養(yǎng)陰涼血方對過敏性紫癜患兒血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

何 分,史艷平,李 霞,趙珍珍,邱 銳,趙愛霞

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué),陜西 咸陽 712046;2.西安市兒童醫(yī)院,陜西 西安 710003)

作為一種兒童血管炎最常見形式且易累及全身細(xì)小動(dòng)脈和毛細(xì)血管的血管變態(tài)反應(yīng)性疾病,過敏性紫癜(Henoch-schnlein purpura,HSP)目前發(fā)病率為十萬中約有18.6人患病[1]。研究顯示,過敏性紫癜在學(xué)齡期兒童中發(fā)病率越來越高,且男童發(fā)病率高于女童,發(fā)病時(shí)間多為秋冬交替之季[2],對兒童有嚴(yán)重的健康風(fēng)險(xiǎn)。HSP發(fā)病因素復(fù)雜,危險(xiǎn)因素包括感染、遺傳、疫苗接種、食物及藥物等,但其確切病因和發(fā)病機(jī)制目前仍處于探索中[3]。有研究表明在HSP病程急性期,患兒的血清可刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌合成多種炎性因子,導(dǎo)致血管受損,其在過敏性紫癜患兒發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[4]。另有學(xué)者認(rèn)為在遺傳與環(huán)境因素的作用下,機(jī)體免疫紊亂也參與了HSP發(fā)病,尤其是免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA),IgA類免疫復(fù)合物沉積及異常糖基化等均提示其在HSP的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不可替代的作用[5]。研究發(fā)現(xiàn)髓樣IgA Fc受體(FcαRI/CD89)在HSP及紫癜性腎炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)患兒腎活檢表達(dá)中均明顯升高,提示CD89參與HSP及HSPN的發(fā)病[6]。內(nèi)皮細(xì)胞也稱血管內(nèi)皮細(xì)胞,是形成血管內(nèi)壁的一層高度分化的單細(xì)胞層,具有吞噬和免疫作用,內(nèi)皮細(xì)胞在各種致病因素影響下發(fā)生損傷是包括過HSP在內(nèi)的多種血管炎發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有研究指出內(nèi)皮細(xì)胞損傷與HSP發(fā)病密切相關(guān)[7]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)也表明,內(nèi)皮細(xì)胞損傷后分泌的細(xì)胞因子可通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、參與炎癥反應(yīng)等促進(jìn)過敏性紫癜的發(fā)生發(fā)展[8]。故選擇性保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)以及血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶向治療也給予HSP的預(yù)防和治療一種新的干預(yù)手段和思考方向。中醫(yī)認(rèn)為過敏性紫癜屬“血證、斑疹、肌衄、紫癜風(fēng)”之類[9]。有關(guān)紫癜風(fēng)中醫(yī)證型分布研究結(jié)果顯示,血熱妄行證為學(xué)齡期兒童患過敏性紫癜最主要的證型[10]。治以清熱涼血、益氣攝血、滋陰降火等。中醫(yī)中藥治療過敏性紫癜的道路始終在不斷發(fā)展及創(chuàng)新。西安市兒童醫(yī)院史艷平主任醫(yī)師基于多年臨床經(jīng)驗(yàn),所自擬經(jīng)驗(yàn)方養(yǎng)陰涼血方在過敏性紫癜治療中取得較好療效,但具體作用機(jī)制尚不清楚?；诖?本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)為研究對象,利用過HSP患兒血清刺激HUVECs而誘導(dǎo)的過敏性紫癜模型,同時(shí)加入不同濃度的養(yǎng)陰涼血方進(jìn)行保護(hù),通過此種方式研究觀察養(yǎng)陰涼血方對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用并探討其可能治療機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2022年6月至2022年12月收治于西安市兒童醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科明確診斷為過敏性紫癜,且中醫(yī)辨證屬血熱妄行證患兒30例,其中男16例,女14例,平均年齡(7.1±2.0)歲。正常對照組則搜集同時(shí)期就診于西安市兒童醫(yī)院門診體檢科、年齡相仿的健康兒童30例,男16例,女14例,平均年齡(7.0±2.3)歲。

西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)： 參照2005年歐洲風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的過敏性紫癜診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]及《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[12]中過敏性紫癜診斷標(biāo)準(zhǔn)。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《過敏性紫癜中醫(yī)診療指南》[13]中血熱妄行證診斷標(biāo)準(zhǔn)：明確診斷為過敏性紫癜,皮膚瘀點(diǎn)密集,甚至成片,色澤鮮紅?？砂橛忻娉?、心煩、大便干燥、發(fā)熱,部分患兒伴有腹痛及關(guān)節(jié)腫痛。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：符合診斷標(biāo)準(zhǔn);年齡3～12歲的初診者;病程1～7 d。排除標(biāo)準(zhǔn)：非首次發(fā)病或發(fā)病時(shí)間超過1周;對本次治療藥物過敏者;已接受相關(guān)藥物治療(如免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素類等);合并心、肝、腎等系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。

1.2 細(xì)胞、主要試劑、儀器和藥物 HUVECs購自上海市東方醫(yī)院GMP實(shí)驗(yàn)室(國家干細(xì)胞庫)?？贵wAKT(MC010);PI3K(sc-365290);P-PI3K(ab191606);人TNF-α、IL-8、IgA、CD89檢測試劑盒(上海西唐);電泳槽(型號JY-SCZ2+);電泳儀(JY300HC);生物酶標(biāo)儀(ELX800);高速冷凍離心機(jī)(湘長設(shè)備,D170302);熒光顯微鏡(CKX53);養(yǎng)陰涼血方的藥物組成為水牛角、茜草各10 g,生地8 g,板藍(lán)根、金銀花各6 g,玄參、白芍、甘草各5 g,川芎、白花蛇舌草、丹皮各4 g,均為藥物顆粒劑,該方中所需中藥顆粒劑購自三九集團(tuán),取藥物顆粒制劑用熱水混合,完全融化后靜待10 min,濃縮及過濾除菌后,得到濃度為0.5、1 g/ml的藥液,置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 制備血清：符合納入標(biāo)準(zhǔn)入組病例兒童于空腹采外周靜脈非抗凝全血2 ml,置于常溫條件下靜放2 h,用高速離心機(jī)離心15 min后提取血清,分裝于EP管,每管200 μl,并做好相關(guān)規(guī)范標(biāo)識,置于-80 ℃超低溫冰箱中備用。以上過程均需保證無菌操作。

1.3.2 HUVECs的培養(yǎng)：首先在1640培養(yǎng)基(含青霉素/鏈霉素,10%胎牛血清)中將細(xì)胞株復(fù)蘇培養(yǎng),再放入37 ℃,含5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代。根據(jù)細(xì)胞生長狀況,選取細(xì)胞進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)研究。

1.3.3 細(xì)胞分組：①空白對照組：HUVECs;②HSP組：HUVECs+2 g/ml HSP血清;③養(yǎng)陰涼血方低濃度組：HUVECs+2 g/ml HSP患兒血清+養(yǎng)陰涼血方(濃度為0.5 g/ml);④養(yǎng)陰涼血方高濃度組：HUVECs+2 g/ml HSP患兒血清+養(yǎng)陰涼血方(濃度為1 g/ml);⑤正常對照組：HUVECs+2 g/ml健康兒童血清。

按每孔106個(gè)細(xì)胞將分化成熟的HUVECs接種于6孔培養(yǎng)板中,每孔體積2 ml,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱(37 ℃,5%CO2)中培養(yǎng),待細(xì)胞長至部分融合后,每孔用PBS緩沖液清洗2遍。除空白對照組及正常對照組外,余各組加入2 g/ml HSP血清造模,干預(yù)24 h后,按照分組要求加入養(yǎng)陰涼血方治療24 h。

1.3.4 ELISA法檢測HUVECs中TNF-α、IL-8、IgA、CD89含量：末次給藥后,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集上清液。按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作,結(jié)束后立即測定結(jié)果,測定各孔的吸光值并繪制檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算標(biāo)本TNF-α、IL-8、IgA、CD89含量。

1.3.5 Western blot檢測HUVECs中PI3K/AKT/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)：收集細(xì)胞,用預(yù)冷磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞,添加裂解液進(jìn)行低溫裂解,提取總蛋白,BAC定量, SDS-PAGE電泳分離蛋白,轉(zhuǎn)膜封閉。一抗(加入PI3K抗體)4 ℃下孵育過夜,次日與加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗 (1∶2000) 常溫孵育1 h。在膜表面均勻滴加化學(xué)發(fā)光液,避光反應(yīng)1～2 min?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測目的條帶,壓X線片曝光。用Image J計(jì)算條帶灰度值,蛋白質(zhì)的相對含量以目的蛋白與β-actin條帶平均灰度值的比值表示,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組HUVECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 見圖1?？瞻讓φ战MHUVECs顯微鏡下可見細(xì)胞生長形態(tài)良好,貼壁生長,呈短梭形,邊界清楚;加入正?；純杭癏SP患兒血清處理之后,細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)數(shù)目減少、形態(tài)皺縮;相比于正常對照組,HSP組細(xì)胞總體趨勢較差;養(yǎng)陰涼血方干預(yù)后,細(xì)胞數(shù)目及形態(tài)總體變化趨勢較HSP組改善,且養(yǎng)陰涼血方高濃度組更明顯。

圖1 各組HUVECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化(×100)

2.2 各組TNF-α及IL-8水平比較 見表1。與正常對照組和空白對照組相比,HSP組HUVECs中TNF-α、IL-8含量明顯升高(P<0.05);與HSP組比較,養(yǎng)陰涼血方低、高濃度組HUVECs中TNF-α、IL-8含量隨著中藥濃度增大明顯降低(P<0.05)。

表1 各組TNF-α、IL-8水平比較(pg/ml)

2.3 各組IgA及CD89水平比較 見表2。與正常對照組和空白對照組相比,HSP組HUVECs中IgA、CD89含量明顯升高(P<0.05);與HSP組比較,養(yǎng)陰涼血方低、高濃度組HUVECs中IgA、CD89含量隨著中藥濃度增大逐漸下降(P<0.05)。

表2 各組IgA、CD89水平比較(pg/ml)

2.4 各組HUVECs中PI3K、p-PI3K蛋白表達(dá)比較 見圖2。HSP組和養(yǎng)陰涼血方低、高濃度組的PI3K蛋白水平與空白對照組和正常對照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而磷酸化的PI3K(p-PI3K)水平則顯著增高(P<0.05);與HSP組比較,經(jīng)不同濃度養(yǎng)陰涼血方干預(yù)后p-PI3K蛋白表達(dá)水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

注：與空白對照組比較,*P<0.05;與HSP組比較,#P<0.05;與正常對照組比較,△P<0.05

3 討 論

過敏性紫癜現(xiàn)多稱為IgA血管炎(Immunoglobulin A vasculitis,IgAV),這種小血管炎的特點(diǎn)是可觸及的紫癜、腹痛、關(guān)節(jié)炎或關(guān)節(jié)痛和腎臟受累[14]。過敏性紫癜屬于自限性病程疾病,大多數(shù)患兒預(yù)后良好,遠(yuǎn)期預(yù)后取決于是否并發(fā)腎臟損傷,腎臟病變常較遷延,可嚴(yán)重影響患兒生活質(zhì)量,預(yù)后相對較差[15]。作為一種發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚的自身免疫性疾病,過敏性紫癜至今仍無理想的治療方法,且目前國內(nèi)外缺乏完善、規(guī)范的診療共識。西醫(yī)學(xué)治療缺乏特異性藥物,臨床上目前常主要是控制感染,去除病因,以抗過敏藥、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等為主,目的大多是有效阻斷炎癥進(jìn)程,快速緩解病情,減少腎臟損害?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)雖然能病理性抑制疾病,短期療效雖好,但長期治療穩(wěn)定性欠佳,不良反應(yīng)多,且停藥后容易復(fù)發(fā),同時(shí)給患兒及家長帶來較大的心理、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為小兒為“純陽之體”,外邪入侵易趨化熱,血受寒則凝,受熱則行,絡(luò)傷血溢則成病,血溢肌膚,則外見紫癜。中醫(yī)藥治療本病根據(jù)疾病所處階段整體審查、全面判斷并制訂合理的診療方案,療效確切,且不良反應(yīng)少,增強(qiáng)機(jī)體免疫力,減少腎臟損害及復(fù)發(fā)[16]。中醫(yī)學(xué)對其獨(dú)特的認(rèn)識和治療優(yōu)勢,未來治療發(fā)展方面,隨著其理論和治療手段不斷發(fā)展完善,與西醫(yī)協(xié)同增效,力求為每一位紫癜患兒提供規(guī)范化、個(gè)體化的診療,提高患兒生活質(zhì)量。

綜合過敏性紫癜病因病機(jī)在古今文獻(xiàn)記載及臨床觀察研究發(fā)現(xiàn),紫癜風(fēng)的病因病機(jī)主要與“風(fēng)、熱、毒、濕、瘀、虛”等因素相關(guān),而導(dǎo)致過敏性紫癜病情反復(fù)、遷延難愈的重要病因則為血熱和血瘀,并且血熱及血瘀貫穿該病病程始終,故應(yīng)針對相關(guān)病因及癥狀進(jìn)行對癥治療。本實(shí)驗(yàn)中所選取的養(yǎng)陰涼血方對于兒童過敏性紫癜的臨床癥狀有較好的改善作用,提高臨床療效,縮短疾病病程,減少腎臟損害及復(fù)發(fā)。該方以養(yǎng)陰清熱、涼血解毒為治療原則,方中水牛角、茜草共為君藥,發(fā)揮清熱涼血散瘀等作用?，F(xiàn)代藥理研究表明[17],水牛角水解物能縮短出血時(shí)間、降低毛細(xì)血管通透性、升高血小板而呈現(xiàn)明顯的止血作用,對血管具有良性調(diào)節(jié)保護(hù)。而茜草味苦性寒,善走血分,既能涼血止血,又能化瘀止血,有助于皮膚紫癜消退等方面的治療。臣以甘寒質(zhì)潤的生地黃與玄參,兩者均能清熱涼血,養(yǎng)陰生津。常相須為用。同時(shí)板藍(lán)根和金銀花清熱解毒也作為臣藥則起到輔助作用,隨著藥理學(xué)研究深入,金銀花在抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化活性、抗凝血、保肝護(hù)肝等方面都有很好的效果[18]。佐以“血中氣藥”川芎,既能活血祛瘀,又能行氣,善通達(dá)氣血。佐以白芍補(bǔ)血養(yǎng)血,補(bǔ)益虛勞。佐以臨床上清熱解毒的抗炎良藥之白花蛇舌草,最后佐以牡丹皮清熱涼血,活血化瘀。使以甘草調(diào)和諸藥,兼顧護(hù)脾胃。全方藥簡力專,切中紫癜風(fēng)病的病因病機(jī),集涼血、活血、養(yǎng)血三法之組合,諸藥相配,標(biāo)本兼治,療效顯著。

IL-8作為一種炎癥趨化因子,其對機(jī)體產(chǎn)生的免疫作用具有雙向性。在多種炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展過程中作為不容忽視的重要介質(zhì)而發(fā)揮抗感染、抗腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)等重要功能。IL-8在內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種細(xì)胞中均可表達(dá),存在促進(jìn)炎性反應(yīng)等作用。有研究顯示[19],在過敏性紫癜患兒病程的急性期,白細(xì)胞會(huì)升高,出現(xiàn)多核白細(xì)胞浸潤血管的周圍,激活內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生較多的IL-8, 同樣的,IL-8不斷增加也促使白細(xì)胞聚集于血管周圍,釋放出較多蛋白酶,導(dǎo)致血管出現(xiàn)炎性損傷。有研究發(fā)現(xiàn)[20]急性期過敏性紫癜患兒血清中IL-8表達(dá)異常升高,并多由內(nèi)皮細(xì)胞損傷分泌產(chǎn)生。腫瘤壞死因子-α (Tumor necrosis factor-α,TNF-α)一方面可誘導(dǎo)其他炎癥因子合成及釋放,導(dǎo)致局部組織炎癥的發(fā)生發(fā)展,另一方面也可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞過度表達(dá)黏附分子,損傷血管內(nèi)皮[21]。有研究發(fā)現(xiàn)[22]TNF-α可激活HUVECs 內(nèi)信號通路,誘導(dǎo)HUVECs的凋亡,顯著增加炎癥因子表達(dá),誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),達(dá)到加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷的目的。另有實(shí)驗(yàn)表明,TNF-α及其他相關(guān)炎性因子在患兒血清中的變化不僅能夠反映病情嚴(yán)重程度,也能起到評估預(yù)后的作用[23]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與HSP組比較,低、高濃度中藥組HUVECs中TNF-α、IL-8含量明顯降低,且隨著中藥濃度增大含量逐漸下降。由此推測,養(yǎng)陰涼血方在人體內(nèi)發(fā)揮減緩血管炎性反應(yīng)的作用可能與抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌TNF-α、IL-8等炎性因子有關(guān)。

IgA屬于高度糖基化的免疫球蛋白,在過敏性紫癜發(fā)病過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)HSP患兒急性期血清IgA水平明顯升高[24];腎臟組織活檢可見IgA沉積[25];HSP模型組小鼠IgA異常糖基化程度顯著高于正常對照組[26],均提示IgA與過敏性紫癜存在密切的聯(lián)系。另有報(bào)道稱IgA的表達(dá)在HSP評價(jià)中意義重大,可以較好地評估腎臟功能受損害及預(yù)后情況[27]。目前已發(fā)現(xiàn)的IgA受體主要有5類,作為一種髓系來源的細(xì)胞,并且廣泛表達(dá)于中性粒細(xì)胞中,FcαRI(CD89)是真正意義的IgA Fc受體,能與所有形式的IgA結(jié)合,屬于免疫球蛋白受體超家族成員,在機(jī)體免疫防御和維持系統(tǒng)免疫平衡方面扮演著重要的角色[28]。目前,隨著對IgA及其Fc受體的結(jié)構(gòu)、功能等深入研究,其重要性也逐漸引起人們認(rèn)識,孕育著人們對炎癥性疾病治療的新思路。通過研究HSP患兒皮損組織,發(fā)現(xiàn)CD89呈強(qiáng)陽性表達(dá),提示CD89參與急性期HSP發(fā)病[6],并可能作為急性期HSP的重要分子標(biāo)記[29]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), HSP組HUVECs中IgA、CD89表達(dá)呈升高趨勢,也提示IgA、CD89在HSP的發(fā)病過程中具有一定的作用,且低、高濃度中藥組HUVECs中IgA、CD89含量隨著中藥濃度增大逐漸下降。由此推測,養(yǎng)陰涼血方可能通過降低HUVECs中IgA、CD89表達(dá),抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用,幫助機(jī)體恢復(fù)免疫平衡。

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶(AKT)/核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)是一種能夠?qū)ο掠我蜃舆M(jìn)行調(diào)控,在細(xì)胞凋亡、增殖、炎性反應(yīng)等生物學(xué)過程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞內(nèi)信號通路[30]。隨著分子生物學(xué)研究的深入,PI3K/AKT/NF-κB信號通路因廣泛參與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而成為研究熱點(diǎn)。PI3K作為一類通過磷酸化或去磷酸化在體內(nèi)多個(gè)方面發(fā)揮重要作用且與細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)密切相關(guān)的第二信使分子[31],正常情況下以非磷酸化形式在體內(nèi)存在,當(dāng)被各種促炎物質(zhì)活化后可發(fā)生磷酸化(p-PI3K),在免疫細(xì)胞受體激活信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。研究顯示,通過降低PI3K/AKT/NF-κB信號通路上所調(diào)控的血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)促炎因子的表達(dá),可減輕HUVECs的炎癥刺激和活化作用,提高細(xì)胞活力,改善細(xì)胞形態(tài)[32]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),通過過敏性紫癜患兒血清誘導(dǎo)使HUVECs內(nèi)PI3K發(fā)生磷酸化,經(jīng)過養(yǎng)陰涼血方干預(yù)后其磷酸化水平降低。由此推測,養(yǎng)陰涼血方可通過某些靶基因來激活PI3K/AKT/NF-κB信號通路以此來維持內(nèi)皮細(xì)胞存活。

綜上所述,養(yǎng)陰涼血方治療過敏性紫癜效果明確,降低機(jī)體TNF-α、IL-8、IgA、FcαRI(CD89)水平,其作用強(qiáng)弱與養(yǎng)陰涼血方劑量大小呈正相關(guān)?？赡艿淖饔脵C(jī)制為通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中PI3K蛋白的表達(dá),進(jìn)而抑制PI3K/AKT/NF-κB信號通路上下游相關(guān)靶基因表達(dá),減少相關(guān)免疫因子如TNF-α、IL-8、IgA、FcαRI(CD89)的分泌,維持內(nèi)皮細(xì)胞存活,從而達(dá)到免疫調(diào)節(jié),減輕炎性反應(yīng)的目的。另外,本研究相關(guān)結(jié)果也提示FcαRI(CD89)與HSP具有相關(guān)性,可能為疾病的診治提供新依據(jù),未來有望成為重要的治療靶點(diǎn),因?yàn)椴±龜?shù)量少,其具體作用機(jī)制尚不清楚,仍需要進(jìn)一步深入研究。本實(shí)驗(yàn)所選PI3K/AKT/NF-κB信號通路在許多疾病的演變過程中扮演著關(guān)鍵角色,目前研究該通路的多個(gè)關(guān)鍵蛋白靶點(diǎn)逐漸成為關(guān)注重點(diǎn)。PI3K有一個(gè)直接的下游靶點(diǎn)蛋白激酶B(AKT),同時(shí)AKT也可激活I(lǐng)κB,使IκB從NF-κB上脫落并被泛素化,使得NF-κB由抑制狀態(tài)被激活,而活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核,激活靶基因釋放炎癥介質(zhì),誘發(fā)炎癥反應(yīng)[33]。PI3K/AKT/NF-κB信號通路上關(guān)鍵蛋白核因子(NF-κB)與炎癥密切相關(guān),因此,探索該相關(guān)信號通路旨在為過敏性紫癜的未來研究提供有價(jià)值的信息和思考[34]。由于本實(shí)驗(yàn)時(shí)間及科研經(jīng)費(fèi)有限,納入樣本量略少,未能進(jìn)一步探討其他客觀指標(biāo)及檢測其信號通路下游相關(guān)靶基因蛋白表達(dá)水平。待今后進(jìn)一步完善其信號通路下游相關(guān)靶基因蛋白表達(dá)水平檢測及延長實(shí)驗(yàn)時(shí)間以進(jìn)一步探討?zhàn)B陰涼血方治療過敏性紫癜機(jī)制。