血清腎胺酶、尿調(diào)節(jié)素、可溶性尿激酶受體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病腎損傷早期診斷的價(jià)值分析

孟莉，舒麗紅，周振科，范杰

作者單位：成都市第七人民醫(yī)院，a急診科，b檢驗(yàn)科，c放射科，四川 成都610000

糖尿病是臨床中常見的一種內(nèi)分泌性疾病，可對(duì)病人的日常生活造成嚴(yán)重影響［1］。糖尿病病程時(shí)間長(zhǎng)，其并發(fā)癥也較多，腎損傷是其中較為嚴(yán)重的一種，糖尿病腎病早期無明顯特征，發(fā)病較為隱匿，且具有不可逆性，病人若未得到及時(shí)的治療可能會(huì)引發(fā)慢性腎衰竭，嚴(yán)重威脅人們的生命健康和生活質(zhì)量［2］。尿微量白蛋白與肌酐（creatinine，Cr）比值用于診斷糖尿病早期腎損傷靈敏度高，且較為穩(wěn)定，但尿微量白蛋白與Cr 比值診斷腎損傷需3～6 個(gè)月內(nèi)至少2次檢測(cè)結(jié)果異常，時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，臨床用于診斷早期腎損傷有一定局限性［3］。因此，繼續(xù)尋找靈敏度、特異度高的生物標(biāo)志物對(duì)糖尿病腎損傷的早期準(zhǔn)確診斷和干預(yù)治療尤為重要。

腎胺酶（RNLS）基因位于10q23.33上，主要由腎臟合成產(chǎn)生，其參與降解血液中的兒茶酚胺，在血流動(dòng)力改善方面具有重要作用，除了發(fā)揮分解酶的作用，對(duì)細(xì)胞和組織也有保護(hù)作用［4］。尿調(diào)節(jié)素（UMOD）是在尿液中豐富存在的Tamm-Horsfall 蛋白，以有效的抗菌、抗炎作用而被人熟知［5］。研究表明，UMOD在慢性腎病中具有重要作用，如緩解腎臟損傷、降低血肌酐水平等［6］?？扇苄阅蚣っ感屠w溶酶原激活物受體（suPAR）是尿激酶型纖溶酶原激活物受體（uPAR）的可溶形式，表達(dá)于免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞表面，可反映機(jī)體的炎癥狀況，一般穩(wěn)定存在，當(dāng)身體出現(xiàn)炎癥刺激時(shí)，suPAR分離于細(xì)胞表面，在血液中表達(dá)水平升高［7］。suPAR 參與多種疾病的發(fā)展，包括膿毒癥、呼吸系統(tǒng)疾病、腫瘤及心血管疾病等［8］。三項(xiàng)單一檢測(cè)指標(biāo)對(duì)糖尿病腎損傷疾病有一定的局限性，需要聯(lián)合多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)，因此，本研究以糖尿病腎損傷病人和糖尿病病人為研究對(duì)象，探究血清RNLS、UMOD、suPAR聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病腎損傷早期診斷的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020 年3 月至2021 年3 月成都市第七人民醫(yī)院收治的61 例糖尿病腎損傷病人為糖尿病腎損傷組，其中男32 例，女29 例，年齡范圍36～72 歲，年齡（51.58±6.47）歲。選取66 例單純2型糖尿病病人為單純糖尿病組，男34 例，女32 例，年齡范圍35～71歲，年齡（50.62±6.15）歲。另選取同期健康體檢者60 例為對(duì)照組，男31 例，女29 例，年齡范圍35～72歲，年齡（51.74±6.52）歲。根據(jù)尿白蛋白排泄率（UAER）將糖尿病腎損傷組病人分為兩亞組，UAER 20～200 μg∕min 納入早期糖尿病腎病組（29 例），UAER＞200 μg∕min 納入臨床期糖尿病腎病組（32 例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①糖尿病或糖尿病腎損傷病人均符合《糖尿病腎病防治專家共識(shí)（2014 年版）》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］；②臨床資料完整者；③近3 個(gè)月未服用過可能影響腎功能的腎毒性藥物者；④積極配合治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①由其他急慢性腎病、心肺疾病等引起的腎?。虎诨加行摹⒏蔚葒?yán)重器官疾病；③合并嚴(yán)重感染性疾病、惡性腫瘤者；④妊娠期病人；⑤急性心腦血管疾病者；⑥血糖控制欠佳者。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 主要試劑和儀器酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒均購自上海通蔚生物科技有限公司；低溫高速離心機(jī)Nano Drop 2000 購自美國(guó)Thermo Scientific公司；-80 ℃超低溫冰箱購自美國(guó)Thermo公司，移液槍購自德國(guó)Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品采集 所有病人入組次日清晨采集靜脈血5 mL，對(duì)照組于健康體檢時(shí)采集靜脈血5 mL，在3 000 r∕min條件下離心10 min，取上清液于-80 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 檢測(cè)方法 采用尿素酶法檢測(cè)血清尿素（UREA），氧化酶法檢測(cè)Cr、尿酸（uric acid，UA）；采用ELISA 檢測(cè)血清RNLS、UMOD、suPAR 的水平，嚴(yán)格參照ELISA試劑盒試驗(yàn)步驟進(jìn)行。

1.3.3 一般臨床資料收集 記錄受試者性別、年齡、身高、體質(zhì)量數(shù)據(jù)，并計(jì)算身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）；全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定所有受試者三酰甘油、總膽固醇、糖化血紅蛋白、24 h尿蛋白、空腹血糖、估算腎小球?yàn)V過率（eGFR）等臨床指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0 分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；以±s描述計(jì)量資料（均符合正態(tài)分布），兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；Pearson 相關(guān)性分析RNLS、UMOD、suPAR 與腎功能指標(biāo)及臨床資料的關(guān)系。受試者操作特征（ROC）曲線分析血清RNLS、UMOD、suPAR 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病病人發(fā)生腎損傷的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般臨床指標(biāo)比較三組性別、年齡、BMI 比較，以及單純糖尿病組與對(duì)照組24 h 尿蛋白比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；糖尿病腎損傷組、單純糖尿病組三酰甘油、總膽固醇、空腹血糖及糖化血紅蛋白均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），eGFR顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；糖尿病腎損傷組三酰甘油、總膽固醇、空腹血糖、糖化血紅蛋白及糖尿病病程均顯著高于單純糖尿病組（P＜0.05），eGFR顯著低于單純糖尿病組（P＜0.05）；糖尿病腎損傷組24 h 尿蛋白顯著高于單純糖尿病組和對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 糖尿病腎損傷61例、單純2型糖尿病66例和健康體檢者60例一般臨床指標(biāo)對(duì)比

2.2 三組研究對(duì)象血清腎功能指標(biāo)水平比較與對(duì)照組相比，單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清UREA、Cr、UA 水平均顯著升高（P＜0.05），糖尿病腎損傷組病人血清UREA、Cr、UA 水平高于單純糖尿病組（P＜0.05）。見表2。

表2 糖尿病腎損傷61例、單純2型糖尿病66例和健康體檢者60例研究對(duì)象血清UREA、Cr、UA水平比較∕ ± s

表2 糖尿病腎損傷61例、單純2型糖尿病66例和健康體檢者60例研究對(duì)象血清UREA、Cr、UA水平比較∕ ± s

注：UREA為尿素，Cr為肌酐，UA為尿酸。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與單純糖尿病組相比，P＜0.05。

組別對(duì)照組單純糖尿病組糖尿病腎損傷組F值P值例數(shù)60 UA∕（μmol∕L）264.15±35.19 329.53±42.38①398.46±52.35①②141.77＜0.001 66 61 UREA∕（mmol∕L）4.61±0.43 5.48±0.79①8.13±1.64①②177.09＜0.001 Cr∕（μmol∕L）71.56±14.72 86.74±17.25①126.48±29.36①②107.44＜0.001

2.3 三組研究對(duì)象血清RNLS、UMOD、suPAR 水平比較與對(duì)照組相比，單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清suPAR 水平顯著升高（P＜0.05），糖尿病腎損傷組高于單純糖尿病組（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清RNLS、UMOD 水平顯著降低（P＜0.05），糖尿病腎損傷組低于單純糖尿病組（P＜0.05）。見表3。

表3 糖尿病腎損傷61例、單純2型糖尿病66例和健康體檢者60例血清RNLS、UMOD、suPAR水平比較∕ ± s

表3 糖尿病腎損傷61例、單純2型糖尿病66例和健康體檢者60例血清RNLS、UMOD、suPAR水平比較∕ ± s

注：RNLS 為腎胺酶，UMOD 為尿調(diào)節(jié)素，suPAR 為可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體。①與對(duì)照組相比，P＜0.05。②與單純糖尿病組相比，P＜0.05。

suPAR∕（ng∕L）34.15±8.26 66.48±17.13①133.56±42.68①②217.11＜0.001組別對(duì)照組單純糖尿病組糖尿病腎損傷組F值P值例數(shù)60 66 61 RNLS∕（mg∕L）42.81±13.24 35.47±9.29①28.62±7.61①②28.85＜0.001 UMOD∕（g∕L）139.82±32.84 119.45±28.65①64.28±16.82①②127.74＜0.001

2.4 不同尿白蛋白量病人血清RNLS、UMOD、su-PAR 水平比較臨床期糖尿病腎病組病人血清RNLS、UMOD水平較早期糖尿病腎病組顯著降低（P＜0.05），suPAR水平顯著升高（P＜0.05）。見表4。

表4 糖尿病腎損傷61例中不同尿白蛋白量病人的血清RNLS、UMOD、suPAR水平比較∕ ± s

表4 糖尿病腎損傷61例中不同尿白蛋白量病人的血清RNLS、UMOD、suPAR水平比較∕ ± s

注：RNLS 為腎胺酶，UMOD 為尿調(diào)節(jié)素，suPAR 為可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體。

例數(shù)29 RNLS∕（mg∕L）31.18±8.34 26.28±6.69 2.54 0.014 suPAR∕（ng∕L）113.27±36.81 151.96±48.03 3.50 0.001組別早期糖尿病腎病組臨床期糖尿病腎病組t值P值32 UMOD∕（g∕L）78.65±19.49 51.26±14.41 6.28＜0.001

2.5 Pearson相關(guān)性分析RNLS、UMOD、suPAR 與腎功能指標(biāo)及臨床資料的關(guān)系Pearson 相關(guān)性分析顯示，RNLS、UMOD 與UREA、Cr、UA、三酰甘油、總膽固醇、空腹血糖、糖化血紅蛋白、糖尿病病程及24 h尿蛋白均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與eGFR呈正相關(guān)（P＜0.05）；suPAR 與UREA、Cr、UA、三酰甘油、總膽固醇、空腹血糖、糖化血紅蛋白、糖尿病病程及24 h尿蛋白均呈正相關(guān)（P＜0.05），與eGFR 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表5 尿病腎損傷61例RNLS、UMOD、suPAR與臨床資料的相關(guān)性分析

2.6 ROC 曲線分析血清RNLS、UMOD、suPAR 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病病人發(fā)生腎損傷的診斷價(jià)值ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清RNLS、UMOD、suPAR 三項(xiàng)聯(lián)合的曲線下面積（area under curve，AUC）0.88顯著高于RNLS、UMOD 單項(xiàng)檢測(cè)的AUC（0.81、0.83）（Z=3.55、2.37，P＜0.05），與suPAR 檢測(cè)的AUC 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表6。

表6 ROC曲線分析血清RNLS、UMOD、suPAR聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病病人發(fā)生腎損傷的診斷價(jià)值

3 討論

糖尿病腎損傷是糖尿病嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，主要表現(xiàn)為腎小球硬化、基底膜增厚等［10］。其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，具體的機(jī)制尚未明晰。該疾病早期臨床特征不明顯，只是尿微量蛋白相關(guān)指標(biāo)出現(xiàn)上升趨勢(shì)，容易造成漏診，一旦錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，將對(duì)病人的生命安全造成嚴(yán)重的威脅。因此，對(duì)糖尿病腎損傷病人進(jìn)行早期診斷以及進(jìn)行干預(yù)治療，對(duì)病人的病程控制、延長(zhǎng)生存時(shí)間有重要意義。

RNLS 作為一種單胺氧化酶在人類腎臟中表達(dá)較多，其在腎臟及心血管疾病中發(fā)揮保護(hù)作用且研究較為廣泛［11-13］。默瑞興等［14］研究發(fā)現(xiàn)，RNLS 在健康對(duì)照組、慢性心力衰竭組、2 型心腎綜合征組病人血清中的表達(dá)水平依次降低，且RNLS對(duì)2型心腎綜合征的早期診斷和預(yù)后有一定的價(jià)值。趙婷等［15］通過對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，腎胺酶對(duì)高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷具有減緩作用。Yin 等［16］研究表明，b∕db 小鼠腎臟中的RNLS 較健康對(duì)照或db∕m 小鼠相比下調(diào)，過表達(dá)的RNLS 可以顯著改善db∕db 小鼠的腎損傷。在本研究中，RNLS 在健康對(duì)照組、單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清中的水平依次降低，與默瑞興等［14］研究類似，且臨床期糖尿病腎病組病人血清RNLS 水平較早期糖尿病腎病組顯著降低，提示RNLS 可能參與糖尿病腎損傷的發(fā)生發(fā)展。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清RNLS的AUC 為0.81、靈敏度為82.00%、特異度為72.70%，提示血清RNLS 對(duì)糖尿病病人發(fā)生腎損傷有一定的診斷價(jià)值。

UMOD是腎小管髓袢升支和遠(yuǎn)端腎小管的細(xì)胞合成的蛋白質(zhì)，是健康人體尿液中排泄最為豐富的蛋白［17］。有研究指出UMOD 水平與腎小管運(yùn)輸物質(zhì)、eGFR 以及腎臟長(zhǎng)度和體積呈正相關(guān)，UMOD 是反映腎小管功能的重要因子［18］。艾文婷等［19］研究發(fā)現(xiàn)，血清UMOD 隨著原發(fā)性高血壓病病人早期腎損傷的嚴(yán)重程度增加而降低，且表明UMOD 與主要腎功能指標(biāo)存在一定的相關(guān)性。趙麗娟［20］發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓病人發(fā)生急性腎損傷病人較未發(fā)生急性腎損傷病人血清UMOD 表達(dá)水平明顯下降。結(jié)合本研究，與對(duì)照組相比，單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清UMOD 水平顯著降低，糖尿病腎損傷組低于單純糖尿病組，與艾文婷等［19］、趙麗娟［20］研究相似，且臨床期糖尿病腎病組病人血清UMOD水平較早期糖尿病腎病組顯著降低，提示UMOD 參與調(diào)控腎損傷的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清UMOD 診斷糖尿病病人發(fā)生腎損傷的曲線下面積為0.83，截?cái)嘀禐?5.94 g∕L，提示當(dāng)糖尿病病人血清UMOD 水平低于85.94 g∕L 時(shí)易發(fā)生腎損傷。

suPAR 參與多種機(jī)體生理過程，不受日常飲食和晝夜等因素影響［21］。王媛媛等［22］研究發(fā)現(xiàn)，各病理類型的腎病綜合征病人血清suPAR 水平顯著高于正常對(duì)照組，提示suPAR 可能是腎病發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)危險(xiǎn)因素。張靜靜等［23］研究表明，原發(fā)性腎病綜合征病兒血清中suPAR 水平顯著升高，且在急性腎損傷與部分病理類型中更為明顯。Zhou 等［24］發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病病人的uPAR 水平較對(duì)照組顯著升高，隨著疾病的加重，血清suPAR 濃度也逐漸上升，且與eGFR 呈負(fù)相關(guān)。在本研究中，suPAR 在健康對(duì)照組、單純糖尿病組、糖尿病腎損傷組病人血清中的水平依次升高，且臨床期糖尿病腎病組病人血清suPAR 水平較早期糖尿病腎病組升高，提示suPAR可能在糖尿病腎損傷中具有調(diào)控作用。相關(guān)性分析顯示，RNLS、UMOD、suPAR 與腎功能指標(biāo)（UREA、Cr、UA）及臨床資料（三酰甘油、空腹血糖等）呈正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步提示RNLS、UMOD、suPAR 參與糖尿病腎損傷的病情進(jìn)展。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清RNLS、UMOD、suPAR 三項(xiàng)聯(lián)合的AUC（0.88）顯著高于RNLS、UMOD 單項(xiàng)檢測(cè)，提示三者聯(lián)合對(duì)糖尿病腎損傷的準(zhǔn)確診斷和治療有重要診斷價(jià)值。

綜上所述，糖尿病腎損傷病人血清RNLS、UMOD、suPAR 水平呈異常表達(dá)，且三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)糖尿病病人發(fā)生腎損傷的診斷價(jià)值較高，可作為糖尿病病人并發(fā)腎損傷的指標(biāo)。本院進(jìn)一步研究將擴(kuò)大樣本量，并研究多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值，為臨床診斷提供可靠依據(jù)。