QuEChERS-HPLC-MS/MS 法測定九華黃精中26 種農藥殘留

◎ 邢海燕，汪 安，朱志祥，程桂林，黎 睿，胡金玲，孫麗婷

（池州市質量監(jiān)督檢驗研究院，安徽 池州 247000）

黃精是我國傳統(tǒng)的藥食同源植物，其使用歷史至今已有兩千余年。九華黃精獲批中國國家地理標志保護產品，為百合科黃精屬多花黃精，主產于九華山周邊，十大皖藥之一[1]，具有補中益氣、滋陰潤肺、抗疲勞、增強免疫、調節(jié)血糖和延緩衰老等功效[2]。近年來池州市政府堅持綠色發(fā)展理念，依托優(yōu)質的生態(tài)環(huán)境和自然資源，推廣林下種植方式，大力發(fā)展九華黃精產業(yè)，種植面積超過4 000 hm2，產量約達3 000 t。

由于野生黃精資源有限，市場需求大，人工種植發(fā)展迅速。黃精生長過程中，會有蠐螬等幼蟲在土壤中為害根部，且易滋生雜草影響產量。為提高預防治療病蟲害和除草效率，有部分藥農采取物理化學藥物相結合的方法。另外，由于在其他農業(yè)種植中使用的農藥有80%～90%進入土壤中，污染土壤和水源，從而影響到種植用地和用水，使黃精在種植過程中富集農藥存在可能，如果農藥殘留超標，會給人們的健康帶來危害[3]。

目前農殘檢測常見的樣品前處理技術有固相萃取法、分子印跡萃取技術、QuEChERS 法等。常用的分析技術有HPLC 法、GC 法、HPLC-MS 法和GC-MS法。本文以產于池州地區(qū)的九華黃精生品為研究對象，優(yōu)化前處理提取凈化方法，采用HPLC-MS/MS 法測定九華黃精中26 種農藥殘留量的分析方法，為農業(yè)部門、檢測機構、九華黃精種植加工企業(yè)提供應用參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

26 種混合標準溶液，質量濃度均為100 μg·mL-1，介質為乙腈，北京迪馬科技有限公司；甲醇、乙腈（色譜純），美國賽默飛公司；乙酸乙酯、二氯甲烷（色譜純），國藥集團化學試劑有限公司；甲酸銨（色譜純），美國阿拉丁公司；甲酸（優(yōu)級純），山東西亞化學股份有限公司；氯化鈉、乙酸鈉、乙酸、無水硫酸鎂（分析純），國藥集團化學試劑有限公司。

乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、石墨化炭黑（GCB），粒徑均為40～60 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司；分析用水為實驗室用水由FST-TOP-A22 超純水凈化處理系統(tǒng)制備，符合一級水要求。

1.2 儀器與設備

1290-6470 三重四極桿液相-質譜/質譜聯(lián)用儀，美國安捷倫公司；高速離心機：美國賽默飛公司；超聲儀，德國艾爾瑪公司；JA3103N 電子天平，上海民橋精密科學儀器有限公司；FST-TOP-A22 超純水機，上海富特詩儀器設備有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品前處理

將樣品粉碎混勻后稱取1 g（精確至0.01 g）于50 mL 塑料離心管中，加9 mL 水渦旋混勻，放置30 min。加入10.0 mL 提取劑及1 顆陶瓷均質子，劇烈振蕩1 min，加入6 g 無水硫酸鎂1.5 g 乙酸鈉，劇烈振蕩2 min 后，以8 000 r·min-1的轉速離心5 min。定量吸取上清液1.5 mL 至裝有220 mg 無水硫酸鎂和凈化劑（100 mg C18＋100 mg PSA ＋30 mg GCB）的2 mL 離心管中，渦旋混勻1 min。以8 000 r·min-1的轉速離心5 min，取上清液過0.22 μm 濾膜后上機測定。同時用陰性九華黃精作為樣品基質做空白試驗，得到空白基質溶液，用于配制標準系列和計算加標回收率。

1.3.2 標準系列的配制及定量測定

準確吸取混合標準溶液使用液，用空白基質溶液逐級稀釋配制成質量濃度為0 μg·mL-1、0.002 μg·mL-1、0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1的標準系列，供HPLC-MS/MS 分析測定。以標準系列工作溶液的質量濃度（x）和定量子離子的質量色譜圖響應值（y）繪制標準工作曲線，按外標法定量。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent ZORBA plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；進樣量：2 μL；柱溫：40 ℃；柱流速：0.3 mL·min-1；流動相：A 相為2 mmol·L-1的甲酸銨-甲酸（0.01%）甲醇溶液，B 相為2 mmol·L-1的甲酸銨-甲酸（0.01%）水溶液。梯度 洗脫程序：0～0.9 min，2% A；1.0～3.0 min，15% →50% A；3.1～8.0 min，50% →70% A；8.1～12.0 min，70% →98% A；12.1～14.0 min，98%→2% A；14.1～15.0 min，2% A。

（2）質譜條件。離子化方式：電噴霧電離；掃描方式：正離子掃描；毛細管電壓：3 500 V；檢測方式：MRM 多反應監(jiān)測；鞘氣溫度和流速：300 ℃和10 L·min-1；干燥氣溫度和流速：200 ℃和6 L·min-1；質譜優(yōu)化后的方法條件見表1。

2 結果與分析

2.1 實驗條件的優(yōu)化

2.1.1 提取劑的選擇

測定農藥殘留量時，常用的提取溶劑有乙腈、甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷，通過進行26 種農藥的平均加標回收率來比較這4 種溶劑的提取效率，發(fā)現(xiàn)乙腈提取率最佳，平均回收率可達到88%（表2），故確定用乙腈作為提取劑。

2.1.2 凈化材料的選擇

由于九華黃精中含有豐富的多糖、甾體皂苷、總黃酮、氨基酸、生物堿、脂肪等成分[4]，萃取時共萃取物較多，對提取物凈化處理要求較高。C18可去除樣品基質中存在的脂肪和脂類等非極性干擾物質，PSA可去除糖類、脂肪酸、有機酸和酚類等干擾物，GCB可去除色素和甾醇[5]。本文研究C18、PSA、和GCB 3 種凈化材料組合使用對待測物回收率的影響，見表3。在以乙腈作為提取劑的前提下，綜合考慮平均回收率和對色譜柱、檢測器的保護，最終選擇100 mg C18+100 mg PSA+30 mg GCB 作為凈化材料。

表3 不同凈化劑的平均加標回收率表

2.2 線性方程、相關系數、檢出限、定量限

以陰性九華黃精為空白基質，準確添加適量標準工作溶液配制成0 μg·mL-1、0.002 μg·mL-1、0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1的標準系列，以質量濃度（x）和定量子離子的質量色譜圖響應值（y）進行線性回歸，得到線性方程和相關系數。用空白樣品加標的方法，分別以3 倍信噪比和10 倍信噪比計算26 種農藥的方法檢出限和定量限。由表4 可見26 種農藥的線性關系良好，相關系數在0.996 0～0.999 9。當取樣量為1 g，加入提取劑為10.0 mL 時，方法檢出限在0.01～0.05 mg·kg-1，定量限在0.03～0.15 mg·kg-1。

表4 26 種化合物的線性方程、相關系數、檢出限、定量限、不同加標水平的平均回收率及其精密度表

2.3 精密度和準確度

在1 g 空白基質樣品中按0.002 mg·kg-1、0.020 mg·kg-1、0.200 mg·kg-1加標水平添加26 種農藥混合標準使用液，同樣品處理。每個添加水平平行測定6 次，回收率和精密度見表4。不同加標水平的相對標準偏差范圍在0.5%～9.1%（n=6），平均加標回收率在62.8%～108.6%，均能夠滿足《實驗室質量控制規(guī)范食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）附錄F 所規(guī)定的技術要求。

2.4 樣品檢測

采用優(yōu)化后的前處理方法處理九華黃精未知樣品，這26 種農藥均未檢出，在一定程度上說明九華黃精在農藥使用上安全性較高。在最佳條件下，26 種農藥化合物經提取凈化后進行定性與定量檢測，色譜圖如圖1 所示。

3 結論

本研究分別從提取試劑、凈化材料等方面對九華黃精中26 種農藥殘留量測定的前處理方法進行優(yōu)化，降低了黃精中所含的多糖、甾體皂苷、總黃酮、氨基酸、生物堿、脂肪等成分給前處理帶來的影響，提高了前處理效率。優(yōu)化后的前處理方法，操作方便快捷、提取凈化效果較好，可提高檢測效率、降低檢測成本，有助于政府監(jiān)管部門執(zhí)法，規(guī)范九華黃精的種植及其深加工產品的生產加工。