GC法測定天然型維生素E軟膠囊中的有關物質

黃良江,麥麗萍

(1.來賓市檢驗檢測中心,廣西 來賓 546100;2.武宣縣衛生計生監督所,廣西 武宣 545900)

維生素E軟膠囊分為合成型和天然型[1-2],是臨床常用的一種藥物,其主要成分為維生素E,輔料為甘油、明膠等。維生素E軟膠囊現行標準收載于2020年版《中華人民共和國藥典》。相關文獻顯示,雜質(+)-α-生育酚為合成型的維生素E已知雜質,現行的標準中僅規定原料藥為維生素E(合成型)的維生素E軟膠囊進行有關物質檢查,未控制原料藥為維生素E(天然型)的維生素E軟膠囊制劑的有關物質[3]。研究表明,天然型維生素E有著比合成型維生素E更好的生物活性和生物利用率[4-6],成品制劑的價格也比合成型成品的價格高。因此,在利益的驅動下,不法分子有可能會利用現行標準的缺陷以合成型維生素E冒充天然型維生素E用于維生素E軟膠囊產品生產,而現行標準未對標示為天然型維生素E軟膠囊進行有關物質檢查,存在一定的藥品安全隱患。筆者查閱有關文獻,對天然型維生素E軟膠囊進行有關物質研究的報道較少[7-9]。為提高天然型維生素E軟膠囊的藥品安全性和質量,本研究參考相關文獻,對天然型維生素E軟膠囊開展有關物質研究,建立氣相色譜法測定天然型維生素E軟膠囊的有關物質,并對檢出的已知雜質和未知雜質進行分析,以期為天然型維生素E軟膠囊的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-2030氣相色譜儀,FID檢測器(日本島津),LabSolutions色譜工作站,電子天平(瑞士梅特勒-托利多)。

1.2 試藥

天然型維生素E軟膠囊(批號:210719、210726、210803、210815、210913,青島某藥業公司),維生素E對照品(批號:100062-201811,中國食品藥品檢定研究院),(+)-α-生育酚(批號FS1614161,天津阿爾塔科技有限公司),正己烷(色譜純)

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:CD-1毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);柱溫:265 ℃,恒溫分離;進樣口溫度:290 ℃;檢測器溫度:300 ℃;載氣為高純氮氣,流速為1.5 mL/min;V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24;進樣量1 μL,分流比20∶1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 雜質對照品溶液的制備

精密稱取雜質(+)-α-生育酚對照品適量,用正己烷稀釋,制成濃度為10.00,20.00,30.00,40.00,50.00 μg/mL的對照品溶液,用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.2 供試品溶液和對照溶液的制備

供試品溶液:取天然型維生素E軟膠囊內容物適量(約相當于維生素E 25 mg),精密稱定,加入正己烷10 mL,密塞,振搖使維生素E溶解,靜置,濾過,取續濾液。對照溶液:精密量取供試品溶液續濾液1 mL,置100 mL棕色容量瓶中,加正己烷定容至刻度,搖勻,使用時用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.3 空白溶液的制備

以說明書載明的輔料用正己烷溶解作為空白溶液,使用時用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.4 系統適用性溶液的制備

取維生素E對照品和雜質(+)-α-生育酚對照品各適量,精密稱定,加正己烷溶解,并稀釋制成每1 mL中含維生素E 250 μg與雜質(+)-α-生育酚100 μg的混合溶液,用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.3 系統適用性考察

取“2.2.4”項下的系統適用性溶液以1 μL進樣量注入氣相色譜儀,按“2.1”中色譜條件測定,記錄色譜圖,結果見圖1。系統適用性試驗測得系統適用性溶液中主成分維生素E峰與雜質(+)-α-生育酚峰之間的分離度R=3.256,理論塔板數以雜質(+)-α-生育酚峰計算,理論塔板數為91 887;系統適用性溶液中主成分維生素E峰與雜質(+)-α-生育酚峰之間的分離度大于1.5,理論塔板數大于5 000,表明該色譜系統條件下樣品中主成分能與其他雜質成分良好分離,能夠準確定量。

圖1 系統適用性試驗溶液

2.4 方法學考察

2.4.1 空白輔料干擾實驗

稱取處方中各輔料的最大取樣量制成混合空白輔料溶液,精密量取混合輔料溶液1 μL注入氣相色譜儀,依法測定,結果見圖2。結果表明:空白輔料在雜質(+)-α-生育酚保留時間23.5 min附近不存在輔料峰,輔料峰不干擾有關物質的檢測。

圖2 空白溶液

2.4.2 檢出限和定量限考察

將質量濃度為10.00 μg/mL的雜質(+)-α-生育酚對照品溶液逐級稀釋進樣,以信噪比(S/N)分別為3和10計算檢出限和定量限。結果顯示,當信噪比(S/N)約為3.0時測得方法檢出限為0.195 μg/mL,當S/N約為10.0時測得方法定量限為0.644 μg/mL。

2.4.3 線性關系考察

分別精密吸取“2.2.1”項下各系列濃度的雜質(+)-α-生育酚對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀,按“2.1”中色譜條件進樣測定,以質量濃度X(μg/mL)為橫坐標,以雜質(+)-α-生育酚峰面積的作為縱坐標,進行線性回歸,繪制標準曲線。結果顯示,雜質(+)-α-生育酚的回歸方程為Y=257.857X+0.249 063,線性相關系數r=0.999 99。結果表明雜質(+)-α-生育酚在10.00～50.00 μg/mL內線性關系良好。雜質(+)-α-生育酚對照品溶液色譜圖見圖3。

圖3 雜質對照品溶液

2.4.4 溶液的穩定性試驗

取樣品批號為210719的供試品1份,按“2.2.2”項下制備供試品溶液,在供試品溶液于25 ℃下分別放置0,2,4,8,12,18,24 h,在規定的時間點取供試品溶液以“2.1”色譜條件分別進行測定。結果顯示,不同時間段供試品溶液中均未檢出雜質(+)-α-生育酚,未知最大單個雜質的平均含量為1.18%,RSD為0.53%,總雜質的平均含量為2.32%,RSD為0.76%,表明供試品溶液在24 h內具有良好的穩定性。

2.4.5 重復性試驗

精密稱取樣品(批號:210719)6份,按“2.2.2”項下制備供試品溶液,分別取供試品溶液以“2.1”色譜條件測定,結果6份供試品溶液中均未檢出雜質(+)-α-生育酚,未知最大單個雜質的平均含量為1.15%,RSD為0.43%(n=6),總雜質的平均含量為2.23%,RSD為0.58%(n=6),相對標準偏差RSD<5%,表明本方法重復性良好。

2.4.6 加標回收率考察

取同一批次(批號:210719)天然型維生素E軟膠囊樣品9份,精密稱定。將9份樣品分成3組,每組3份。按表1添加量添加雜質(+)-α-生育酚,制成低、中、高濃度添加水平的加標回收率試驗溶液。上述9份溶液按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀測定,檢測雜質(+)-α-生育酚含量,計算每份樣品的加標回收率。結果測得低、中、高三種添加水平的樣品中雜質(+)-α-生育酚的平均加標回收率為100.36%,RSD=2.89%(n=9),表明該方法的準確度良好。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=9)

2.5 樣品雜質測定

取批號為210719、210726、210803、210815、210913的天然型維生素E軟膠囊(標示量100 mg)進行有關物質測定。供試品溶液中如檢測出雜質峰,雜質(+)-α-生育酚峰面積不得大于1.0%,其他單個雜質峰面積不得大于1.5%,總雜質不得大于2.5%。測定結果見表2,供試品色譜圖見圖4～5。

圖4 供試品溶液

圖5 對照溶液

表2 天然維生素E軟膠囊有關物質測定結果

3 討論

3.1 雜質控制的意義

雜質(+)-α-生育酚為合成型的維生素E已知雜質,為生產過程中產生的工藝雜質,使用合成型維生素E作為原料生產制劑,制劑中可能引入(+)-α-生育酚,因此對標示為天然型的維生素E制劑,檢查雜質(+)-α-生育酚,能有效辨別制劑是否摻雜合成型原料,對制劑的質量控制意義重大。《中華人民共和國藥典》2020年版二部收載的“維生素E軟膠囊”中有關物質僅對原料藥和原料藥為合成型的維生素E軟膠囊制劑的有關雜質進行控制,未對原料藥為天然型的維生素E軟膠囊制劑進行有關雜質控制。因此,對原料藥為天然型的維生素E軟膠囊制劑進行有關雜質控制有利于提高天然型維生素E軟膠囊的藥品安全性和制劑質量。本研究建立的方法可有效測定天然型維生素E軟膠囊中的雜質(+)-α-生育酚及總雜質含量,對天然型維生素E軟膠囊質量控制和提高藥品質量安全性以及對打擊原料藥摻雜合成型成分以次充好的違法行為具有重要意義。

3.2 色譜條件選擇

本試驗對色譜柱、進樣口溫度、柱溫、檢測器溫度、分流比進行考察[10],因系統適用性試驗中要滿足主成分與雜質成分分離度要求,通過試驗最終確定色譜柱為CD-1毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)、柱溫為265 ℃、進樣口溫度為290 ℃、檢測器溫度為300 ℃、V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24、分流比20∶1時,主成分維生素E與雜質(+)-α-生育酚能實現良好分離,分離度為3.256,符合系統適用性試驗的分離度要求。

3.3 測定結果分析

根據維生素E軟膠囊質量控制要求,維生素E軟膠囊中如檢測出雜質峰,雜質(+)-α-生育酚峰面積不得大于1.0%,其他單個雜質峰面積不得大于1.5%,總雜質不得大于2.5%。試驗中測定5批次天然維生素E軟膠囊樣品,均未檢出雜質(+)-α-生育酚(或小于檢測限),未知最大單個雜質的含量均小于1.5%,總雜質的含量也均小于2.5%,測定的5批次樣品有關物質均達到藥典規定要求,表明用于試驗的5批次天然維生素E軟膠囊樣品中使用的原料藥為天然型維生素E,不存在摻雜合成型原料藥或使用合成型代替天然型制成制劑的現象,產品質量得到較好保證。

3.4 小結

本試驗對5個批次的天然型維生素E軟膠囊有關物質進行測定,測得5個批次樣品中有關物質均達到藥典規定要求。本研究在參考總結相關文獻和標準的基礎上,優化了毛細管氣相色譜條件,該方法線性關系好,專屬性、精密度、重復性良好。通過考察加標回收對方法進行了驗證,得到了較好的準確度。該方法樣品處理操作簡便、快捷,結果準確可靠,可用于天然型維生素E軟膠囊中有關物質的測定和質量控制。