2022年寧波市南美白對蝦主要病原流行病學(xué)調(diào)查

徐勝威 王雯瓊 葛明峰 付志明 江維潔

(1 寧波市海洋與漁業(yè)研究院,浙江寧波 315012; 2 農(nóng)銀人壽保險股份有限公司寧波分公司,浙江寧波 315000)

南美白對蝦(Litopenaeusvannamei)是世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦類之一,具有生長速度快、易養(yǎng)殖、產(chǎn)量高等優(yōu)勢[1-2]。南美白對蝦也是寧波市重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種。該蝦自1997年引入寧波,推廣后養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大,目前總養(yǎng)殖面積約0.67萬hm2。

近年來,寧波市南美白對蝦主養(yǎng)區(qū)病害頻發(fā),寧波市海洋與漁業(yè)研究院對本地區(qū)南美白對蝦養(yǎng)成期疫病監(jiān)測的結(jié)果表明,2020年和2021年蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)病原攜帶率分別為31.0%和26.9%,十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1)病原攜帶率分別為20.0%和10.9%[3]。監(jiān)測表明,2020—2021年,寧波地區(qū)養(yǎng)殖南美白對蝦中白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)和致急性肝胰腺壞死病副溶血弧菌(acute hepatopancreatic necrosis disease caused byVibrioparahaemolyticus,VpAHPND)感染率較低[3]。根據(jù)《2022我國水生動物重要疫病狀況分析》[4],這兩種病原的感染率在全國范圍的監(jiān)測中也呈下降趨勢,但其潛在風(fēng)險仍不能被輕視。

本研究對寧波地區(qū)養(yǎng)殖南美白對蝦及其周邊環(huán)境、生物中EHP、DIV1、WSSV和VpAHPND的感染情況進(jìn)行了流行性調(diào)查,以期了解重要病原的致病途徑和流行規(guī)律,為該地區(qū)南美白對蝦養(yǎng)殖過程中的病害預(yù)警提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗樣品

2022年3—11月,從寧波市鄞州區(qū)、奉化區(qū)等地的南美白對蝦養(yǎng)殖場及周邊環(huán)境采集試驗樣品,包括南美白對蝦和周邊環(huán)境的水樣、底泥和野生水生生物,共采集南美白對蝦樣本137批次、周邊環(huán)境生物樣本51批次、水樣94批次、底泥樣本41批次。采集的樣品通過采樣箱加冰塊保存,3 h內(nèi)帶回實驗室檢測。

1.2 試驗方法

1.2.1 DNA提取

南美白對蝦及野生蝦類采集鰓、肝胰腺、腸道、肌肉等組織;蟹類采集鰓、肌肉等組織;魚類采集肌肉、肝、腎等組織。利用OMEGA的E.Z.N.A.Tissue DNA Kit DNA提取試劑盒提取每批次樣品的總DNA,于-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｋ畼与x心后,用濾膜抽濾,利用E.Z.N.A.Water DNA Kit試劑盒提取水樣DNA,于-20 ℃保存?zhèn)溆谩５啄鄻悠窞槌靥帘韺映练e物,利用E.Z.N.A.Soil DNA Kit試劑盒提取底泥的DNA,于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 病原檢測

采用套式PCR法檢測,引物序列及目的條帶大小見表1[5-8]。

表1 4種南美白對蝦病原引物

2 結(jié)果和分析

2.1 南美白對蝦的病原檢測結(jié)果

2022年3—11月,共采集南美白對蝦樣本137批次。在整個養(yǎng)殖過程中WSSV未檢出,VpAHPND陽性率最高,為14.6%,其次是EHP和DIV1,陽性率分別為10.2%和2.9%。由表2可見,3—6月份相關(guān)病原均未檢出;9、10月份,EHP陽性率達(dá)到高峰,分別為36.8%和30.8%,11月份則下降至25.0%;VpAHPND在7—11月有較強(qiáng)的流行特征,其中7月和10月份VpAHPND陽性率處在較高水平,分別為33.3%和30.8%;DIV1僅在9月和11月份檢出,陽性率分別為15.8%和12.5%,其余月份未檢出。

表2 養(yǎng)殖南美白對蝦的病原檢測結(jié)果

2.2 不同養(yǎng)殖模式下南美白對蝦的病原檢測結(jié)果

不同養(yǎng)殖模式下的南美白對蝦病原檢測結(jié)果見表3。在大棚、小棚、土塘、帆布池4種養(yǎng)殖模式中,土塘養(yǎng)殖模式下對蝦的病原檢出率最高,為61.3%,感染的病原以EHP和VpAHPND為主,其中7批次為混合感染,即同時感染兩種以上病原。小棚模式和帆布池養(yǎng)殖模式的病原檢出率分別為26.3%和22.2%,感染的病原以VpAHPND為主。從大棚模式養(yǎng)殖南美白對蝦中采集的60批次樣本均未檢出相關(guān)病原。

表3 不同養(yǎng)殖模式下南美白對蝦的病原檢測結(jié)果

2.3 水樣的病原檢測結(jié)果

2022年3—11月,共采集養(yǎng)殖水樣、進(jìn)水溝渠水樣共94批次,檢測結(jié)果見表4。由表4可見,DIV1陽性率在9月份后呈上升趨勢;8—11月,在水樣中持續(xù)檢出EHP,EHP陽性率居高不下;VpAHPND僅在8月和10月份的水樣中被檢出;WSSV僅在11月份的1個批次中被檢出。不同來源水樣的病原檢測結(jié)果見表5。由表5可見,進(jìn)水溝渠水樣和養(yǎng)殖池塘水樣中均能檢出病原,養(yǎng)殖池塘水體中EHP、VpANPND和DIV1的檢出率比進(jìn)水溝渠水樣要高。

表4 不同月份水樣的病原檢測結(jié)果

表5 不同來源水樣的病原檢測結(jié)果

2.4 底泥樣品中的病原檢測結(jié)果

2022年3—11月,共采集底泥樣品41批次,所有批次病原檢測均為陰性(見表6)。

表6 底泥樣品中的病原檢測結(jié)果

2.5 周邊環(huán)境生物樣品的病原檢測結(jié)果

2022年3—10月份,共采集野生蝦類樣品9批次,主要為脊尾白蝦(Exopalaemoncarinicauda);采集野生蟹類樣品21批次,主要為天津厚蟹(Helicetientsinensis)、四齒大額蟹(Metopograpsusquadridentatus)、隆背張口蟹(Chasmagnathusconvexus)、絨螯近方蟹(Hermigrapsuspenicillatus)、字紋弓蟹(Varunalitterata)等;采集野生魚類19批次,主要為梭魚(Sphyraenus)、烏塘鱧(Bostrychussinensis)、北方須鰍(Barbatulanuda)、七星鱸(Lateolabraxjaponicus)等;其他生物種類2批次,分別為珠帶擬蟹守螺(Cerithideacingulata)和海蟑螂(Ligiaexotica)各1批次。所有采集的周邊環(huán)境生物樣品均檢測WSSV、EHP、DIV1、VpANPND4種病原,結(jié)果僅在1批次的脊尾白蝦中檢出EHP陽性(見表7)。

表7 周邊環(huán)境生物樣品的病原檢測結(jié)果

3 討論

本次調(diào)查的寧波地區(qū)南美白對蝦養(yǎng)殖場中,部分養(yǎng)殖場1年放養(yǎng)2茬蝦,上半年一般在2月份清塘消毒,3月份放養(yǎng)蝦苗,起捕收獲主要在6月前后;下半年一般7月份進(jìn)苗放養(yǎng),10月底起捕收蝦。調(diào)查結(jié)果表明,上半年養(yǎng)殖情況要好于下半年,上半年放養(yǎng)的南美白對蝦中均未檢測到相關(guān)病原,而下半年放養(yǎng)的南美白對蝦,到了養(yǎng)殖中后期,養(yǎng)殖風(fēng)險明顯增高。一般從7月份開始,各類病原陸續(xù)被檢出,如EHP、VpAHPND、DIV1等,這幾種病原在夏季感染率均較高,這與相關(guān)報道[9-11]的結(jié)果相似,究其原因,可能與下半年外海水質(zhì)較差有關(guān)。另一方面,受長時間高溫和夏季臺風(fēng)等的影響,水體環(huán)境突變,對蝦產(chǎn)生應(yīng)激,免疫力低下,更容易感染病原。張文革[12]的研究也表明,應(yīng)激期間南美白對蝦的抗病能力急劇下降,很容易受到細(xì)菌和病毒等致病因子侵襲,從而感染細(xì)菌性、病毒性疾病。因此,7月份后應(yīng)加大南美白對蝦主要流行病原的檢測,同時注意在氣溫驟變和臺風(fēng)、暴雨等極端天氣前后應(yīng)及時調(diào)控養(yǎng)殖水體,尤其是土池模式養(yǎng)殖的對蝦,受環(huán)境因素的影響較大,養(yǎng)殖用水一般也未經(jīng)過濾、沉淀、消毒等措施,在這樣的條件下池蝦容易受到外來病原的感染。

調(diào)查發(fā)現(xiàn),水體中病原的檢出率較高,且其檢出率和檢出月份與蝦樣的病原密切相關(guān)。如對蝦樣品中EHP檢出率較高的8—11月,水體中的EHP檢出率也同樣較高,可見養(yǎng)殖水體是病原的主要傳播媒介[13]。丁慧昕等[14]報道,EHP感染對蝦后,在蝦的肝胰腺管細(xì)胞內(nèi)形成孢原質(zhì),成熟后又通過糞便排出體外,在水體環(huán)境中形成孢子體,散布于水體或附著于藻類、碎屑、飼料表面以及池壁和底泥環(huán)境中,孢子體可在養(yǎng)殖環(huán)境中累積,從而導(dǎo)致疫情的傳播。繩秀珍等[15]也報道,DIV1在淡水、半咸水及海水中皆可存活。同時,本研究通過檢測進(jìn)水溝渠水樣和養(yǎng)殖水樣發(fā)現(xiàn),病原雖在二者中均能檢出,但養(yǎng)殖水樣中病原的檢出率遠(yuǎn)高于進(jìn)水溝渠水樣,蝦樣中EHP、VpAHPND、DIV1的高攜帶率與養(yǎng)殖水樣中這3種病原的高攜帶率可能存在密切相關(guān)性。因此,在南美白對蝦養(yǎng)殖過程中,養(yǎng)殖水體的調(diào)控尤為重要。本研究所有底泥樣本中均未檢出病原,推測底泥不是病原的主要附著體,病原在底泥中無法有效繁殖、生存,或者其含量低于檢測限,但目前尚不能完全排除病原的存在。

本研究在周邊環(huán)境生物中有1批次的脊尾白蝦中檢出EHP,而其他野生動物中均未檢出相關(guān)病原。這與胡吉卉等[16]報道的凡納濱對蝦、脊尾白蝦和斑節(jié)對蝦等主要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖蝦類都是肝腸胞蟲主要感染對象的結(jié)論一致。王維娜等[17]認(rèn)為,感染對蝦的EHP,其中間宿主主要是各種魚類。陳形[18]研究發(fā)現(xiàn),三疣梭子蟹是DIV1的一種易感宿主,而天津厚蟹不是DIV1的易感宿主。根據(jù)相關(guān)研究推斷,未檢出病原的野生動物并不能排除其攜帶相關(guān)病原或是病原傳播過程中宿主的可能性,因此,不能忽視周邊環(huán)境生物對病原傳播的影響,在養(yǎng)殖過程中應(yīng)做好周邊生物環(huán)境隔離工作。

4 結(jié)論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn),蝦類疾病主要病原蝦肝腸胞蟲(EHP)、十足目虹彩病毒1(DIV1)、白斑綜合征病毒(WSSV)和致急性肝胰腺壞死病副溶血弧菌(VpAHPND)在夏季有較強(qiáng)的流行趨勢,需針對性地加強(qiáng)防控。此外,大棚養(yǎng)殖模式的抗風(fēng)險能力要高于其他養(yǎng)殖模式,在這種模式下,養(yǎng)殖水體較為穩(wěn)定,受外界因素的影響較小。病原在底泥和周邊環(huán)境生物中的檢出率較低,而在養(yǎng)殖水體中較高,推測養(yǎng)殖水體可能在南美白對蝦感染病原的過程中起著重要的傳播媒介作用。因此,養(yǎng)殖過程中加強(qiáng)水體調(diào)控十分重要。