南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

唐雙燕，魏家保，蔡素琴，詹智洪，黃凱偉，趙偉志，張輝

（1.華潤(rùn)三九現(xiàn)代中藥制藥有限公司，廣東 惠州 516000；2.華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518000）

南瓜子為葫蘆科南瓜屬植物南瓜Cucurbita moschata（Duch.）Poiret.的種子，具有通便驅(qū)蟲(chóng)之功效，可用于大便秘結(jié)、腸道絲蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、絳蟲(chóng)等。南瓜子中富含氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、多不飽和脂肪酸和礦物質(zhì)等[1?4]，其中氨基酸是其最主要的活性成分?，F(xiàn)代藥理研究也表明南瓜子中氨基酸類(lèi)成分可以改善腦血管的流通，調(diào)節(jié)腦神經(jīng)，還可以調(diào)節(jié)血壓，維持人體正常的代謝需要，合成人體內(nèi)的免疫球蛋白，從而起到保護(hù)機(jī)體、提高人體免疫力的作用[5?10]。因此，南瓜子中的氨基酸成分是其發(fā)揮良好的藥理作用的關(guān)鍵所在[11]。查閱目前南瓜子藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載情況，如《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（維吾爾藥分冊(cè)）》、《甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2009年版）》、《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2002 年版）》[12?14]等僅收載南瓜子性狀、顯微等項(xiàng)，缺少系統(tǒng)的質(zhì)量控制方法，且化學(xué)成分的研究主要集中在南瓜子氨基酸的測(cè)定方面[15?20]，所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)單一，并不能準(zhǔn)確反映中藥材和中藥制劑的質(zhì)量。因此有必要對(duì)南瓜子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)展開(kāi)深入的研究，為南瓜子的應(yīng)用以及配方顆粒的研究提供依據(jù)和參考。

中藥配方顆粒是由單味中藥飲片經(jīng)水提、分離、濃縮、干燥、制粒而成的顆粒，在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，按照中醫(yī)臨床處方配方后供患者沖服使用，其臨床療效應(yīng)當(dāng)和相應(yīng)的飲片保持一致。為加強(qiáng)中藥配方顆粒質(zhì)量管理，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年1 月公布了《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》[21?24]，明確了標(biāo)準(zhǔn)湯劑為衡量中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的物質(zhì)基準(zhǔn)。中藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑為遵循中醫(yī)藥理論，由不少于15批有代表性的原料，經(jīng)炮制加工后，分別按照臨床湯劑煎煮方法規(guī)范化煎煮，固液分離，經(jīng)適當(dāng)濃縮制得或經(jīng)適宜方法干燥制得。本研究以傳統(tǒng)湯劑的煎煮方法為基準(zhǔn)，建立以出膏率、指標(biāo)成分苯丙氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及轉(zhuǎn)移率、薄層色譜以及特征圖譜為評(píng)價(jià)指標(biāo)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為南瓜子配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Thermo Ultimate 3000 色譜系統(tǒng)，包括LPG-3400SDN 四元梯度輸液泵、WPS-3000SL 自動(dòng)進(jìn)樣器、TCC-3000SD 色譜柱溫箱、DAD-3000二極管陣列紫外檢測(cè)器、Chromeleon 7色譜管理系統(tǒng)（賽默飛世爾科技有限公司）；ME36S 百萬(wàn)分之一分析天平［梅特勒托利多科技（中國(guó)）有限公司］；XSE205十萬(wàn)分之一分析天平［梅特勒托利多科技（中國(guó)）有限公司］；SK5200H 超聲波儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；500 W 自動(dòng)型砂鍋（深圳市一枚王電子商務(wù)有限公司）；HH-8恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；DHG 9240AGZ 熱風(fēng)循環(huán)烘箱［中儀國(guó)科（北京）科技有限公司］；YRE-501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任有限公司）；GOLD-sim冷凍干燥機(jī)（青島永合創(chuàng)信電子科技有限公司）；DFY-600C 中藥粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 試劑、試藥

南瓜子對(duì)照藥材（批號(hào)：330023-202301）購(gòu)于上海鴻永生物科技有限公司；苯丙氨酸（批號(hào)：140676-201706，質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%）、酪氨酸（批號(hào)：140609-202215，質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%）、丙氨酸（批號(hào)：140680-202207，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為超純水；正丁醇、冰乙酸、乙醇、茚三酮、甲醇等其他試劑均為分析純。

1.3 樣品

15批南瓜子分別來(lái)源于安徽亳州、安徽阜陽(yáng)、山東濰坊、山東濟(jì)南和河南商丘，并經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)劉守金教授鑒定為葫蘆科植物南瓜Cucurbita moschata（Duch.）Poiret.的干燥成熟種子。詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

表1 15批南瓜子信息表Table 1 The information of 15 batches of pumpkin seeds

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備

依據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》[24]和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》[25]中相關(guān)要求制備南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑。

取南瓜子藥材，除去雜質(zhì)，取約100 g，搗碎（破碎度不低于90%），置砂鍋中，加入8 倍水浸泡30 min，先武火煮沸，再文火煎煮30 min，200目濾布趁熱濾過(guò)；藥渣再加6 倍水，武火煮沸后，再文火煎煮25 min，200 目濾布趁熱濾過(guò)，合并濾液，濾液減壓（65 ℃）濃縮至料液比接近1∶（3～5）濃浸膏，置于冷凍干燥機(jī)中干燥，即得南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑。15批南瓜子飲片均按以上方法制備成標(biāo)準(zhǔn)湯劑。

2.2 出膏率的測(cè)定

將15批飲片制備成標(biāo)準(zhǔn)湯劑，每批飲片平行制備2 份。測(cè)定各批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 15批南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率及范圍Table 2 Extraction rate and range of 15 batches of pumpkin seed standard decoction

2.3 TLC的鑒別

南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中水溶性成分以氨基酸類(lèi)成分居多，結(jié)合南瓜子藥材的化學(xué)成分種類(lèi)，對(duì)制備的15批南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑建立薄層鑒別方法。

取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑0.3 g，研細(xì)，加稀乙醇20 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取丙氨酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加稀乙醇制成每1 mL 含0.1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版“通則0502”）試驗(yàn)，分別吸取上述2 種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正丁醇-甲醇-冰乙酸-水（15∶4∶5∶5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%茚三酮乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置白光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。15 批南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑薄層色譜圖信息全面，斑點(diǎn)清晰。各批次均能達(dá)到良好的分離效果，見(jiàn)圖1。

圖1 南瓜子15批飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的TLC色譜圖Figure 1 TLC chromatogram of 15 batches of standard decoction of pumpkin seeds

2.4 質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

2.4.1 色譜條件 色譜柱：Waters Atlantis T3，4.6 mm×250 mm，5 μm，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，梯度洗脫（0～10 min，0%A→4%A；10～35 min，4%A→7%A；35～42 min，7%A→22%A；42～50 min，22%A→36%A）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；柱溫為25 ℃；流速為1.0 mL/min；理論塔板數(shù)按苯丙氨酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取苯丙氨酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加10%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇制成每1 mL含50 μg的對(duì)照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備

2.4.3.1 飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液的制備取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑約0.5 g，精密稱(chēng)定，加水20 mL 溶解，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3.2 飲片供試品溶液的制備取南瓜子飲片（過(guò)3 號(hào)篩）約2.0 g，精密稱(chēng)定，加水50 mL，水浴加熱回流30 min，取出，放冷，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 方法學(xué)考察

2.4.4.1 線性關(guān)系的考察 取苯丙氨酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加10%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇制成質(zhì)量濃度為0.42 mg/mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。將儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋為每1 mL 含苯丙氨酸分別為12.5、50、100.0、200.0、400.0 μg 的對(duì)照品溶液，精密吸取上述5 種不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液各10μL 注入高效液相色譜儀，按“2.4.1”項(xiàng)下條件分別進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得苯丙氨酸回歸方程為Y=32.617X+2.227（r=0.999），在12.5～400 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.4.2 精密度試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液（S1），連續(xù)進(jìn)樣6 次，按“2.4.1”項(xiàng)下方法測(cè)定。丙苯氨酸色譜峰峰面積的RSD%值為0.7%，表明儀器精密度良好。

2.4.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液（S1）6份，按“2.4.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果顯示，苯丙氨酸峰面積的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD值為0.5%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液（S1），按“2.4.3.1 ”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、4、8、12、16、24 h 按照“2.4.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。24 h內(nèi)苯丙氨酸峰峰面積的RSD值為0.8%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱(chēng)取苯丙氨酸對(duì)照品1.123 mg、2.181 mg、3.362 mg置100 mL量瓶中，加水制成每1 mL 含苯丙氨酸0.011 2、0.021 8、0.033 6 mg的對(duì)照品溶液，備用。

取已知指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1）0.25 g，共9 份，置具塞錐形瓶中，分3 組（低、中、高濃度）精密加入20 mL上述對(duì)照品溶液各3 份，按“2.4.3.1”項(xiàng)下方法制備9 份供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果苯丙氨酸平均回收率分別為94.4%、97.9%、100.5%，RSD值為3.6%，具體信息見(jiàn)表3。

表3 南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中苯丙氨酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of recovery of phenylalanine in standard decoction of pumpkin seeds（n=3）

2.4.4.6 南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定及轉(zhuǎn)移率的計(jì)算 取15 批南瓜子飲片及所制備的飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算苯丙氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。根據(jù)公式計(jì)算：轉(zhuǎn)移率=南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中苯丙氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)×出膏率/南瓜子飲片中苯丙氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)×100%。結(jié)果表明，15 批南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中苯丙氨酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.43 mg/g，苯丙氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍為0.56 ～1.99 mg/g，苯丙氨酸的轉(zhuǎn)移率均值為69.7%，苯丙氨酸轉(zhuǎn)移率范圍為42.7%～86.1%，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中苯丙氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及轉(zhuǎn)移率Table 4 Content and transfer rate of phenylalanine in stan‐dard decoction of pumpkin seed slices

2.5 特征圖譜的建立

2.5.1 色譜條件 同“2.4.1”項(xiàng)下。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 分別取苯丙氨酸、酪氨酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加10%甲醇分別制成每1 mL含苯丙氨酸、酪氨酸50 μg的對(duì)照品溶液。

2.5.3 供試品溶液的制備 同“2.4.3”項(xiàng)下。

2.5.4 方法學(xué)考察

2.5.4.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別精密吸取陰性對(duì)照溶液（水）、“2.5.2 ”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，按“2.5.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果表明陰性對(duì)照無(wú)干擾，方法專(zhuān)屬性良好。

2.5.4.2 精密度試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1）供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，結(jié)果各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 值均小于2.0%，表明儀器精密度良好。

2.5.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1），平行制備6 份供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 值均小于2.0%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液（S1），于配制后第0、4、8、12、16、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄各共有峰的保留時(shí)間。結(jié)果表明各共有峰與參照峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD值均小于2.0%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 共有峰的標(biāo)定及共有模式的建立 取15 批南瓜子飲片及飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012 版）”，將各色譜峰匹配，建立的特征圖譜呈現(xiàn)13個(gè)共有特征峰，15批樣品特征圖譜相似度均大于0.9，13 個(gè)峰占色譜峰總面積的95%以上，提示該方法可用于南瓜子藥材質(zhì)量的整體評(píng)價(jià)。通過(guò)對(duì)照品指認(rèn)了2 個(gè)特征峰，其中峰3 為酪氨酸，峰7為苯丙氨酸。將苯丙氨酸峰標(biāo)為S峰，計(jì)算特征峰峰1、2、4、5、6、8、9、10、11、12、13 與S 峰的相對(duì)保留時(shí)間，分別為0.27（峰1）、0.37（峰2）、0.53（峰4）、0.60（峰5）、0.71（峰6）、1.10（峰8）、1.28（峰9）、1.40（峰10）、1.85（峰11）、2.23（峰12）、2.32（峰13）。見(jiàn)圖3－5、表5。

圖3 南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的HPLC色譜圖Figure 3 HPLC chromatograms of pumpkin seed slices stan‐dard decoc

圖4 15批南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的HPLC疊加圖譜Figure 4 HPLC overlay chromatograms of 15 batches of pumpkin seed slices standard decoction

圖5 15批南瓜子飲片的HPLC疊加圖譜Figure 5 HPLC overlay chromatograms of 15 batches of pumpkin seeds decoction pieces

表5 15 批南瓜子飲片及飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度Table 5 Similarity of 15 batches of pumpkin seed slices and standard decoction

3 討論

3.1 色譜條件及供試品溶液制備方法的選擇

本研究考察了不同品牌的色譜柱、不同有機(jī)相體系（甲醇、乙腈）、不同流動(dòng)相（0.1%磷酸、0.1%醋酸、0.1%甲酸、水）、不同柱溫（23、25、30 ℃）、不同流速（0.5、0.8、1.0 mL/min）、不同品牌儀器（Waters e2695、Agilent 1260 和UltiMate 3000）的分離效果，結(jié)果特征圖譜以檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm、甲醇-水為流動(dòng)相；柱溫為25 ℃；流速為1.0 mL/min 時(shí)分離效果較好。同時(shí)考察了不同提取溶劑（水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、乙醇）的提取效果，結(jié)果以水提取時(shí)效果最好。

3.2 南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量控制

3.2.1 原料的選擇 本研究基于歷史古籍的本草考證及產(chǎn)地實(shí)際考察，確定了在古籍中記載的基原性狀判斷與《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維藥分冊(cè)》[12]中的基原相同，為葫蘆科植物南瓜的干燥成熟種子。15 批南瓜子藥材來(lái)自不同的主產(chǎn)區(qū)，所選樣品在產(chǎn)地、質(zhì)量水平等方面均具有代表性。

3.2.2 出膏率的研究 根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，按照中藥調(diào)劑“逢殼必?fù)v，逢籽必破”等傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)對(duì)飲片進(jìn)行預(yù)處理[24]，并對(duì)南瓜子的破碎粒度進(jìn)行考察。最終選擇破殼率應(yīng)不低于90%。本研究結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備工藝要求，加水量以浸過(guò)藥面2～5 cm 為宜，對(duì)其加水量及煎煮時(shí)間進(jìn)行考察，研究顯示加水量對(duì)出膏率影響不大，隨著煎煮時(shí)間的增加，出膏率會(huì)有所增減，但相差不大，因此出于節(jié)約資源、同時(shí)為后續(xù)濃縮工序節(jié)約時(shí)間的考慮，確定標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝為一煎加8 倍水，煎煮30 min；二煎加6 倍水，煎煮25 min[19?20]。15 批南瓜子飲片制備成南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率在10.4%～18.3%之間，各批次間出膏率差異不大，說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝穩(wěn)定可行。

3.2.3 質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的研究 建立氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定方法時(shí)對(duì)供試品制備方法進(jìn)行了考察，并開(kāi)展了方法學(xué)的驗(yàn)證（專(zhuān)屬性、線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性），結(jié)果表明方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，符合質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的要求。通過(guò)測(cè)定轉(zhuǎn)移率及出膏率重點(diǎn)考察標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝的穩(wěn)定性，通過(guò)質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定考察不同批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量的均一性。結(jié)果南瓜子15 批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑中苯丙氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.56 ～1.99 mg/g，轉(zhuǎn)移率范圍為42.7%～86.1%，表明各批次南瓜子中苯丙氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)稍有差異，應(yīng)與產(chǎn)地、批次差異性有關(guān)。

3.2.4 定性鑒別的研究 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，南瓜子的主要化學(xué)成分為氨基酸、脂肪酸等[17?19]。由于南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑為經(jīng)水煮后提取的物質(zhì)，應(yīng)綜合考慮化學(xué)成分的水溶性特點(diǎn)及化學(xué)成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低或脂溶性的物質(zhì)可能無(wú)法在水溶后進(jìn)行呈現(xiàn)。在南瓜子的以上成分中，氨基酸成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高且水溶性較好，故將其作為南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜的主要化學(xué)成分。

在特征圖譜研究中，根據(jù)多批南瓜子飲片及飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的測(cè)定結(jié)果，確立了南瓜子飲片及飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品色譜的13 個(gè)特征峰，并指認(rèn)苯丙氨酸與酪氨酸2 種成分。經(jīng)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012 版）軟件”計(jì)算，各批次南瓜子飲片以及飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜的相似度均大于0.9，說(shuō)明南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的化學(xué)組分共性較好，方法學(xué)考察符合要求，本方法穩(wěn)定可行、重復(fù)性良好。

4 結(jié)語(yǔ)

本研究收集并制備了15 批不同產(chǎn)地的南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，建立以丙氨酸為對(duì)照的南瓜子氨基酸成分TLC 鑒別法；采用苯丙氨酸為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定，計(jì)算了15 批樣品的轉(zhuǎn)移率和出膏率；同時(shí)建立南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的特征圖譜檢測(cè)方法，利用對(duì)照品指認(rèn)出其中2 個(gè)特征峰。本研究所建立的方法具有良好的可行性與準(zhǔn)確性，能較全面反映南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的內(nèi)在質(zhì)量，可為南瓜子飲片質(zhì)量控制提供參考，為南瓜子飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備及質(zhì)量研究提供基礎(chǔ)，同時(shí)為南瓜子飲片新劑型的開(kāi)發(fā)、使用劑量統(tǒng)一以及質(zhì)量監(jiān)測(cè)奠定基礎(chǔ)。