潰瘍性結腸炎患者血清Elabela，LRG1水平表達與疾病活動指數的相關性研究

王 燕，胡秀娟，張 麗，呂竹潔，王 龍，仝高成（運城市中心醫院 .消化內科；.消化內鏡室，山西運城 044000）

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是臨床常見的炎癥性腸病，該病病程長且易反復發作，不僅可導致累積性腸道損傷，引起心肌梗死、中風等并發癥，且具有潛在癌變風險，尤其是在疾病活動期間[1]。UC 發病機制尚不明確，目前認為腸道上皮血管通透性增加和腸屏障損傷與UC 的發生相關[2]。Elabela 是維持血管功能的重要調節因子，具有抗凋亡、抗炎和抗氧化作用，被認為是預測血管損傷的潛在指標[3]。富亮氨酸α2 糖蛋白1（leucine-rich α2 glycoprotein 1，LRG1）是一種50 kDa 的糖蛋白，含有富含亮氨酸基序的重復序列，在白細胞介素（interleukin，IL）-22，腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α，IL-1β 等刺激下，在神經細胞、肝細胞、中性粒細胞、巨噬細胞和腸上皮細胞等細胞中表達升高，參與血管生成，與關節炎、感染、心力衰竭等多種疾病有關[4-5]。Elabela和LRG1 在UC 的報道并不多見，鑒于此，本研究檢測UC 患者血清Elabela，LRG1 水平，探討兩者與UC 疾病活動指數的相關性，以期為臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2022年1～12月運城市中心醫院收治的98 例UC 患者為UC 組，其中男性55 例，女性43 例，年齡32～43（36.62±2.85）歲，體質量指數21～23（22.15±0.63）kg/m2。納入標準：①符合《潰瘍性結腸炎診療指南》[6]中診斷標準；②行結腸鏡檢查，內鏡評估內容和黏膜病理學資料完整；③年齡＞18 歲。排除標準：①急性或慢性肝??；②并發或既往慢性免疫介導性炎癥疾病（炎癥性腸病除外）、既往結腸切除術史、活躍侵蝕性胃腸黏膜疾??；③正在接受任何形式的UC 治療；④妊娠患者。參考《潰瘍性結腸炎診療指南》[6]，根據黏膜病理學檢查結果將UC患者分為活動期組（n=62）和緩解期組（n=36）。根據病情嚴重程度將UC 患者分為輕度組（n=26）、中度組（n=43）和重度組（n=29）。另選擇收治的51 例結腸息肉患者為對照組1，體檢中心體檢健康的50 例志愿者為對照組2。對照組1 中男性29 例，女性22 例，年齡30～41（36.01±2.71）歲，體質量指數20～23（22.01±0.60）kg/m2。對照組2 中男性28 例，女性22 例，年齡31～45（36.72±2.49）歲，體質量指數20～23（22.06±0.57）kg/m2。三組性別、年齡、體質量指數比較，差異均無統計學意義（F/χ2=0.010，1.023，0.685，均P＞0.05）。本研究經運城市中心醫院倫理委員會批準，并獲得所有研究對象的知情同意。

1.2 儀器與試劑 XE-2100 全自動血細胞分析儀（日本Sysmex 株式會社），ESR40 全自動動態血沉分析儀（濟南博坤科學儀器有限公司），Multiskan FC 全自動酶標儀（美國賽默飛公司），Elabela 試劑盒（上海語純生物科技有限公司），LRG1 試劑盒（上海研啟生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 內鏡分級、黏膜愈合情況評估：根據內鏡活動指數（endoscopic activity index，EAI）[7]對患者進行評分，其中造粒散射反射光：是記0 分，否記2 分；血管分型：正常記0 分，扭曲記1 分，缺失記2 分；黏膜出血：無記0 分，接觸性出血記2 分，自發性出血記4 分；黏膜病變：主要包括黏液、滲出物、糜爛、潰瘍等，無記0 分，輕度記2 分，顯著記4 分?？偡?～12 分，0～3 分為正常[8]，分值越高表示疾病活動性越強。本文根據EAI 將UC患者分為Ⅰ級組（4～6 分，n=25）、Ⅱ級組（7～9分，n=40）和Ⅲ級組（10～12 分，n=33）。所有UC 患者接受氨基水楊酸類抑制劑、糖皮質激素或免疫抑制劑治療后再次接受內鏡檢查。根據內鏡下黏膜愈合情況將患者分為愈合組（n=65 例）和未愈合組（n=33）。

1.3.2 實驗室指標檢測：采集所有受試者入組當日空腹靜脈血7ml，取2ml 采用全自動血細胞分析儀檢測血紅蛋白水平，另取2ml 采用全自動動態血沉分析儀檢測紅細胞沉降率（ESR）水平。取3ml 經離心后（3 000r/min，5min）分離血清，-80℃保存待檢。應用酶聯免疫吸附試驗檢測血清Elabela 及LRG1 水平，具體操作根據試劑盒說明進行。

1.4 統計學分析 采用SPSS 25.00進行數據分析。計量資料符合正態分布以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析。計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。Pearson 法分析UC 患者血清Elabela 及LRG1 水平與EAI，HB，ESR 的相關性。受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC）分析血清Elabela，LRG1 及聯合檢測對內鏡下黏膜愈合的預測價值。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組血清Elabela，LRG1 表達水平及HB，ESR水平比較 見表1。UC 組血清Elabela，LRG1 和ESR 水平高于對照組1 和對照組2，HB 低于對照組1 和對照組2，差異具有統計學意義（t=11.410，12.269；39.000，38.194；15.065，15.483；7.192，7.412，均P＜0.05）。

表1 三組血清Elabela，LRG1 表達水平及HB，ESR 水平比較（±s）

項 目UC 組（n=98）對照組1（n=51）對照組2（n=50）F 值P 值Elabela（ng/ml）4.77±1.362.51±0.532.35±0.42132.2890.000 LRG1（ng/ml ）352.12±39.45121.02±21.06120.35±23.491 304.2430.000血紅蛋白（g/L）102.35±10.93115.32±9.43116.15±10.2741.2430.000 ESR（mm/h）28.35±6.4913.65±3.4913.02±3.6598.9870.000

2.2 活動期組和緩解期組血清Elabela，LRG1 水平比較 活動期組血清Elabela（5.26±0.54ng/ml），LRG1（370.42±12.49ng/ml）水平高于緩解期組（3.93±0.42ng/ml，320.60±8.47ng/ml），差異具有統計學意義（t=12.705，21.242，均P＜0.05）。

2.3 不同病情嚴重程度患者血清Elabela，LRG1 水平比較 見表2。重度組血清Elabela，LRG1 水平高于中度組和輕度組，差異有統計學意義（t=10.751，35.077；3.205，11.771，均P＜0.05），中度組血清Elabela，LRG1 水平高于輕度組，差異有統計學意義（t=4.130，7.625，均P＜0.05）。

表2 不同病情嚴重程度患者血清Elabela，LRG1 水平比較（±s）

表2 不同病情嚴重程度患者血清Elabela，LRG1 水平比較（±s）

項 目輕度組（n=26）中度組（n=43）重度組（n=29）F 值P 值Elabela（ng/ml）3.95±0.214.51±0.675.89±0.20127.9360.000 LRG1（ng/ml）3 25.65±10.14356.12±18.75369.92±16.5953.2870.000

2.4 不同內鏡分級患者血清Elabela，LRG1 水平比較 見表3。Ⅲ級組血清Elabela，LRG1 水平高于Ⅱ級組和Ⅰ級組，差異有統計學意義（t=19.466，48.725；3.854，8.710，均P＜0.05），Ⅱ級組血清Elabela，LRG1 水平高于Ⅰ級組，差異有統計學意義（t=8.447，8.812，均P＜0.05）。

表3 不同內鏡分級患者血清Elabela，LRG1 水平比較（±s）

表3 不同內鏡分級患者血清Elabela，LRG1 水平比較（±s）

項 目Ⅰ級組（n=25）Ⅱ級組（n=40）Ⅲ級組（n=33）F 值P 值Elabela（ng/ml）3.86±0.164.49±0.355.80±0.18434.8140.000 LRG1（ng/ml）324.15±8.71355.46±16.34369.16±13.4777.9030.000

2.5 愈合組和未愈合組血清Elabela，LRG1 水平比較 未愈合組血清Elabela（5.12±0.42ng/ml），LRG1（367.12±14.27ng/ml） 水平高于愈合組（4.08±0.37ng/ml，322.57±10.35ng/ml），差異有統計學意義（t=12.043，15.917，均P＜0.05）。

2.6 UC 患者血清Elabela，LRG1 水平與EAI，HB，ESR 的相關性 UC 患者血清Elabela，LRG1水平與EAI，HB 呈正相關（r=0.602，0.298；0.576，0.302，均P＜0.05），與血紅蛋白水平呈負相關（r=-0.351，-0.334，均P＜0.05）。

2.7 血清Elabela，LRG1 對內鏡下黏膜愈合的預測價值 見表4 和圖1。血清Elabela，LRG1 聯合預測內鏡下黏膜愈合的曲線下面積高于Elabela，LRG1單獨預測，差異有統計學意義（Z=4.101，4.228，均P＜0.05）。

圖1 血清Elabela，LRG1 預測內鏡下黏膜愈合的ROC 曲線

表4 血清Elabela，LRG1 對內鏡下黏膜愈合的預測價值

3 討論

潰瘍性結腸炎（UC）病因尚不明確，被認為與遺傳、環境、黏膜免疫失調等有關。自進入21世紀以來，抗腫瘤壞死因子治療顯著改善了UC 的治療結果，治療目標從癥狀緩解轉變為內窺鏡下組織學愈合。結腸鏡檢查是評估UC 患者病情的金標準，但作為一種可對患者造成明顯疼痛的侵入性檢查，其僅適宜診斷，并不適合實時評估患者的腸黏膜病變。因此有必要探尋能夠準確地評估UC 患者的腸黏膜情況的生物學標志物。研究報道，免疫反應失調，血管壁損傷和血管通透性增高在UC 的發病中起重要作用[9]。研究發現，UC 小鼠模型中可觀察到結腸黏膜區血管周圍水腫，提示UC 小鼠腸道內皮損傷，腸道血管通透性增加，腸屏障功能障礙[10]。結腸炎期間瞬時受體電位香草素4 通道激活，通過降低血管內皮鈣黏素的表達，增加血管內皮通透性促進結腸炎癥的發展[11]。血管通透性增加提示腸道上皮屏障功能障礙，通常與UC 風險增加和疾病活動性增加有關[9]。

血清Elabela 是一種含有32 個氨基酸的激素肽，被認為是Apelin 受體的第二內源性配體，廣泛分布于不同的組織器官中，在血壓控制、心臟形態發生、細胞凋亡、血管生成、細胞增殖、遷移等生理過程中發揮重要作用，與心功能障礙、心力衰竭、高血壓、腎臟疾病、癌癥和中樞神經系統疾病等病理狀況有關[12]。Elabela 在未分化胚胎干細胞中高度表達，調控內胚層分化，在血管內皮細胞中也有表達，可趨化血管內皮細胞遷移和增殖分化，對正常血管發育至關重要[12]?，F有研究顯示Elabela 通過抑制IL-6/信號轉導子與激活子3 信號通路和激活谷胱甘肽過氧化物酶4 信號通路，緩解血管緊張素Ⅱ誘導的心臟成纖維細胞增殖、遷移和氧化應激，抑制不良心肌重塑和纖維化[13]。Elabela 也是一種新的apelin 受體（apelin receptor，APJ）內源性配體，Elabela/APJ 軸通過抑制血管緊張素轉換酶（angiotensin I converting enzyme，ACE）表達和血管緊張素II 信號通路，抑制ACE 2 水平預防壓力過載誘導的高血壓和心力衰竭[14]。Elabela 還可通過激活成纖維細胞生長因子21-ACE2 信號通路，抑制動脈外膜成纖維細胞凋亡，并緩解氧化應激和炎癥反應，修復受損血管和維持血管正常功能[3]。臨床報道顯示，肢端肥大癥患者血清Elabela 水平高于健康對照組，血清Elabela 水平與收縮壓、N-末端B 型利鈉肽原水平呈正相關，血清Elabela 水平是肢端肥大癥患者早期心血管受累的標志[15]。本研究發現UC 患者血清Elabela 水平顯著高于對照組1 和對照組2，且隨著疾病活動、病情嚴重程度、內鏡分級的增加而增加。推測Elabela 參與UC的機制為：Elabela 在血管損傷早期代償性升高以促使血管內皮細胞遷移和增殖，促使新生血管形成，修復受損血管。隨著UC 活動度增加和病情加重，Elabela 水平雖增加，但其血管保護的生物學作用減弱，繼而引起血管損傷程度加重，通透性增加，導致腸道上皮屏障功能障礙和UC 病情進展。

富亮氨酸α2 糖蛋白1（LRG1）是富亮氨酸重復序列蛋白家族的重要成員，作為轉化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β） 上游重要信號分子，通過激活TGF-β 信號通路介導TGF-β 的生物學效應，比如LRG1 與TGF-β 受體結合激活下游smad1/5/8 通路，啟動血管生成信號通路，LRG1 還與TGF-β 受體1/激活素受體樣激酶5 結合形成復合物，調節T 細胞分化，促進內皮型一氧化氮合酶合成等，與感染、惡性腫瘤、免疫疾病、心血管疾病等發病有關[16-17]?，F有研究顯示克羅恩病患者血清LRG1 水平顯著升高，且與內鏡活動性增加有關[18]，提示LRG1 可能作為炎癥性腸病的標志物。本研究發現UC 患者血清LRG1 水平顯著增高，并與UC 活動期、病情加重以及內鏡分級增加有關，血清LRG1 水平與EAI 分級呈正相關，表明LRG1 過度合成可能促使UC 活動性增加和病情加重。分析LRG1 參與UC 的機制為：內皮細胞調節血管張力、血管通透性和白細胞黏附，在維持血管穩態中起著重要作用，促炎細胞因子可誘導核因子-κB 活化，激活內皮細胞中LRG1 并迅速釋放。LRG1 作為一種新型的血管生成調節因子，通過激活內皮細胞中TGF-β 及其下游Smad1/5/8 通路，發揮促血管生成作用，并介導單核細胞捕獲、黏附和隨后的跨內皮遷移[19]，與血管炎癥損傷、通透性增加以及腸屏障功能障礙有關。另外LRG1 過度表達可促使腸上皮血管異常增生，增加癌變風險[20]。ROC 分析結果顯示，血清Elabela，LRG1 水平可預測UC 內鏡下黏膜愈合情況，聯合兩者檢測預測效能更高，表明血清Elabela，LRG1 對臨床療效判斷具有一定價值。

綜上，UC 患者血清Elabela，LRG1 水平增高，且與UC 活動期、病情加重和內鏡分級增加有關。血清Elabela，LRG1 可作為UC 疾病活動、病情嚴重程度、內鏡下黏膜愈合評估的標志物，通過靶向Elabela，LRG1 可能為UC 治療提供新的方向和思路。本研究不足之處在于樣本例數較少，且為單中心研究，可能存在一定偏倚，仍需進一步擴大樣本例數加以證實。