能量來(lái)實(shí)現(xiàn)非接觸式測(cè)溫和成像的技術(shù)，其原理是基于物體的熱輻射特性，通過(guò)探測(cè)器將紅外輻射轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，再經(jīng)過(guò)信號(hào)處理和圖像顯示，得到物體的濕度分布圖像［4］。紅外熱成像技術(shù)已成為當(dāng)前診斷淺表腫瘤、血管疾病、皮膚病的有效手段，但其能否用于早期診斷VTE 尚不清楚。2021 年3 月—2023 年3 月，本研究探討了紅外熱成像技術(shù)在兔VTE 診斷中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性新西蘭大白兔60 只，7 周齡，體質(zhì)量2～3 kg，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0015。所有新西蘭大白兔于柳州市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心單籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22～26 ℃、濕度50%～70%。本研究嚴(yán)格遵守《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》，并經(jīng)柳州市中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批編號(hào)：2021JAN-KY-YN-001-01）。WN Ⅲ0305（通用型）數(shù)字式醫(yī)用紅外成熱像儀，購(gòu)自上海維恩偉業(yè)紅外醫(yī)療器械有限公司；EZU-HC1C 型彩色多普勒超聲診斷儀，購(gòu)自日本株式會(huì)社日立制作所。超氧化物歧化酶（SOD）、纖維蛋白原（FIB）、D-二聚體（D-Dimer）ELISA 試劑盒，購(gòu)自武漢基因美生物科技有限公司；IL-1β、IL-6、TNF-α、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒，購(gòu)自武漢貝茵萊生物科技有限公司；一氧化氮（NO）測(cè)試盒（一步法），購(gòu)自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.2 動(dòng)物分組與模型制備 所有新西蘭大白兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為T0 組、T1組、T2組、T3組，每組15只。參照楊佳敏等［5］方法制備血瘀證動(dòng)物模型：雙后肢備皮后，于右后肢皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素0.06 mg/kg，2 h 后將右后肢置入4 ℃冰水中浸泡5 min。按上述方法，T1組于實(shí)驗(yàn)第1 天造模1 次，T2 組于實(shí)驗(yàn)第1、2 天各造模1次，T3 組于實(shí)驗(yàn)第1、2、3 天各造模1 次。T0 組僅雙后肢備皮，不制備血瘀證動(dòng)物模型。

1.3 雙側(cè)后肢溫度檢測(cè) 用10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉大白兔后，固定于自制不銹鋼臺(tái)架上，保持室內(nèi)溫度（24 ± 1）℃、相對(duì)濕度55%～60%，關(guān)閉窗簾，避免陽(yáng)光直射。T0 組備皮后6 h，T1 組造模后6 h，T2 組第2 次造模后6 h，T3 組第3 次造模后6 h，將WN Ⅲ 0305（通用型）數(shù)字式醫(yī)用紅外成熱像儀的紅外攝像機(jī)鏡頭垂直對(duì)準(zhǔn)待測(cè)部位，距離0.5 m，開(kāi)機(jī)檢測(cè)。根據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物解剖圖譜》兔雙后肢的解剖結(jié)構(gòu)，以足趾關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)為界，將雙后肢分為上中下三個(gè)區(qū)域。每個(gè)區(qū)域拍3 張紅外熱成像圖，在每張圖同一區(qū)域隨機(jī)選取3個(gè)像素點(diǎn)測(cè)溫合成，像素點(diǎn)間距 17 μm、范圍 51 μm。以3 張圖3 個(gè)區(qū)域溫度的平均值作為該區(qū)域的溫度值。提取雙后肢的溫度集合，按鏡像求差法提取各區(qū)域的溫差集合，以3 個(gè)區(qū)域溫差均值作為雙后肢溫差值。

1.4 股靜脈內(nèi)徑和血流量檢測(cè) 各組紅外熱成像檢測(cè)結(jié)束后，隨機(jī)取6只，采用彩色多普勒超聲診斷儀測(cè)量右后肢股靜脈內(nèi)徑和血流量。參數(shù)設(shè)置：探頭頻率5～10 MHz，壁濾波50～100 Hz。

1.5 血清凝血功能與炎癥因子檢測(cè) 取各組腹主動(dòng)脈血10 mL，3 000 r/min 離心10 min、離心半徑9 cm，留取血漿或血清。采用ELISA 法檢測(cè)凝血功能FIB、AT-Ⅲ、D-Dimer 以及炎癥因子IL-1β、IL-6、SOD、TNF-α，采用NO 測(cè)試盒（一步法）檢測(cè)血清NO。所有操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.6 右后肢深靜脈和肺動(dòng)脈血栓形成觀察及其長(zhǎng)度測(cè)量 各組腹主動(dòng)脈取血后，空氣栓塞法處死，沿兔右后肢股靜脈走向縱行切開(kāi)皮膚約3 cm，暴露股靜脈及其主要分支，無(wú)創(chuàng)分離動(dòng)靜脈，觀察下肢靜脈血管有無(wú)血栓形成。若發(fā)現(xiàn)深靜脈血栓，則剖開(kāi)血管取出血栓，用尺子測(cè)量血栓長(zhǎng)度。剪開(kāi)胸腔，取出肺組織，無(wú)創(chuàng)分離肺動(dòng)脈，觀察肺動(dòng)脈有無(wú)血栓形成。若發(fā)現(xiàn)肺動(dòng)脈血栓，則剖開(kāi)血管取出血栓，用尺子測(cè)量血栓長(zhǎng)度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料服從正態(tài)分布且方差齊，以-x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；等級(jí)資料比較采用Kruskal-Wallis 秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組雙后肢溫差分布比較 各組雙后肢溫差分布見(jiàn)表1。經(jīng)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，四組雙后肢溫差分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；雙后肢溫差分布：T0 組＜T1 組＜T2 組、T3 組（P均＜0.05），而T2組與T3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組雙后肢溫差分布情況（只）

2.2 各組右后肢股靜脈內(nèi)徑和血流量比較 見(jiàn)表2。

表2 各組右后肢股靜脈內(nèi)徑和血流量比較（-x ± s）

2.3 各組凝血功能和炎癥因子水平比較 見(jiàn)表3、4。

表3 各組凝血功能比較（-x ± s）

表4 各組炎癥因子水平比較（ng/L，-x ± s）

2.4 各組右后肢深靜脈血栓和肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度分布比較 各組右后肢深靜脈血栓長(zhǎng)度和肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度分布見(jiàn)表5、6。經(jīng)Kruskal-Wallis H秩和檢驗(yàn)，四組右后肢深靜脈血栓長(zhǎng)度分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），右后肢深靜脈血栓長(zhǎng)度：T0組＜T1組＜T2組、T3組（P均＜0.05），而T2組與T3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；四組肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度：T0組、T1組＜T2組、T3組（P均＜0.05），T0組與T1組、T2組與T3組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

表5 各組右后肢深靜脈血栓長(zhǎng)度分布（只）

表6 各組肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度分布（只）

3 討論

VTE 包括DVT 和PTE，二者是VTE 在不同部位和不同階段的兩種臨床表現(xiàn)形式，也是住院患者死亡的常見(jiàn)原因［6］。DVT 是血液在深靜脈內(nèi)不正常凝結(jié)引起的靜脈回流障礙性疾病，常發(fā)生于下肢［7］。PTE是肺栓塞的常見(jiàn)類型，主要是由于深靜脈血栓脫落后阻塞肺動(dòng)脈或其分支引起肺循環(huán)障礙的臨床病理生理綜合征［8］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，DVT 患者中約50%發(fā)生PTE，而導(dǎo)致PTE 的栓子主要來(lái)源于下肢DVT 脫落［9］。當(dāng)前，VTE通常在CT、MRI下肺動(dòng)脈造影確診。

紅外熱成像技術(shù)是醫(yī)學(xué)技術(shù)、紅外攝像技術(shù)、計(jì)算機(jī)多媒體技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是利用光電技術(shù)將物體熱輻射產(chǎn)生的紅外線經(jīng)過(guò)信號(hào)處理，轉(zhuǎn)化為有形可見(jiàn)的圖像和圖形，從而反映出物體的溫度分布和形態(tài)特征［10］。CAPISTRANT 等［11］將顏面部紅外熱成像技術(shù)用于頸動(dòng)脈閉塞相關(guān)疾病的診斷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)顏面部紅外熱成像技術(shù)對(duì)頸動(dòng)脈狹窄的檢出率為36%，對(duì)頸動(dòng)脈閉塞的檢出率為75%。姚文芳等［12］采用紅外熱成像技術(shù)對(duì)缺血性腦血管病患者頭部溫度測(cè)量發(fā)現(xiàn)，其與腦血管造影或磁共振血管成像的診斷結(jié)果基本一致。紅外熱成像技術(shù)診斷VTE的機(jī)制在于回流受阻區(qū)域與健側(cè)相應(yīng)區(qū)域的溫度差［13］。本課題組前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)，下肢DVT 患者和PTE 患者紅外熱成像圖在病變部位呈特征性改變。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四組雙后肢溫差分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；雙后肢溫差分布：T0 組＜T1 組＜T2組、T3 組，而T2 組與T3 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明血瘀證動(dòng)物模型構(gòu)建成功，且隨著造模時(shí)間延長(zhǎng)，兔雙后肢溫差越來(lái)越大。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著造模次數(shù)增加，T0 組、T1 組、T2 組、T3 組右后肢股靜脈內(nèi)徑逐漸縮小，右后肢股靜脈血流量逐漸降低。提示采用皮下注射腎上腺素和冰浴制備的血瘀證動(dòng)物模型能使兔股靜脈收縮、血管腔狹窄，且造模次數(shù)越多，效果越明顯。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著造模次數(shù)增多，兔血漿FIB、D-Dimer 及血清NO 水平逐漸增高，血漿AT-Ⅲ水平逐漸下降，而血清中其他炎癥因子水平變化不明顯。提示造模次數(shù)越多，模型動(dòng)物血液處于高凝狀態(tài)的程度越重，機(jī)體抗凝機(jī)制被抑制，但血液高凝狀態(tài)與炎癥反應(yīng)無(wú)明顯關(guān)系。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，右后肢深靜脈血栓長(zhǎng)度T0 組＜T1 組＜T2 組、T3 組，而T2 組與T3 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肺動(dòng)脈血栓長(zhǎng)度T0 組、T1 組＜T2 組、T3 組，而T0組與T1組、T2組與T3組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示造模次數(shù)越多，模型動(dòng)物后肢深靜脈血栓及肺動(dòng)脈血栓的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)越高。究其原因，隨著寒冷刺激時(shí)間延長(zhǎng)及腎上腺素累積劑量增大，對(duì)血管刺激逐漸增大，進(jìn)而激活凝血系統(tǒng)，引起血漿D-Dimer 活化，F(xiàn)IB 增加，致使機(jī)體抑制凝血機(jī)制受損，機(jī)體處于高凝狀態(tài)，引起AT-Ⅲ活性下降，血栓形成增多，故使兔右后肢深靜脈內(nèi)徑變小、血流量下降、溫度下降，最終形成血栓，部分血栓脫落回流至肺動(dòng)脈，形成肺動(dòng)脈血栓。

綜上所述，紅外熱成像技術(shù)對(duì)兔靜脈血栓栓塞具有一定診斷價(jià)值，可作為一種輔助診斷手段。