子癇前期病人長鏈非編碼RNA H19和長鏈非編碼RNA HAND2-AS1表達水平與胰島素抵抗的相關性研究

蔣天從，劉志明，谷孝月，郭婉茹，石沖，戚桂杰

作者單位：唐山市婦幼保健院產前診斷科、唐山市出生缺陷篩查與診斷重點實驗室，河北 唐山063000

子癇前期是發生于妊娠20周之后的血壓升高、蛋白尿及代謝紊亂現象，易導致更嚴重的子癇，會造成不良母嬰結局，現有治療方法一般為盡量控制病情以延長孕周，提高胎兒存活率［1-3］。胰島素抵抗（IR）是代謝綜合征的病理學基礎，可引發內皮細胞功能紊亂，參與子癇前期的發病，合并IR者發生子癇前期的風險高于正常孕婦，即IR 可能是子癇前期的發病基礎之一［4-5］。血管內皮損傷也是子癇前期的誘發因素之一［6］。多種長鏈非編碼RNA（LncRNA）被發現與血管內皮損傷密切相關［7-9］，LncRNA H19在妊娠期疾病中表達異常［10］；LncRNA H19可調控氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導的血管內皮細胞凋亡［11］，其在子癇前期疾病中的表達以及與IR 的關系有待研究。LncRNA HAND2-AS1在子癇前期血清內高表達，且與血管內皮細胞損傷相關［12］。本研究通過分析子癇前期病人血清及胎盤組織中LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平以及IR水平的變化，初步分析其參與子癇前期的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021 年1—12 月在唐山市婦幼保健院建卡的子癇前期孕婦105 例作為研究對象，其中輕度子癇前期孕婦67 例，重度子癇前期孕婦38 例。診斷標準以及子癇前期嚴重程度參照2020 年妊娠期高血壓疾病診治指南［13］。納入標準：單胎；無孕前高血壓；初次妊娠。排除標準：合并心、肺、腎等功能障礙；多囊卵巢綜合征。隨機選取同期體檢健康孕婦97 例作為對照組。收集所有孕婦年齡、身體質量指數（BMI）、孕周、收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白等一般資料。

1.2 標本采集抽取子癇前期孕婦以及正常孕婦空腹靜脈血，離心后分離血清，-80 ℃保存備用。待孕婦胎盤娩出后，取胎盤組織生理鹽水漂洗，液氮冷凍，-80 ℃保存備用。

1.3 孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19與LncRNA HAND2-AS1水平測定通過Trizol試劑提取孕婦血清以及胎盤組織總RNA，將一定量RNA 逆轉錄成cDNA，通過SYBR Green PCR 試劑盒進行實時熒光定量PCR（qRT-PCR）測定，擴增條件：95 ℃預處理2 min，（95 ℃ 10 s，55 ℃ 15 s，72 ℃ 10 s）×40 次。通過2-ΔΔCt法定量LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為二者內參對照。引物5"-3"序列：LncRNA H19 正向ATCGGTGCCTCAGCGTTCGG，反 向CTGTCCTCGCCGTCACACCG；LncRNA HAND2-AS1 正 向TGTAGTGTCGCTGGTATCGC，反 向GAGTCACAGGCAGTCGTAGA；GAPDH 正向GGATGCAGGGATGATGTTC，反向TGCACCACCAACTGCTTA。

1.4 IR測定檢測孕婦空腹胰島素（FINS）、空腹血糖（FBG）水平，計算穩態模型的IR 指數（HOMA-IR）=FINS×FBG∕22.5，用來評估個體胰島素抵抗水平，隨胰島素抵抗水平的升高，HOMA-IR升高［14］。

1.5 統計學方法本研究數據采用SPSS 25.0 分析，本研究計量資料（年齡、BMI、孕周、收縮壓、舒張壓、24 h 尿 蛋 白、FBG、FINS、HOMI-IR、LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1）數據均符合正態分布，采用±s描述，組間比較采用獨立樣本t檢驗（對照組與子癇前期組、輕度子癇前期組與重度子癇前期組）；Pearson 法分析子癇前期孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平與HOMI-IR相關性。以雙側P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對照組與子癇前期孕婦一般資料比較對照組與子癇前期組年齡、BMI、孕周比較差異無統計學意義（P＞0.05）；子癇前期組病人收縮壓、舒張壓高于對照組（P＜0.05），且重度子癇前期病人收縮壓、舒張壓高于輕度子癇前期病人（P＜0.05），孕周低于輕度子癇前期組（P＜0.05），見表1。

表1 子癇前期孕婦105例與體檢健康孕婦97例一般資料比較∕ ± s

表1 子癇前期孕婦105例與體檢健康孕婦97例一般資料比較∕ ± s

注：BMI為身體質量指數。①為子癇前期組與對照組比較。②為重度與輕度比較。

分組對照組子癇前期組輕度重度t，P值①t，P值②舒張壓∕mmHg 83.76±8.68 105.71±5.52 103.93±5.41 108.85±5.58 21.61，＜0.001 4.43，＜0.001例數97 67 38年齡∕歲29.72±2.85 29.79±2.99 30.82±3.01 29.64±2.93 0.17，0.865 1.95，0.054 BMI∕（kg∕m2）25.24±2.88 25.46±2.70 25.52±2.60 25.36±2.61 0.56，0.576 0.30，0.763孕周∕周36.72±2.96 36.56±2.87 37.30±3.94 35.28±1.84 0.39，0.697 2.98，0.001收縮壓∕mmHg 111.65±8.72 163.72±9.17 151.14±9.06 175.32±9.31 41.28，＜0.001 13.01，＜0.001

2.2 對照組與子癇前期孕婦24 h 尿蛋白以及胰島素抵抗相關指標比較與對照組相比，子癇前期組孕婦24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平升高（P＜0.05），且重度子癇前期孕婦24 h 尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR 水平高于輕度子癇前期孕婦（P＜0.05），見表2。

表2 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比較∕ ± s

表2 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比較∕ ± s

注：FBG 為空腹血糖，FINS為空腹胰島素，HOMI-IR 為穩態模型的IR指數。①為子癇前期組與對照組比較。②為重度與輕度比較。

例數97 67 38 24 h尿蛋白∕mg 90.46±19.65 359.55±14.35 341.41±13.43 391.55±15.52 111.74，＜0.001 17.37，＜0.001 FBG∕（mmol∕L）4.22±0.70 5.84±0.97 5.24±0.85 6.90±1.15 13.52，＜0.001 8.44，＜0.001分組對照組子癇前期組輕度重度t，P值①t，P值②FINS∕（mU∕L）7.52±1.25 13.37±2.23 13.05±2.17 13.97±2.32 22.74，＜0.001 2.04，0.044 HOMI-IR 1.41±0.23 3.47±0.57 3.03±0.50 4.27±0.71 33.18，＜0.001 10.45，＜0.001

2.3 對照組與子癇前期孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平比較與對照組相比，子癇前期組孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平升高（P＜0.05），且重度子癇前期孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19 與LncRNA HAND2-AS1 水平高于輕度子癇前期孕婦（P＜0.05），見表3。

表3 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的血清、胎盤組織lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比較∕ ± s

表3 體檢健康孕婦97例與子癇前期孕婦105例的血清、胎盤組織lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比較∕ ± s

注：LncRNA H19為長鏈非編碼RNA H19，LncRNA HAND2-AS1為長鏈非編碼RNA HAND2-AS1。①為子癇前期組與對照組比較。②為重度組與輕度組比較。

分組對照組子癇前期組輕度重度t，P值①例數97 LncRNA HAND2-AS1血清1.01±0.15 1.98±0.33 1.63±0.27 2.59±0.43 26.53，＜0.001 14.05，＜0.001 LncRNA H19血清1.01±0.15 2.52±1.42 2.34±0.39 2.84±0.47 10.42，＜0.001 5.86，＜0.001胎盤組織1.02±0.17 2.87±0.47 2.49±0.41 3.56±0.59 36.61，＜0.001 10.92，＜0.001 67 38 t，P值②胎盤組織1.02±0.17 3.75±0.62 3.45±0.57 4.28±0.71 41.93，＜0.001 6.55，＜0.001

2.4 子癇前期病人血清、胎盤組織間LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水平相關性相關性分析結果顯示，子癇前期病人血清與胎盤組織間LncRNA H19 水平呈正相關（r=0.55，P＜0.001），血清與胎盤組織間LncRNA HAND2-AS1 水平呈正相關性（r=0.65，P＜0.001）。

2.5 子癇前期病人血清、胎盤組織LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水 平 與HOMI-IR 相 關 性子癇前期孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19 水平分別與HOMI-IR 呈正相關（r=0.53、0.59，P＜0.001）；血清、胎盤組織LncRNA HAND2-AS1 水平分別與HOMI-IR呈正相關（r=0.60、0.61，P＜0.001）。

3 討論

子癇前期可造成嚴重的母嬰不良結局，其發病機制仍未完全清晰。其中IR 在子癇前期臨床表現出現之前就可被檢測到，參與子癇前期的發展［15］。IR 是一種代謝綜合征，孕婦的高營養需求會促使胰島素儲備功能發生改變，胎盤分泌一系列拮抗胰島素激素，是孕婦的生理適應性反應，但IR 也會引發子癇前期等妊娠期代謝綜合征［16］。研究顯示，子癇前期病人IR 水平高于正常孕婦［17］。IR 的變化與子癇前期的發展存在必要聯系，因此探求子癇前期病人IR 相關指標有助于及時確定子癇前期并行預防性治療。

血管內皮細胞損傷是子癇前期的重要發病機制，細胞毒性物質可引起血管內皮損傷，導致血壓升高，從而引發一系列病理變化。LncRNA 在表觀遺傳調控、細胞周期調控等生命活動中發揮重要作用，是遺傳學研究熱點。多種LncRNA 在子癇前期的血管內皮損傷中發揮調控作用。LncRNA H19 可調控ox-LDL 誘導的血管內皮細胞損傷，參與對血管平滑肌細胞增殖與凋亡的調控［18］，促進血管新生［19］。劉明嫦［10］研究顯示，LncRNA H19 可通過介導miR-Let7e-5p 靶向MMP9 抑制滋養細胞侵襲力與遷移力，導致病人發生妊娠期高血壓疾病。本研究中，子癇前期孕婦血清、胎盤組織LncRNA H19 水平顯著高于正常妊娠孕婦，且重度子癇前期病人血清、胎盤組織LncRNA H19 水平高于輕度子癇前期病人，提示LncRNA H19 可能參與子癇前期進程。血管內皮損傷也是IR 的病理基礎之一。胰島素可誘導內皮細胞釋放一氧化氮，胰島素抵抗時，血管內皮功能下降，表現為一氧化氮含量下降，胰島素抵抗時，血液中游離脂肪酸含量升高，抑制內皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性，一氧化氮合成減少，血管內氧自由基增多，氧自由基滅活血液中一氧化氮，血管依賴性舒張下降，胰島素信號通路異常也可導致內皮細胞損傷［20］。馮姍姍等［21］研究顯示，LncRNA H19 在2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病人中與IR 密切相關，其可能成為判定病情的生物標志物。本研究中，子癇前期病人血清和胎盤組織LncRNA H19 均與HOMI-IR 呈正相關，即LncRNA H19 可能影響子癇前期病人的IR，LncRNA H19 可能通過影響血管內皮損傷參與子癇前期進展。

LncRNA HAND2-AS1 位于人染色體4q33-34上，與HAND2 為頭對頭方向，在癌細胞的增殖遷移中發揮重要作用［22］。滋養細胞具有癌細胞特質，滋養細胞侵襲不足是子癇前期的主要表現之一，導致滋養細胞侵入螺旋小動脈不全，導致其未發生重鑄而異常狹窄，胎盤灌注減少與缺氧。吳莉莉等［12］研究顯示，LncRNA HAND2-AS1 在子癇前期胎盤中表達升高，在血管內皮細胞中敲低LncRNA HAND2-AS1 表達可促進血管內皮細胞增殖、遷移以及血管形成，可能是造成子癇前期血管內皮損傷的因素。本研究中子癇前期病人血清LncRNA HAND2-AS1水平顯著高于妊娠正常孕婦，提示LncRNA HAND2-AS1 與子癇前期的發生相關，重度子癇前期病人與輕度子癇前期病人血清LncRNA HAND2-AS1 存在差異，進一步說明LncRNA HAND2-AS1 與子癇前期的發生發展相關。子癇前期病人血清、胎盤組織LncRNA HAND2-AS1 均與HOMI-IR 呈正相關，LncRNA HAND2-AS1 可能影響血管內皮細胞、IR 與子癇前期建立聯系，血管內皮損傷可能是三者間相關性的內在聯系。

綜上所述，子癇前期病人LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 高表達，二者與IR 密切相關，可能通過影響IR參與子癇前期發生發展。