超聲-酶輔助低共熔溶劑提取桑葉總黃酮的工藝優化及其抗氧化活性研究

吳 均，吳俊葶，楊碧文，王 梅，趙 珮，馬婧秋，黃 越,，黃傳書,

（1.重慶市蠶業科學技術研究院，重慶 400700；2.中國人民解放軍陸軍勤務學院，重慶 401331）

桑葉（Mulberry Leaf）又名神仙葉、鐵扇子，為桑屬桑科類桑的葉子，富含黃酮、多糖、總酚、生物堿、維生素、有機酸、植物甾醇、揮發油、微量元素以及氨基酸等成分[1-2]，于2002 年列入藥食同源目錄[3]。《神農本草經》記載，桑葉具有潤肺止渴，疏風散熱、清肝明目等藥效[4]。桑葉作為天然藥食兩用的植物資源，少量用于養蠶飼料，大量的桑葉被焚燒處理，造成資源浪費。隨著現代科技的發展，研究表明，桑葉具有降血糖、抗菌、抗病毒、抗氧化、保護心血管、抗癌、抗腫瘤、抗輻射、免疫調節、減肥減脂、恢復紊亂的腸道菌群等作用[5-11]。黃酮是桑葉的主要成分之一，具有顯著的抗氧化和降血糖作用[12-13]，因此桑葉總黃酮具有較高的利用價值且極具開發應用前景。

目前，提取黃酮主要方法有水提法、醇提法，酶提法、微波輔助溶劑提取法以及超聲波輔助溶劑提取法等，這些方法雖然操作簡單，但均存在耗時長、提取量少、能耗高等缺點[14]。低共熔溶劑（Deep Eutectic Solvents，DES），由氫鍵受體與氫鍵供體按一定摩爾比組成，具有制備簡單、溶解性好、熱穩定性高、提取效率高、價格低廉且無毒等優點[15]。已有一些關于DES 提取黃酮類[16]的報道。與傳統溶劑相比，DES 可顯著提高黃酮提取率，且可改善現有技術存在的耗時長、操作繁瑣或長時間熱效應導致有效成分分解氧化等弊端。雷永偉等[17]采用6 種DES提取蕎麥殼黃酮，發現氯化膽堿-尿素的提取率最高，達到了 4.79%，優于傳統的乙醇法，證實DES 可有效地提升蕎麥殼黃酮的提取率；羅朝丹等[18]采用超聲輔助DES 法提取番石榴葉總黃酮，發現ChCl+EG組成的DES 為提取溶劑，總黃酮提取率高達14.95%；謝茜等[19]以龍眼參為對象，采用超聲波輔助低共熔溶劑法提取的龍眼參黃酮，提取率為（37.98±0.13）mg/g，且龍眼參黃酮顯著延長小鼠的力竭時間，提升抗運動疲勞能力。目前關于DES 提取桑葉總黃酮的研究還未見報道。

本研究首次將超聲、酶和低共熔溶劑三者聯合起來用于提取桑葉總黃酮，以期縮短提取時間、最大限度提高提取量并降低能量的消耗。通過對比不同種類的DES、傳統溶劑和傳統方法提取桑葉總黃酮，篩選最佳DES，通過單因素和響應面法優化超聲-酶輔助低共熔溶劑提取桑葉總黃酮的工藝，進一步研究其體外抗氧化活性，旨在獲得一種綠色高效桑葉總黃酮的提取方法，為桑葉的綜合利用與開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

桑葉 重慶市蠶業科學技術研究院；無水乙醇、葡萄糖、乙二醇、尿素 分析純，成都市科隆化學品有限公司；氯化膽堿、果糖、蘋果酸、檸檬酸、葡萄糖、纖維素酶（10 萬U/g）、甘油、1-4-丁二醇、草酸、乳酸、抗壞血酸、6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸（6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Trolox）、2,2'-聯氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸 [2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS]、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）分析純，上海麥克林生化科技有限公司；蘆丁 對照品，北京索萊寶科技有限公司。

SOP 電子天平 賽多利斯科學儀器有限公司；TGL-16M 高速冷凍離心機 上海盧湘儀離心機儀器有限公司；UV-1800 型紫外-可見分光光度計 翱藝儀器有限公司；XY-500A 型高速多功能粉碎機浙江省永康市松青五金廠；HCJ-4D 磁力攪拌水浴鍋常州朗越儀器制造有限公司；HGZF-11 電熱恒溫鼓風干燥箱 上海躍進醫療器械有限公司；SB25-12DTD 超聲波清洗機 寧波新芝生物科技股份有限公司；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵 鄭州長城科工貿有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 以蘆丁為標準對照品，通過測量其在510 nm 的吸光度，建立蘆丁標準曲線，測定桑葉總黃酮的含量。準確稱取蘆丁標準品20.0 mg，用50%的熱乙醇溶解，定容至100 mL，搖勻，制備成0.2 mg/mL 標準溶液備用。精密量取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 上述蘆丁標準液，置于25 mL的容量瓶中，加入50%乙醇5 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.7 mL，搖勻，放置5 min 后加入10%硝酸鋁溶液0.7 mL，搖勻，放置6 min 后加入1 mol/L 的氫氧化鈉溶液10 mL，用50%乙醇定容至刻度，搖勻，放置10 min 后于波長510 nm 處測定吸光度，試劑空白為參比液。以蘆丁質量濃度（X）為橫坐標，測得的吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線。得到標準曲線為：A=10.286X-0.0023，R2=0.9993，線性范圍為0～0.048 mg/mL。

1.2.2 桑葉總黃酮提取量的測定 精密稱取1.0 g 桑葉粉末于250 mL 三角瓶中，按一定的液料比加入一定含水量的低共熔溶劑，置于一定功率和一定溫度的超聲波中，超聲一定時間，超聲結束后放冷，移至50 mL 離心管內，于10000 r/min 下離心10 min，取上清液過0.45 μm 的微孔濾膜，置于4 ℃冰箱保存備用。

精密量取桑葉總黃酮提取溶液1 mL 于25 mL容量瓶中，按照上述測定方法測定吸光度，根據所得蘆丁標準曲線計算桑葉總黃酮濃度。按照公式計算總黃酮提取量：

式中：W 為桑葉總黃酮提取量，mg/g；C 為黃酮質量濃度，mg/mL；V 為提取液體積，mL；N 為稀釋倍數；M 為桑葉質量，g。

1.2.3 不同提取方法 水提取法：精確稱取1.0 g 桑葉粉于100 mL 錐形瓶中，加入40 mL 純水，室溫浸漬2 h。提取后在10000 r/min，離心10 min，取上清液，測定桑葉總黃酮提取量。

醇提取法：精確稱取1.0 g 桑葉粉于100 mL 錐形瓶中，加入40 mL 50%乙醇溶液，室溫浸漬2 h。提取后在10000 r/min，離心10 min，取上清液，測定桑葉總黃酮提取量。

超聲-水提取法：精確稱取1.0 g 桑葉粉于100 mL錐形瓶中，加入40 mL 純水溶液，在超聲清洗器中以超聲功率300 W，提取溫度40 ℃，提取2 h。提取后在10000 r/min，離心10 min，取上清液，測定桑葉總黃酮提取量。

超聲-醇提取法：精確稱取1.0 g 桑葉粉于100 mL錐形瓶中，加入40 mL 50%乙醇溶液，在超聲清洗器中以超聲功率300 W，提取溫度40 ℃，提取2 h。提取后在10000 r/min，離心20 min，取上清液，測定桑葉總黃酮提取量。

超聲-酶輔助低共熔溶劑提取法：精確稱取1.0 g 桑葉粉于100 mL 錐形瓶中，加入40 mL 低共熔溶劑，3%纖維素酶，在超聲清洗器中以超聲功率300 W，提取溫度40 ℃，提取1 h。提取后在10000 r/min，離心20 min，取上清液過0.45 μm 的微孔濾膜，測定總黃酮的提取量。

1.2.4 低共熔溶劑（DES）的制備及篩選 選擇氯化膽堿（Hydrogen Bond Acceptor，HBA）作為氫鍵受體，分別與不同的氫鍵供體（Hydrogen Bond Donors，HBD）按摩爾比1:1 或者1:1:1，設計了17 組DES（見表1），在 80 ℃水浴條件下加熱攪拌至溶液澄清，冷卻至室溫，備用。

精密稱取1.0 g 桑葉粉末于250 mL 三角瓶中，按液料比40 mL/g 加入30%含水量的低共熔溶劑，置于超聲功率300 W，超聲溫度40 ℃，超聲40 min，超聲結束后放冷，移至50 mL 離心管內，于10000 r/min 下離心10 min，取上清液過0.45 μm 的微孔濾膜，測定桑葉總黃酮的提取量，篩選出最佳低共熔溶劑。

1.2.5 單因素實驗 以最佳DES 溶劑為提取劑，初始固定參數為：摩爾比1:1:2，含水量30%，液料比40 mL/g，超聲功率300 W，超聲溫度40 ℃，超聲時間40 min，酶添加量3%。考察不同摩爾比（1:1:1、1:1:2、1:1:3、1:1:4、1:1:5、1:2:1、1:3:1、1:4:1、2:1:1、3:1:1、4:1:1）；不同含水量（20%、25%、30%、35%、40%）；液料比（20、30、40、50、60 mL/g）；超聲功率（240、300、360、420、480 W）；超聲時間（20、30、40、50、60 min）；超聲溫度（30、35、40、45、50 ℃）；酶添加量（1%、2%、3%、4%、5%）對桑葉總黃酮提取量的影響。

1.2.6 響應面試驗 根據單因素實驗結果，選擇對桑葉總黃酮提取量影響顯著的含水量（A）、酶添加量（B）和超聲時間（C）為自變量，以總黃酮提取量（Y）作為響應值，采用 Box-Behnken 響應面設計試驗，進一步優化桑葉總黃酮的提取工藝條件。因素水平設計見表2。

表2 Box-Behnken 設計試驗因素水平及編碼Table 2 Level and code of variables for Box-Benhnken design

1.2.7 抗氧化活性的測定 用無水乙醇將在最優條件下提取得到的桑葉總黃酮提取液配制成1.0 mg/mL的桑葉總黃酮溶液，備用。

1.2.7.1 DPPH 自由基清除率 取2 mL 0.2 mmol/L的DPPH 無水乙醇溶液分別加2 mL 濃度為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 mg/mL 的樣品溶液，混勻，避光靜置30 min，在517 nm 波長處測定吸光度，以相同濃度的Trolox 和VC作陽性對照[20]。

式中：A0為4 mL DPPH 溶液+4 mL 純水；Ai為4 mL DPPH 溶液+4 mL 樣品溶液；Aj為4 mL樣品溶液+4 mL 純水。

1.2.7.2 ABTS+自由基清除率 取6 mL ABTS 工作液分別加0.2 mL 濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16、0.18、0.20 mg/mL 的樣品溶液，混勻后避光放置30 min，以無水乙醇為空白，于734 nm 處測定吸光度，以相同濃度的Trolox 和VC作陽性對照[21]。

式中：A0為6 mL ABTS+·溶液+0.2 mL 無水乙醇；Ai為6 mL ABTS+·溶液+0.2 mL 樣品溶液；Aj為0.2 mL 樣品溶液+6 mL 無水乙醇。

1.3 數據處理

采用Origin 9.0 和DesignExpert 8.0.6.1 進行作圖和響應面分析，每個實驗重復三次，計算平均值。

2 結果與分析

2.1 不同提取方法比較分析

采用水提取法、醇提取法、超聲-水提取法、超聲-醇提取法和超聲-酶輔助低共熔溶劑提取法提取桑葉總黃酮。

由圖1 可知，超聲-酶輔助低共熔溶劑提取法與其他的4 種方法相比，不僅能夠節約時間，也能提高總黃酮的提取量，因為DESs 中含有大量羥基和氨基，容易與黃酮形成氫鍵，可以增加黃酮在DESs 中的溶解度，同時在超聲-酶的輔助作用下，快速溢出，使總黃酮提取量增加，因此選擇超聲-酶輔助低共熔溶劑法提取桑葉中的總黃酮是快速、高效、環保的方法。

圖1 不同方法對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.1 Influence of different methods on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.2 低共熔溶劑（DES）的篩選

由圖2 可知，不同低共熔溶劑對桑葉總黃酮的提取量有一定的影響，DES-13（氯化膽堿/果糖/乙醇）提取的桑葉總黃酮量最高，原因可能是由于該組合的擴散力與桑葉總黃酮提取液的極性比較接近，有利于黃酮的溶解和擴散。因此，選擇氯化膽堿/果糖/乙醇作為提取桑葉中總黃酮的提取溶劑。

圖2 溶劑類型對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.2 Effect of solvent tpyes on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3 單因素實驗

2.3.1 DES 摩爾比對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖3 可知，當氯化膽堿/果糖/乙醇摩爾比為1:1:3 時的總黃酮提取量為最大值。總黃酮提取量隨著乙醇占比的增加而先增加后降低；總黃酮提取量隨著氯化膽堿或果糖占比的增加而降低；這可能與所形成的低共熔體系的黏度和表面張力有關，乙醇占比越大，體系的黏度越小，表面張力下降，桑葉總黃酮溶解與擴散的阻力減小，利于總黃酮的溶出，而隨著乙醇占比進一步增大，體系極性減小，增大了溶劑與溶質的極性差，使得總黃酮的溶解度下降；氯化膽堿或果糖占比不斷增加，體系的黏度增加，表面張力增強，桑葉總黃酮溶解與擴散的阻力增大，不利于總黃酮的溶出[22]。因此，選擇低共熔體系為氯化膽堿/果糖/乙醇摩爾比為1:1:3。

圖3 溶劑摩爾比對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.3 Effect of solvent molar ratio on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.2 DES 含水量對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖4 可知，當含水量為30%時，桑葉總黃酮提取量最大。當含水量從20%增加到30% 時，提取量隨著含水量的增大而增大，低共熔體系的黏度不斷減小，低共熔體系的極性不斷增大，增大接觸表面積，提高傳質速率，促進桑葉總黃酮的溶出，從而提高了桑葉總黃酮的提取量；但當含水量大于30%時，桑葉總黃酮提取量逐漸下降，這可能是含水量過多使得體系黏度降低，極性過大，引起分子之間的氫鍵斷裂，進而破壞體系的超分子結構，溶劑和總黃酮的相互作用減弱而導致桑葉總黃酮提取量的降低[20]。因此，選擇低共熔溶劑的含水量為25%、30%、35%進行響應面試驗。

圖4 含水量對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.4 Effect of moisture content on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.3 DES 液料比對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖5 可知，當液料比為40:1 mL/g 時，桑葉總黃酮提取量最大。當液料比從20:1 mL/g 增加到40:1 mL/g時，提取量隨著液料比的增大而增大，可能是因為液料比的增加使桑葉粉與體系的接觸面積增加，充分浸提，促使桑葉粉中的總黃酮不斷溢出[23]；液料比大于40:1 mL/g 時，桑葉總黃酮提取量隨液料比的增加呈現平穩趨勢，可能是因為桑葉粉溶解達到飽和[24]。因此，選擇低共熔溶劑的液料比為40:1 mL/g。

圖5 液料比對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.5 Effect of liquid to material ratio on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.4 超聲功率對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖6可知，當超聲功率為360 W 時，桑葉總黃酮提取量最大。當超聲功率從240 W 增加到360 W 時，提取量隨著超聲功率的增大而增大，可能是因為空化效應不斷增大導致，超聲功率不斷增大，體系中分子運動速度加快，對桑葉細胞壁的破碎作用增強，總黃酮物質溢出增多[25]；而超聲功率大于360 W 時，桑葉總黃酮提取量有所下降，可能是因為過高的超聲功率引起的空化作用加強，產生了過多的雜質且破壞了總黃酮的成分，導致桑葉總黃酮提取量降低[26]。因此，選擇超聲功率為360 W。

圖6 超聲功率對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.6 Effect of ultrasound power on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.5 超聲時間對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖7可知，當超聲時間為40 min 時，桑葉總黃酮提取量最大。當超聲時間從20 min 增加到40 min 時，提取量隨著超聲時間的增加而增大，可能是因為時間延長，超聲波能量在溶劑體系中形成的空化效應使得桑葉細胞壁不斷破損[27]，桑葉總黃酮不斷溶出，提取量就越高；而超聲時間大于40 min 時，桑葉總黃酮提取量有所下降，可能是因為過長的超聲時間導致溶劑體系中乙醇揮發、大量雜質溶出而使桑葉總黃酮溶出受限和部分黃酮降解[28]。因此，選擇超聲時間為30、40、50 min 進行響應面試驗。

圖7 超聲時間對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.7 Effect of ultrasound time on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.6 超聲溫度對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖8可知，當超聲溫度為40 ℃時，桑葉總黃酮提取量最大。當超聲溫度從30 ℃增加到40 ℃時，提取量隨著超聲溫度的增加而增大，可能是因為隨著溫度的升高，體系溶劑的黏度和表面張力降低[29]，黃酮與樣品基質之間的相互作用減少[30]，使得桑葉總黃酮不斷溶出；而超聲溫度大于40 ℃時，桑葉總黃酮提取量有所下降，可能是因為高溫使黃酮發生了降解，體系溶劑中乙醇揮發，體系溶劑的極性和氫鍵穩定性下降[31]。因此，選擇超聲溫度為40 ℃。

圖8 超聲溫度對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.8 Effect of ultrasound temperature on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.3.7 酶添加量對桑葉總黃酮提取量的影響 由圖9可知，當酶添加量為4%時，桑葉總黃酮提取量最大。總黃酮提取量隨著酶添加量的增加先增大后降低，可能是因為隨著酶添加量的增加，破壞了細胞壁使得桑葉總黃酮不斷溶出，但過量的酶又會使黃酮結構發生破壞，桑葉總黃酮提取量隨之下降。因此，選擇酶添加量為3%、4%、5%進行響應面試驗。

圖9 酶添加量對桑葉總黃酮提取量的影響Fig.9 Effect of enzyme dosage on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

2.4 響應面試驗

2.4.1 響應面試驗結果與方差分析 在單因素實驗基礎上，選擇含水量、酶添加量和超聲時間為考察變量，以桑葉總黃酮提取量為響應值，響應面試驗設計與結果見表3，方差分析見表4。

表3 Box-Behnken 試驗設計方案及結果Table 3 Design scheme and results Box-Behnken experiment

表4 回歸模型的方差分析Table 4 Analysis of variance for the regression model

根據軟件預測得到二元多次回歸方程：桑葉總黃酮提取量（mg/g）=46.62+0.098A+0.32B+0.38C+0.36AB-0.28AC-0.99BC-2.44A2-2.89B2-3.18C2

由表4 可知，該模型P<0.0001，極顯著，失擬項P=0.5455>0.05，不顯著，說明該模型擬合度較好。一次項B、C、二次項A2、B2、C2對桑葉總黃酮提取量的影響均為極顯著（P<0.01），交互項AB 和BC 對桑葉總黃酮提取量的影響極顯著（P<0.01），AC 對桑葉總黃酮提取量的影響為顯著（P<0.05），R2=0.9977，R2adj=0.9947，說明模型預測的桑葉總黃酮提取量與試驗的桑葉總黃酮提取量相關性好，擬合度較好，能很好地反映桑葉總黃酮提取量與它們三者之間的關系。根據F值，影響桑葉總黃酮提取量的各因素大小順序為超聲時間（C）>酶添加量（B）>含水量（A）。

2.4.2 響應面交互作用 3D 響應面曲線圖彎曲程度越大表明2 個因素交互作用越顯著，等高線形狀越扁表明因素對響應值的影響越顯著[32]。由圖10 可以看出AB、AC、BC 曲線有較好的傾斜度，等高線呈橢圓形且等高線較為密集，說明含水量、酶添加量和超聲時間，兩兩之間的交互作用對桑葉總黃酮提取量的影響顯著。

圖10 各因素交互作用對桑葉總黃酮提取量影響的響應面分析Fig.10 Response surface analysis of the influence of interaction of various factors on the extraction amount of total flavonoids from mulberry leaves

經模型分析預測得到桑葉總黃酮最佳提取工藝條件為含水量30.10%、酶添加量4.05%、超聲時間40.51 min，桑葉總黃酮提取量預測值為46.64 mg/g；為了方便操作，將提取條件調整為含水量30%、酶添加量4%、超聲時間40 min，在此條件下進行3 次重復實驗，測定桑葉總黃酮提取量為46.58 mg/g，真實值與預測值相符度高，說明該工藝可行。

2.5 桑葉總黃酮抗氧化能力測定

2.5.1 DPPH 自由基清除率 如圖11 所示，隨著質量濃度的增加，桑葉總黃酮、抗壞血酸和Trolox 的DPPH 自由基清除率先增加后趨于平穩。質量濃度小于0.05 mg/mL 時，同一質量濃度下，桑葉總黃酮清除能力明顯低于抗壞血酸和Trolox，質量濃度大于0.05 mg/mL 時，同一質量濃度下，桑葉總黃酮清除能力與抗壞血酸和Trolox 幾乎一致。當質量濃度從0.01 mg/mL 增加到0.08 mg/mL 時，桑葉總黃酮、抗壞血酸和Trolox 的清除率分別從25.25%、47.77%、83.18%增加到98.36%、98.57%、98.87%。結果表明桑葉總黃酮具有一定的清除DPPH 自由基的能力。

圖11 不同樣品清除 DPPH 自由基能力Fig.11 DPPH free radical scavenging ability of different samples

2.5.2 ABTS+自由基清除率 如圖12 所示，隨著質量濃度的增加，桑葉總黃酮的ABTS+自由基清除能力不斷增加，抗壞血酸和Trolox 的ABTS+自由基清除能力先增加后趨于平穩，桑葉總黃酮ABTS+自由基清除能力明顯低于抗壞血酸和Trolox。當質量濃度從0.02 mg/mL 增加到0.20 mg/mL 時，桑葉總黃酮、抗壞血酸和Trolox 的清除率分別從8.33%、16.53%、23.07%增加到72.12%、99.48%、99.67%。結果表明桑葉總黃酮具有一定的清除ABTS+自由基的能力。

圖12 不同樣品清除ABTS+自由基能力Fig.12 ABTS+ free radical scavenging ability of different samples

3 結論

本文建立了一種綠色、經濟、環保、高效、低廉的超聲-酶輔助低共熔溶劑提取桑葉總黃酮新型方法。通過比對水提取法、醇提取法、超聲水提取法、超聲醇提取法和超聲低共熔溶劑提取法，確定了超聲-酶輔助低共熔溶劑提取法效果最佳；篩選17 種二元或三元DES 溶劑對桑葉總黃酮提取量的影響，以DES-13 氯化膽堿/果糖/乙醇摩爾比為1:1:3 為最佳提取溶劑。結合單因素實驗和響應面試驗得到桑葉總黃酮的最佳提取工藝條件：含水量為30%、液料比為40 mL/g、超聲功率為360 W、超聲溫度為40 ℃、超聲時間為40 min、酶添加量4%條件下，桑葉總黃酮提取量為46.58 mg/g；當總黃酮質量濃度為0.08 mg/mL 時，桑葉提取物的DPPH 自由基清除率為98.36%，當總黃酮質量濃度為0.2 mg/mL 時，桑葉提取物的ABTS+自由基清除率為72.12%。這為后續桑葉總黃酮提取物的應用提供了數據支撐和理論基礎。