老年結腸癌患者癌組織中COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表達及與病理特征的關系

鄭雷 于宏偉 金丹雯 錢立勇

(舟山醫院 1病理診斷中心,浙江 舟山 316002;2胃腸外科)

結腸癌是常見的一種消化系統惡性腫瘤,好發部位為直腸與乙狀結腸交界處〔1〕。據統計表明,我國結腸癌隨著人們生活方式及飲食結構等變化,其發病率不斷增長,且預后不佳,不僅影響患者生存質量,并威脅患者生命健康〔2〕。結腸癌起病較為隱匿,且在早期癥狀缺乏典型,導致大部分患者就診時病情處于中晚期,目前針對結腸癌主要采用化學治療、放射治療及手術等治療,但5年生存率仍不十分理想〔3,4〕。因此,尋找積極有效的結腸癌生物學指標,對早發現、早治療結腸癌具有重要意義。環氧化酶(COX)-2具有過氧化氫酶和環氧化酶活性,參與體內炎癥反應,且可刺激DNA、RNA的合成及細胞增殖,促進細胞生長等作用,與腫瘤發生、發展密切相關〔5〕。叉頭盒蛋白(FOX)A1屬Forkhead轉錄因子家族,具有促進腫瘤細胞增殖,調節細胞生長周期的作用,且在多種惡性腫瘤中高表達〔6〕。縫隙連接蛋白(Cx)43是構成細胞間接的主要成分,廣泛參與調節腫瘤細胞增殖、分化及侵襲轉移〔7〕。本研究旨在探討老年結腸癌患者癌組織中COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表達及與病理特征關系。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇舟山醫院于2020年1月至2022年12月結腸癌根治術切除標本及癌旁組織157例,其中男97例,女60例;年齡65～80歲,平均(72.31±4.25)歲。納入標準:(1)依據《結腸癌規范化診療指南(試行)》〔8〕關于結腸癌標準,并經術后病理證實為結腸癌;(2)病理資料和臨床資料完整;(3)年齡65～80歲,性別不限。排除標準:(1)伴其他部位惡性腫瘤者;(2)術前已接受放療、化療者;(3)手術禁忌者;(4)免疫系統功能障礙;(5)合并重要臟器疾病者。

1.2主要試劑 COX-2、FOXA1、Cx43鼠抗人單克隆抗體(美國Santa Cruz公司),免疫組織化學SP試劑盒(北京中杉金橋生物科技有限公司)。

1.3免疫組化法測定COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表達 收集患者癌組織和癌旁組織標本,以4%甲醛溶液固定,脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋,切片,微波修復,血清封閉。封閉30 min后加入COX-2、FOXA1、Cx43鼠抗人單克隆抗體,放置4 ℃孵育過夜;再以磷酸鹽緩沖液沖洗,顯色,蘇木素復染,脫水,透明,封片。采用免疫組織化學SP試劑盒測定COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表達。

1.4結果判定 依據細胞炎性細胞所占比例及染色程度進行半定量評分,其中陽性細胞所占比例≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,76%～100%為4分;細胞染色程度:以無細胞無染色為0分,以細胞淡黃色為1分,以細胞黃色為2分,以細胞棕黃色為3分。將陽性細胞所占比例與細胞染色程度所得分數相乘,最終得分以0分為-,1～4分為+,5～8分為,9～12分為,以-表示為陰性,而其中+、、表示陽性。

1.5統計學方法 采用SPSS26.0軟件行t檢驗、χ2檢驗。

2 結 果

2.1癌組織與癌旁組織COX-2、FOXA1、Cx43蛋白表達陽性率比較 癌組織COX-2、FOXA1蛋白陽性率高于癌旁組織,Cx43蛋白陽性率低于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 癌組織與癌旁組織COX-2、FOXA1、Cx43蛋白表達陽性率比較〔n(%),n=157〕

圖1 癌組織及癌旁組織COX-2、FOXA1、Cx43蛋白表達(免疫組織化學染色,×200)

2.2癌組織不同病理特征COX-2、FOXA1、Cx43蛋白表達陽性率比較 不同性別、腫瘤直徑和分化程度COX-2、FOXA1、Cx43蛋白陽性率比較無顯著差異(P>0.05);不同TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度COX-2、FOXA1、Cx43蛋白陽性率差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

3 討 論

流行病學調查顯示,我國結腸癌發病率隨著人們生活方式和飲食結構的改變呈增長趨勢,導致人們生命安全受到嚴重威脅〔9〕。目前,關于結腸癌具體發病機制尚未完全闡明,認為其發病可能與生活習慣、腸道微生態、遺傳及生活環境等多種因素有關〔10,11〕。通常情況下,結腸癌發病經歷腸化生、不典型增生、腺癌、原癌、進展期癌等階段,且在不同階段出現的特異性分子事件也不同。故而,對結腸癌發生、發展的分子機制深入分析有利于預防和診治疾病。現階段,臨床上主要采用手術切除及放化療治療結腸癌,雖醫療技術不斷進步,但結腸癌患病率和死亡率仍不容樂觀。臨床調查顯示,我國晚期結腸癌患者生存率5年僅8%左右,早發現和早治療是改善預后的有效手段〔12〕。COX-2作為雙功能酶,具有過氧化氫酶和環氧化酶活性,參與體內炎癥反應。COX-2能夠通過旁分泌、自分泌和內分泌的方式作用于靶器官,從而促進有絲分裂,刺激RNA、DNA的合成和細胞增殖,促進細胞生長及介導的各信號傳導〔13〕。COX-2為細胞惡性轉化的前體,其表達與腫瘤侵襲、轉移、大小及浸潤深度關系緊密〔14,15〕。

研究表明,COX-2在多種惡性腫瘤中異常表達。FOX蛋白家族可按照叉頭結構域的氨基酸序列分為17個亞類,該蛋白家族與細胞周期調控、細胞增殖及胚胎發育等多個生理過程相關,調控該蛋白族的基因出現變異而造成該蛋白族異常表達,從而誘發代謝性疾病、發育性疾病甚至腫瘤。FOXA1是FOX蛋白家族中重要一員,參與對細胞核類固醇受體的信號傳導通路調控,并可控制雄性激素或雌性激素的受體激活。FOXA1在多種組織及器官中能夠檢測到,如腎臟、肝臟、膀胱、消化道及乳腺等,且直接參與腫瘤發生發展、細胞增殖分化過程〔16～18〕。復發和轉移是影響結腸癌預后的一項主要因素,腫瘤細胞侵襲活力增強、細胞間連接改變在結腸癌復發和轉移過程中具有重要意義。Cx是構成細胞間連接的主要成分,且在多種惡性腫瘤中表達缺失,從而造成細胞間連接被破壞,促進腫瘤細胞生長和侵襲。Cx43參與細胞間連接的構成,其表達下調會導致細胞間連接減弱,從而使細胞易脫離固有位置并向遠處轉移和浸潤〔19,20〕。

綜上,老年結腸癌患者癌組織中COX-2、FOXA1蛋白高表達,而Cx43蛋白低表達且與TNM分期、淋巴結轉移和浸潤深度密切相關。