p62/SQSTM1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用

馬雪 周世輝

錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科（遼寧錦州 121001）

肺癌是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的癌癥死亡原因，占2018年所有癌癥相關(guān)死亡人數(shù)的18.4%，位列所有惡性腫瘤之首［1］。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌最常見(jiàn)的病理類型，占所有確診肺癌病例的80%以上［2］。NSCLC的總體預(yù)后較差，這主要是由于大部分NSCLC 患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)，而以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療也僅能將患者的5年生存率維持在15%左右［3］。因此，尋找新的NSCLC 治療靶點(diǎn)已成為目前研究的熱點(diǎn)。

自噬是一種細(xì)胞自我消化過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中，錯(cuò)誤折疊和聚集的蛋白質(zhì)以及受損的細(xì)胞器被稱為自噬小體的雙膜小泡所隔離。自噬小體被送到溶酶體形成自溶酶體后便會(huì)自行降解和回收。自噬既可以為癌細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，也可以引起癌細(xì)胞死亡在動(dòng)態(tài)平衡的條件下，自噬被認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展所必須的［4-6］。自噬相關(guān)蛋白p62/SQSTM1 在選擇性自噬中扮演著重要的角色，其能夠結(jié)合泛素化蛋白質(zhì)從而進(jìn)入自噬小體內(nèi)，降解功能異常的聚合蛋白和過(guò)剩的蛋白質(zhì)以發(fā)揮作用［11］。研究顯示，在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了p62 聚集，提示了高水平的p62 可能與腫瘤的形成密切相關(guān)［12-13］。值得注意的是，UMEMURA 等［14］報(bào)道了p62 可以通過(guò)激活Nrf2 介導(dǎo)的通路參與肺細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。然而，目前尚無(wú)研究全面系統(tǒng)地闡述p62 在NSCLC 中的具體作用。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)p62 在體內(nèi)外NSCLC 中的表達(dá)和生物學(xué)功能，探究p62 在NSCLC 細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，為p62 成為NSCLC 新的治療靶點(diǎn)提供完整可靠的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

在獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審查編號(hào)：KX2022037）和所有患者知情同意后開(kāi)展本研究。

1.1 主要試劑及耗材正常人支氣管上皮細(xì)胞（NHBE）和NSCLC 細(xì)胞系（NCI-H661、A549、NCIH1688、NCI-H1299 和NCI-H446）購(gòu)買自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所；DMEM 培養(yǎng)基、10%胎牛血清和胰蛋白酶-EDTA 購(gòu)買自美國(guó)Gibco 公司；1%青霉素/鏈霉素購(gòu)買自美國(guó)Hyclone 公司；TRIzol 細(xì)胞裂解液、RIPA 細(xì)胞裂解液、cDNA 逆轉(zhuǎn)錄酶和QuantiTect SYBR?Green PCR 試劑盒購(gòu)買自美國(guó)Sigma 公司；Matrigel 基質(zhì)膠和Transwell 小室購(gòu)買自美國(guó)Becton 公司；CCK-8 試劑盒和BCA 蛋白濃度定量試劑盒購(gòu)買自上海碧云天生物科技有限公司；ECL 增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)買自北京安諾倫生物科技有限公司；si-p62 和si-NC 購(gòu)買自廣州銳博生物科技有限公司；pcDNA3.1 空載載體（pcDNA-NC）和p62 過(guò)表達(dá)載體（pcDNA-p62）購(gòu)買自上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)公司；p62、Bcl-2、Bax、ATG5、Becline1、GAPDH 一抗和HBR 標(biāo)記的相應(yīng)二抗購(gòu)買自上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司；LipofectamineTM3000 及其他常見(jiàn)分子生物學(xué)相關(guān)試劑與耗材購(gòu)買自美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 臨床組織樣本和細(xì)胞培養(yǎng)選取本院經(jīng)病理組織學(xué)確診的和臨床診斷為NSCLC 的30 例NSCLC患者手術(shù)切除的肺癌組織和正常癌旁組織。正常癌旁組織（NHBE）和肺癌組織細(xì)胞（NCI-H661、A549、NCI-H1688、NCI-H1299 和NCI-H446）均用含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/mL鏈霉素的DMEM/F12 細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。加濕培養(yǎng)箱條件為95%相對(duì)濕度，5% CO2和37 ℃。對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞被收集起來(lái)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組將p62 表達(dá)水平最高的A549 細(xì)胞作為轉(zhuǎn)染對(duì)象。對(duì)數(shù)期A549 細(xì)胞按照4 × 105個(gè)/孔的密度接種在6 孔板中，并隨機(jī)分為Control 組、pcDNA-NC 組、pcDNA-p62 組、si-NC 組和si-p62組。當(dāng)A549細(xì)胞融合度達(dá)到80%以上時(shí)，利用脂質(zhì)體3000 轉(zhuǎn)染試劑將pcDNA-NC、pcDNAp62、si-NC 和si-p62 質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到pcDNA-NC 組細(xì)胞、pcDNA-p62 組細(xì)胞、si-NC 組細(xì)胞和si-p62 組細(xì)胞，Control 組細(xì)胞不做任何處理。轉(zhuǎn)染48 h 后，RT-qPCR 用于檢測(cè)CYTOR 表達(dá)以驗(yàn)證細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。

1.2.3 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)使用TRIzol 處理的轉(zhuǎn)染后的A549 細(xì)胞并提取總RNA。用cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用QuantiTect SYBR?Green PCR 試劑盒對(duì)目標(biāo)mRNA 進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件如下所示：在94℃下初始變性30 s，然后94 ℃ 6 s，60 ℃ 30 s，總共40 個(gè)循環(huán)。GAPDH 為參照基因，使用2-ΔΔCq方法計(jì)算p62 的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列如下所示：p62，正向5′-CACCAGACCATGCTTCAGTGAGA-3′和反向5′-GTTGCATGGCTGTTCACAGGA-3′和GAPDH，正向5′-CACCAGACCATGCTTCAGTGAGA-3′和反向5′-GTTGCATGGCTGTTCACAGGA-3′。

1.2.4 CCK-8實(shí)驗(yàn)將轉(zhuǎn)染后的各組A549細(xì)胞按5×103個(gè)/孔的密度接種于96 孔板中。這些細(xì)胞分別培養(yǎng)0、24、48 和72 h 后，再加入10 μL 的CCK-8溶液繼續(xù)混合培養(yǎng)2 h。用自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔細(xì)胞在450 nm 處的吸光度以反映細(xì)胞增殖能力。

1.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞的遷移能力。將轉(zhuǎn)染后的A549 細(xì)胞按照2 × 105個(gè)/孔的密度接種在6 孔板中，37 ℃下過(guò)夜培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞形成大約90%的致密融合單層時(shí)，用200 μL 的無(wú)菌移液槍槍頭穿過(guò)細(xì)胞表面形成一條寬度＜1 mm的垂直傷口。加入1 mL 的不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h。用倒置光學(xué)顯微鏡觀察0和48 h 后的細(xì)胞創(chuàng)面情況并拍照。

1.2.6 Transwell 實(shí)驗(yàn)通過(guò)Transwell 小室檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力。將轉(zhuǎn)染后的A549 細(xì)胞置于不含胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基中饑餓處理12 h 并將其調(diào)整為密度為2 × 105個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液備用。在已接種Matrigel 膠的上室中加入100 μL 的細(xì)胞懸液，下室中加入含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基500 μL。隨后將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h 后，用4%多聚甲醛固定上室細(xì)胞后再用0.1%的結(jié)晶紫染色。最后在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞侵襲情況并計(jì)算細(xì)胞侵襲數(shù)量。

1.2.7 Western blot 實(shí)驗(yàn)使用RIPA 細(xì)胞裂解液提取轉(zhuǎn)染后A549 細(xì)胞中的總蛋白然后通過(guò)BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。取30～40 μg的蛋白樣品，經(jīng)12% SDS-PAGE 分離后轉(zhuǎn)移到0.22 μm的聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜中，置于5%的脫脂奶粉中封閉過(guò)夜。隨后將PVDF 膜一抗p62（1 000；ab91526；Abcam）、Bcl-2（1∶1 000；ab32124；Abcam）、Bax（1∶1 000；ab32503；Abcam）、ATG5（1∶1 000；ab78073；Abcam）、Becline1（1∶1 000；ab207612；Abcam）和GAPDH（1∶1 000；ab32124；Abcam）在4 ℃下過(guò)夜。隨后，與HBR 標(biāo)記的二抗（1∶1 000；ab32124；Abcam）共孵育2 h。按照制造商說(shuō)明書(shū)，通過(guò)ECL 增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒對(duì)蛋白條帶進(jìn)行顯色并用Image J 軟件分析條帶灰度。以GAPDH 作為內(nèi)參分析目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)。

1.2.8 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)將10 只3～4 周齡的雄性裸鼠隨機(jī)分為sh-NC和sh-p62組，每組各5只。sh-NC 組和sh-p62 組小鼠分別在皮下注射由shRNA-NC 和shRNA-p62 慢病毒感染的A549 細(xì)胞（4 × 105個(gè)）。每隔7 d 觀察1 次并記錄裸鼠體質(zhì)量和腫瘤大小。5 周后采用乙醚處死小鼠，剝離腫瘤，腫瘤組織經(jīng)稱重后用甲醛固定，石蠟包埋用于后續(xù)研究。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本實(shí)驗(yàn)中所有實(shí)驗(yàn)都至少進(jìn)行了3 次。采用GraphPad Prism 8 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。單因素方差分析（ANOVA）用于多組數(shù)據(jù)間的比較，studentt檢驗(yàn)用于兩組數(shù)據(jù)間的比較。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p62 在NSCLC 組織和細(xì)胞中高表達(dá)癌旁組織p62 表達(dá)低于肺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組p62 表達(dá)情況Tab.1 Expression of p62 in two groups ±s

表1 兩組p62 表達(dá)情況Tab.1 Expression of p62 in two groups ±s

組別癌旁組織肺癌組織t值P值p62 1.01±0.08 2.81±0.17 52.474＜0.001

2.2 敲低和過(guò)表達(dá)p62 對(duì)A549 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響將siRNA 和pcDNA 轉(zhuǎn)染到A549 細(xì)胞中以下調(diào)和上調(diào)p62 的表達(dá)。p62 在si-NC、si-p62、pcDNA-NC、pcDNA-p62 組的表達(dá)水平分別為1.02±0.03、0.62±0.07、1.03±0.01、2.69±0.12。與si-NC 組細(xì)胞比較，si-p62 組細(xì)胞中的p62表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。與pcDNA-NC 組細(xì)胞比較，pcDNA-p62 組細(xì)胞中的p62 表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。接下來(lái)，分別通過(guò)CCK-8、劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p62 對(duì)A549 細(xì)胞增殖，遷移和侵襲能力的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2 和表2、表3。轉(zhuǎn)染si-p62后細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力顯著降低（P＜0.05），而轉(zhuǎn)染pcDNA-p62 后細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力顯著升高（P＜0.05）。

圖1 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞遷移的影響Fig.1 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 cells migration

圖2 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞侵襲的影響（結(jié)晶紫染色，× 200）Fig.2 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 cells invasion（Crystal violet staining，× 200）

表2 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)情況Tab.2 Effect of inhibition and promotion of p62 expression ±s

表2 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)情況Tab.2 Effect of inhibition and promotion of p62 expression ±s

組別si-NC組si-p62組t值P值組別pcDNA-NC組pcDNA-p62組t值P值p62 1.02±0.03 0.62±0.07 28.768＜0.001 p62 1.03±0.01 2.69±0.12 75.507＜0.001

表3 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響Tab.3 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 cells proliferation，migration and invasion ±s

表3 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響Tab.3 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 cells proliferation，migration and invasion ±s

組別侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)si-NC組si-p62組t值P值48 h 0.48±0.06 0.34±0.04 10.634＜0.001 72 h 0.86±0.03 0.67±0.04 20.813＜0.001 87.12±5.01 42.76±10.01 21.706＜0.001組別侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)pcDNA-NC組pcDNA-p62組t值P值OD值（450 nm）24 h 0.37±0.05 0.22±0.04 12.831＜0.001 OD值（450 nm）24 h 0.31±0.04 0.41±0.05 8.554＜0.001 48 h 0.55±0.02 0.71±0.06 13.856＜0.001 72 h 0.98±0.02 1.23±0.04 30.619＜0.001 85.22±4.54 124.29±8.21 22.810＜0.001

2.3 敲低和過(guò)表達(dá)p62 對(duì)A549 細(xì)胞自噬和凋亡蛋白的影響轉(zhuǎn)染si-p62 后，抗凋亡蛋白Bcl-2 自噬相關(guān)蛋白ATG5 和Becline1 表達(dá)水平明顯降低，而促凋亡蛋白Bax 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。而轉(zhuǎn)染pcDNA-p62 后，Bax 蛋白水平降低，而B(niǎo)cl-2、ATG5 和Becline1 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞自噬和凋亡蛋白的影響Tab.4 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 autophagy and apoptosis ±s

表4 抑制和促進(jìn)p62 表達(dá)對(duì)A549 細(xì)胞自噬和凋亡蛋白的影響Tab.4 Effect of inhibition and promotion of p62 expression on A549 autophagy and apoptosis ±s

組別si-NC組si-p62組t值P值組別pcDNA-NC組pcDNA-p62組t值P值Bcl-2蛋白0.58±0.01 0.31±0.04 35.867＜0.001 Bcl-2蛋白0.63±0.04 0.79±0.07 10.870＜0.001 Bax蛋白0.21±0.03 0.59±0.07 27.329＜0.001 Bax蛋白0.18±0.02 0.12±0.02 11.619＜0.001 ATG5蛋白0.68±0.02 0.48±0.02 38.730＜0.001 ATG5蛋白0.65±0.03 0.93±0.07 20.137＜0.001 Becline1蛋白0.58±0.07 0.37±0.03 15.103＜0.001 Becline1蛋白0.71±0.02 0.96±0.04 30.619＜0.001

2.4 敲低p62 抑制A549 細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)與sh-NC 組比較，sh-p62 組小鼠的移植瘤質(zhì)量明顯減小（P＜0.05），見(jiàn)表5。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，下調(diào)p62 表達(dá)后可以有效抑制A549 細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。

表5 抑制p62 對(duì)裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響Tab.5 Effect of inhibition of p62 expression on tumor growth in tumor-bearing mice ±s

表5 抑制p62 對(duì)裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響Tab.5 Effect of inhibition of p62 expression on tumor growth in tumor-bearing mice ±s

注：與sh-NC比較，*P＜0.05

組別Control組sh-NC組sh-p62組腫瘤質(zhì)量（g）2.41±0.14 2.50±0.12 1.12±0.08*抑制率（%）--55.20

3 討論

p62 作為一種自噬接頭蛋白，其在腫瘤進(jìn)展中的表達(dá)模式和具體作用尚不清楚。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)p62 在NSCLC 細(xì)胞和腫瘤組織中高表達(dá)。體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明下調(diào)p62 的表達(dá)能有效抑制A549 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和自噬，而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。同時(shí)，上調(diào)p62的表達(dá)則對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)具有相反的生物學(xué)效應(yīng)。此外，體內(nèi)移植瘤小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明沉默p62 能顯著抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。這些結(jié)果揭示了p62可能作為致癌基因通過(guò)調(diào)控細(xì)胞自噬促進(jìn)NSCLC 細(xì)胞生長(zhǎng)。

之前多項(xiàng)研究表明，多功能蛋白p62 在多種腫瘤細(xì)胞中異常高表達(dá)并發(fā)揮促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用［15-17］。例如，p62 在食管鱗狀細(xì)胞癌中異常高表達(dá)，且p62 敲除后有效抑制了腫瘤細(xì)胞的惡性行為［15］。在結(jié)腸癌細(xì)胞中，沉默p62 能通過(guò)抑制活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生和自噬，緩解腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［16］。值得注意的是，臨床研究已證實(shí)p62 在肺腺癌患者腫瘤組織樣本中高表達(dá)，且高表達(dá)p62 的肺腺癌患者預(yù)后相對(duì)較差［17］。此外，DURAN 等［18］研究報(bào)道了在p62 敲除的小鼠中，肺腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)速度受到明顯抑制，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)ROS 和凋亡水平顯著升高，肺腺癌的發(fā)生率明顯下降。在本研究中，p62 在NSCLC 組織和細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高，抑制p62 表達(dá)能有效抑制NSCLC 細(xì)胞的惡性行為，而過(guò)表達(dá)p62 表現(xiàn)出相反的效果，說(shuō)明p62 在NSCLC 細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的促癌作用。然而，p62 是通過(guò)什么途徑來(lái)影響NSCLC 細(xì)胞行為，目前尚不明確。綜合p62 的文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果，本研究進(jìn)一步從細(xì)胞自噬的角度對(duì)p62 在NSCLC 中的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了相應(yīng)的研究與探討。

自噬在癌癥的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，既可以作為腫瘤抑制途徑，也可以作為腫瘤促進(jìn)途徑［19-20］。研究顯示，在自噬缺陷的動(dòng)物模型中，抑制自噬可以通過(guò)調(diào)控染色體的不穩(wěn)定性來(lái)抑制腫瘤進(jìn)展［21］。因此，自噬可以通過(guò)保護(hù)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)防止腫瘤惡性轉(zhuǎn)化［22-23］。然而，自噬也可以通過(guò)維持暴露在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境壓力下的腫瘤細(xì)胞增殖，來(lái)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展［24-25］。p62 是自噬的主要參與者，也是mTORC1 和Keap1-Nrf2 等多條重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的樞紐。研究顯示，p62 蛋白泛素化后可以通過(guò)干擾UBA 結(jié)構(gòu)域的聚化而啟動(dòng)選擇性自噬。在選擇性自噬中，p62 不僅可以作為泛素化蛋白的接頭蛋白，也可以作為底物被自噬過(guò)程所降解［26］。在前列腺癌中，p62 可以通過(guò)誘導(dǎo)選擇性自噬受損促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲的能力［27］。最近的一項(xiàng)研究［28］發(fā)現(xiàn)，抑制p62 表達(dá)能夠調(diào)控PDCD10 的選擇性自噬降解而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)移能力。在NSCLC中，自噬可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡在NSCLC進(jìn)展中發(fā)揮促進(jìn)和抑制兩種作用。一般來(lái)說(shuō)，抑制自噬在多數(shù)情況下會(huì)限制NSCLC 腫瘤細(xì)胞維持穩(wěn)態(tài)的能力［29］。本研究表明，與大多數(shù)情況保持一致，沉默p62 能通過(guò)抑制自噬來(lái)緩解NSCLC 細(xì)胞的惡性生長(zhǎng)，而過(guò)表達(dá)p62 能通過(guò)上調(diào)自噬相關(guān)蛋白水平促進(jìn)NSCLC 細(xì)胞的生長(zhǎng)。

綜上所述，敲除p62 能通過(guò)抑制A549 細(xì)胞的保護(hù)性自噬來(lái)發(fā)揮抑癌作用，本研究結(jié)果將有助于更好地理解p62 在NSCLC 發(fā)生中的作用機(jī)制，為其成為肺癌診斷和治療的潛在靶點(diǎn)提供科學(xué)合理的依據(jù)。

【Author contributions】MA Xue performed the experiments and wrote the article.ZHOU Shihui performed the experiments.MA Xue and ZHOU Shihui revised the article.MA Xue designed the study and reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.

【Conflict of interest】The authors declare no conflict of interest.