高效液相色譜法測定豬肉中8 種磺胺類藥物的殘留

◎ 寧舵華，趙 妍

（漢臺區農產品質量安全監測檢驗中心，陜西 漢中 723000）

磺胺類藥物屬于合成源的廣譜抗菌劑，它可以抑制微生物體內的二氫葉酸合成酶，使微生物二氫葉酸合成受阻，進而影響微生物核苷酸和核酸的合成，最終抑制微生物的生長和繁殖[1-2]?；前奉愃幬锞哂惺褂梅奖?、藥物毒性低、抗菌譜較廣、性質穩定以及價格低廉的優點，因此在動物養殖過程中被廣泛應用，長期不合理使用磺胺類藥物，會使動物產生耐藥性，人們食用含磺胺類藥物殘留的動物性食品，會對身體產生危害?；前奉愃幬飿O易吸附在土壤中，且難以降解，會污染水資源，破壞生態環境[3-4]。因此，對動物性食品中的磺胺類藥物殘留進行準確測定具有重要意義，通過對動物性食品中的磺胺類藥物殘留進行檢測可以確保動物性食品的安全性，減少環境污染[5]。

磺胺類藥物兼具酸堿兩性[6]，易溶于有機溶劑，根據其理化特性，當前實驗室檢測磺胺類藥物主要采用高效液相色譜法-紫外檢測法和高效液相色譜串聯質譜法，其中質譜檢測法具有分離能力強、準確性高等特點，但是質譜法存在儀器成本高，操作復雜等問題，基層農產品檢測實驗室通常難以普及，而基層農產品檢測實驗室幾乎都配置有高效液相色譜儀，結合本實驗室相關配置情況，采用高效液相色譜法-紫外檢測法來測定豬肉中磺胺類藥物殘留。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品：豬肉監督抽檢樣，于-20 ℃保存；乙酸乙酯、甲醇、正己烷（色譜純，默克）；乙腈、甲酸（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司）；鹽酸、氨水（優級純，滬試國藥集團化學有限公司）；固相萃取柱MCX 柱（沃特世）；0.2 μm 有機濾膜（天津市津騰實驗室設備有限公司）；純水（一級水）；磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺二甲氧噠嗪和磺胺吡唑共8 種磺胺類藥物標準物質（農業農村部環境保護科研監測所）。

1.2 儀器與設備

1260 安捷倫液相色譜儀（VWD，美國安捷倫公司）；AUW220D 型電子分析天平（日本島津公司）；JY601 型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；RE-52AA 型旋轉蒸發儀（上海賢德實驗儀器有限公司）；Vm-01u（HYQ-3110）型旋渦振蕩器（寧波新芝科技有限公司）；H1850R 型高速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）；氮吹儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制

將濃度為100 μg·mL-1的8 種磺胺類藥物標準溶液分別轉移到10 mL 棕色容量瓶內，隨后以乙腈為稀釋劑進行定容操作，制得濃度為10 μg·mL-1的標準儲備溶液，并在-18 ℃下冷凍保存。分別吸取8 種標準儲備液各1 mL，放入10 mL 的棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容，配制成濃度為1 μg·mL-1的標準混合液，-18 ℃冷凍保存。用0.1%甲酸乙腈溶液將標準混合液分別稀釋成0.03 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.07 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1的標準工作溶液。

0.1% 甲酸溶液，吸取1 mL 甲酸溶液放置到1 000 mL 的容量瓶中，用純水溶解稀釋定容至1 000 mL；0.1%甲酸乙腈溶液，吸取配制好的0.1%甲酸溶液830 mL，放置到1 000 mL 容量瓶中，用乙腈溶解稀釋定容至1 000 mL；0.1 mol·L-1鹽酸溶液，吸取鹽酸溶液0.83 mL，用純水溶解稀釋定容至100 mL；50%甲醇乙腈溶液，量取50 mL 甲醇溶液放置到100 mL 容量瓶中，用乙腈稀釋溶解定容到100 mL；氨水洗脫液，吸取氨水5 mL 放置到100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀釋定容至100 mL。

1.3.2 色譜分析條件

色譜柱型號：C18（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）；紫外檢測器波長：270 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL；流動相流速：1.0 mL·min-1，流動相組成見表1。

表1 流動相組成表

1.3.3 分析步驟

（1）提取。稱?。?±0.05）g 豬肉樣品，放置到100 mL 的離心管中，加入20 mL 乙酸乙酯，進行漩渦振蕩，設置時長為2 min，振蕩結束后，在4 000 r·min-1下離心5 min，離心結束后，取上清液放置到100 mL梨形瓶中，再次移取20 mL 乙酸乙酯加入離心管剩余殘渣中，重復提取一次，把兩次提取液合并放入100 mL梨形瓶中。

（2）凈化。將4 mL 0.1 mol·L-1的鹽酸溶液加入100 mL 梨形瓶中，并在旋轉蒸發儀（設定溫度40 ℃）下濃縮。當梨形瓶內的提取液量減少到3 mL 時，將剩余的液體轉入10 mL離心管中。在離心管中加入2 mL 0.1 mol·L-1的鹽酸溶液，用3 mL 正己烷沖洗梨形瓶，將洗液也倒入10 mL 離心管內。經過旋渦混合30 s 后，在3 000 r·min-1下離心5 min，棄去上層的正己烷。再用3 mL 正己烷沖洗梨形瓶，并將洗液轉入10 mL 離心管，進行旋渦混合30 s。離心條件同上，棄去上層的正己烷，下層液體留作后續使用。以2 mL 甲醇和2 mL 0.1 mol·L-1鹽酸溶液活化MCX 柱。將備用液通 過MCX 柱，流速控制在1 mL·min-1，用1 mL 0.1 mol·L-1鹽酸溶液和2mL 50%甲醇乙腈溶液分別淋洗并吹干MCX 柱。使用4 mL 洗脫液收集MCX 柱中保留的磺胺類藥物，再在40 ℃的氮氣環境下吹干。在刻度離心管中加入1mL 0.1%甲酸乙腈溶液以溶解殘留物，用0.45 μm 有機濾膜進行過濾，準備后續測試。

2 結果與分析

2.1 方法線性范圍

把8 種磺胺類標準混合液分別配制成濃度為0.03 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.07μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1和0.50 μg·mL-1的系列標準工作溶液，用1.3.2 的色譜條件選取兩組濃度范圍進行分析測定。以標準工作溶液濃度為橫坐標（μg·mL-1），以實驗測得的峰面積為縱坐標，得到標準曲線線性回歸方程，如表2 所示。8 種目標化合物的線性相關系數（R2）均大于0.99，表明8 種磺胺類藥物在0.03～0.20 μg·mL-1、0.10～0.50 μg·mL-1內均呈良好的線性關系。

表2 化合物線性范圍表

2.2 方法檢出限測試

由2.1 得出結論，8 種磺胺類藥物在0.03～0.20 μg·mL-1，藥物濃度與峰面積有良好的線性關系。按信噪比（S/N）為3 確定本方法的檢出限為10 μg·kg-1。

2.3 方法精密度測試和準確度測試

稱取兩組豬肉樣品，每組6 份豬肉，每份豬肉樣品在（5±0.05）g，向第一組豬肉樣品中分別加入0.05 mL 1.0 μg·mL-1濃度的標準混合液，平行測定6 次，向第二組豬肉樣品中分別加入0.175 mL 1.0 μg·mL-1的標準混合液，平行測定6 次，計算得到豬肉樣品的回收率和相對標準偏差如表3 所示。相對標準偏差為1.3%～6.7%，回收率為61.00%～95.40%，符合《食品安全國家標準 動物性食品中13 種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》（GB 29694—2013）中相對標準偏差≤15%、樣品回收率在60%～120%的要求，說明本方法的精密度和準確度良好。

表3 方法精密度與加標回收率測定數據表

3 結論

本實驗采用高效液相色譜法-紫外檢測法，對豬肉樣品中8 種磺胺類藥物殘留進行測定，通過選擇適宜的樣品處理方法，合理的儀器分析條件，能夠準確檢測出8 種磺胺類藥物的殘留。該方法的檢出限為10 μg·kg-1，精密度在1.3%～6.7%，樣品平均加標回收率在61.00%～95.40%。綜上所述，該分析方法適用于豬肉樣品中8 種磺胺類藥物殘留的同步檢測。