黑果花楸果酒中活性成分的分析

摘 """""要： 采用GC-MS法和HPLC法分別測定黑果花楸果酒中揮發性和非揮發性成分。以乙醚-正戊烷（體積比1∶1）作為提取溶劑，采用液液萃取法提取樣品中的揮發性成分，利用GC-MS法對其進行分析檢測。樣品中共檢測出46種揮發性成分，其中酯類15種、醇類6種、酸類8種、芳香類化合物8種。采用HPLC法測定黑果花楸果酒的非揮發性成分，檢測出原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素，其含量質量分數分別為73"μg·g^-1、152"μg·g^-1、67"μg·g^-1、92"μg·g^-1和、101"μ"μg··g^-1。

關 "鍵 "詞：黑果花楸果酒；"活性成分；"GC-MS；"HPLC

中圖分類號：O656.31 """""文獻標志碼：A """""文章編號：1004-0935（2024）0×12-1975-04

黑果花楸全稱黑果腺肋花楸，別稱野櫻莓、不老莓，是集食用、藥用、園林和生態價值于一身的薔薇科花楸屬灌木^[1-2]。黑果花楸中富含多種營養物質，如天然多糖、葡萄糖、甘露糖等，這些物質具有很強的活性，可以被人體吸收并盡快為人體補充能量，能增強人體的非特異性免疫功能。黑果花楸富含黃酮、花青素和多酚等物質^[3-7]，其提取物對治療心臟病、高血壓等心腦血管疾病有特效^[8]。

香氣是水果及果酒感官品質的重要組成部分^[9]，與普通的白酒和啤酒相比，用果實釀造的果酒具有豐富的多酚類化合物，抗氧化能力較強^[10]。不同品種水果香氣不同，同一原材料采用不同發酵工藝或不同酒曲發酵得到的香氣也會產生差異，同種工藝生產的果酒年份不同香氣也不相同^[11-12]。目前，關于黑果花楸果酒中活性成分的研究尚未見文獻報道。

采用液-液萃取法提取黑果花楸果酒樣品中的揮發性成分，利用GC-MS法對其揮發性成分進行分析，利用HPLC法測定其非揮發性成分，建立黑果花楸果酒活性成分的檢測方法，為產品的生產和標準化提供技術支持。

1 "材料和實驗部分

1.1 "樣品來源

研究中的黑果花楸果酒樣品由遼寧騰鰲酒業有限公司提供。

1.2""材料和試劑

槲皮素、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸、原兒茶酸對照品均購自上海麥克林生化科技有限公司。乙醚、正戊烷為分析純，乙腈為色譜純，水為超純水。

1.3""儀器與設備

Agilent"8890-7000D型氣相色譜-質譜聯用儀，安捷倫科技有限公司；N-1300型旋轉蒸發器，東京理化器械株式會社；WP-UP-11-10型實驗室專用超純水機，四川沃特爾水處理設備有限公司；1525型高效液相色譜儀，配2996型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；AL-204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.4""實驗方法

1.4.1 "黑果花楸果酒樣品中揮發性成分的測定

1.4.1.1 "揮發性成分的提取

取樣品20 mL，用20 mL乙醚-正戊烷（體積比1∶1）混合溶液萃取3次，將混合萃取液在25 ℃下蒸發濃縮至0.5 mL^[13]，4"℃冷藏，待測。

1.4.1.2""GC-MS測定條件

GC測定條件：色譜柱為HP-FFAP彈性石英毛細管柱，30 mm×0.20 mm×0.33 μm；進樣口溫度為 250 ℃；初始溫度80 ℃，以10 ℃·min^-1的速率升溫到240 ℃，保持5 min；載氣為高純He，載氣流速為1 mL·min^-1；分流比為20∶1；進樣量為0.1 μL。

MS測定條件：離子源為電子轟擊離子源，溫度為230 ℃；電子能量為70 eV；電子倍增器電壓為1 988 V；發射電流為34.6 μA；接口溫度為230 ℃；掃描質量范圍m/z=20～500；溶劑的延遲時間為3 min。

1.4.1.3 "樣品測試

按照步驟1.4.1.2中GC-MS條件對樣品進行測試。

1.4.2 "黑果花楸果酒樣品中非揮發性成分的測定

1.4.2.1 "對照品溶液的配制

精密稱取原兒茶酸、槲皮素、綠原酸、新綠原酸和咖啡酸對照品，質量分別為3.0、3.0、3.3、3.5、3.6 mg，用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，混合均勻，得到各組分質量濃度分別為0.060、0.060、0.066、0.070、0.072 mg·mL^-1的混合對照品溶液。

1.4.2.2 "HPLC測定條件

色譜柱為Supersil ODS2"C₁₈柱（250 mm×╳4.6 mm，5"μm）；流動相A為乙腈，流動相B為0.1 %磷酸水溶液。洗脫程序：A（0～1 min，16%;"1～4 min，16%～24%；4～11 min，24%；11～21 min，24%～64%； 21～28 min，64%；28～35 min，64%～16%）；柱溫為30"℃；流速為1.0 mL·min^-1；進樣量為10 μL。

1.4.2.3 "樣品測試

按照步驟1.4.2.2中HPLC條件對樣品進行測試。

2 "結果與討論

2.1 "黑果花楸果酒樣品中揮發性成分分析

黑果花楸果酒樣品中揮發性成分的總離子流圖如圖1所示，樣品中揮發性成分分析結果分析結果如見表1所示。

由表1可知，從樣品中共檢測出46種揮發性成分，其中包括2種烯類，、3種烷類，、15種酯類，、6種醇類，、8種芳香類，、2種醛類，、8種酸類，、1種酚類，、1種胡蘿卜素。

2.2 "黑果花楸果酒樣品中非揮發性成分分析

2.2.1 "樣品及對照品的色譜圖分析

樣品和對照品的色譜圖如圖2所示。

2.2.2 "線性關系考察

分別精密移取混合對照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、3.0、5.0、10.0 mL，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，混合均勻，得到梯度對照品溶液。繪制5種多酚類化合物的標準曲線，結果如表2所示。

2.2.3 "重復性實驗

精密移取樣品6份，按照1.4.2.2項測試，經計算，5種多酚類化合物的RSD均小于1.37%，說明實驗的重復性較好。

2.2.4 "精密度實驗

樣品按照1.4.2.2項測試，重復進樣6次，經計算，5種多酚類化合物的RSD均小于0.96%，說明實驗的精密度較好。

2.2.5 "樣品質量分數測定

對黑果花楸果酒樣品進行測定，計算其中多酚類化合物的質量分數。經計算，樣品中原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素的質量分數分別為73、152、67、92、101 μg·g^-1，5種化合物的回收率為99.39%～100.97%。

2.3 "結果分析

從結果可以看出，黑果花楸果酒中揮發性成分含有酯類、酸類和醇類，其中酯類占比最多，其次是酸類和醇類，此外還有少量酚類和芳香類物質。非揮發性成分中原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素等5種多酚類化合物的質量分數均較可觀。

3 "結"論

黑果花楸具有較高的藥用價值、食用價值和商業價值，果實內含有多種對人體有益的成分，具有較好的開發前景。研究結果表明，用黑果花楸果實釀造的果酒中揮發性成分種類較多，風味獨特。檢測出多種非揮發性有效成分，如原兒茶酸、新綠原酸等，具有抗氧化和活血化瘀的功效。這些多酚類物質的存在，為開發黑果花楸作為釀酒原料提供一定的依據和支持。

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Analysis of Active Constituents in Aronia Melanocarpa Fruit Wine

LI Bin^1，2， SUN Liyang^1，2， XU Lili³， LUO Weiwei^1，2， LV LYU"Linlin^1，2， LI Tiechun^1，2， DIAO Quanping^1，2*

（1. School of Chemistry and Life Science， Anshan Normal University， Anshan Liaoning 114007， China;2. Liaoning Key Laboratory of Development and Utilization for Natural Products Active Molecules，Anshan Liaoning 114007， China;"3. Weifang Biomedical Industrial Park Service Center， Weifang Shandong 261000， China）

Abstract："GC-MS and HPLC methods were used"to respectively determine the volatile and non-volatile components in Aronia melanocarpa"fruit wine."Ether and n-pentane （volume ratio 1∶1） as the extraction solvent， the volatile components in the sample were extracted using liquid-liquid extraction method， and were analyzed by GC-MS"method. A total of 46 volatile components were detected in the sample， including 15 kinds of esters， 6 kinds of alcohols， 8 kinds of acids and 8 kinds of aromatic compounds. HPLC method was used to determine the non-volatile components of sample. The mass"fractions of protocatechuic acid， neochlorogenic acid， chlorogenic acid， caffeic acid and quercetin were 73，152，67，92，101 μg·g^-1，respectively.

Key words："Aronia"melanocarpa fruit wine; Active constituents; GC-MS; HPLC