泰拉霉素注射液對自然感染豬呼吸道疾病的治療效果

王 玲，趙新祥，金永東，楊申永，李建國，吳聰明

（ 1. 艾美科健（中國）生物醫(yī)藥有限公司，山東 濟寧 272073 ； 2. 中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193 ）

豬呼吸道疾病是規(guī)模化、集約化養(yǎng)豬場經(jīng)常發(fā)生的疾病。該病病因復雜，除多種原發(fā)性和繼發(fā)性病原可引起豬呼吸道疾病外，豬群飼養(yǎng)密度過大、營養(yǎng)不良、免疫功能低下、豬舍通風不良、飼養(yǎng)環(huán)境質(zhì)量差、季節(jié)交替等因素均可成為呼吸道疾病暴發(fā)的誘因。目前，豬肺炎支原體（MHP）、胸膜肺炎放線桿菌（APP）、多殺性巴氏桿菌（PM）、副豬嗜血桿菌（HPS）、支氣管敗血波氏桿菌（BB）等是引起我國豬群暴發(fā)呼吸道疾病的常見病原菌且尚無有效疫苗預防，嚴重影響了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[1-3]。

泰拉霉素（tulathromycin）是一種動物專用大環(huán)內(nèi)酯類半合成抗生素，主要用于治療由敏感菌引起的牛、豬呼吸系統(tǒng)疾病。泰拉霉素不僅對放線桿菌、支原體、巴氏桿菌、嗜血桿菌等病原菌的抗菌作用較強，而且具有用量少、一次給藥、低殘留等優(yōu)點[4-7]。我國現(xiàn)行使用較為廣泛的大環(huán)內(nèi)酯類藥物有紅霉素、泰樂菌素、替米考星等，這些藥物雖然在控制動物呼吸系統(tǒng)疾病中發(fā)揮了重要作用，但隨著使用時間延長均出現(xiàn)了不同程度的耐藥性，導致治療效果逐步降低。因此需要加強泰拉霉素等新型抗菌藥物的開發(fā)與應用[8-10]。基于此，本研究選擇兩種泰拉霉素注射液[11-13]分別作為對照藥和受試藥，開展針對自然感染呼吸道疾病豬的治療試驗，以明確按推薦劑量使用該制劑的有效性和安全性，為臨床合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

本試驗在山東省某規(guī)模化豬場開展，試驗豬場飼養(yǎng)的700余頭50～70日齡保育豬中有200余頭先后發(fā)病，表現(xiàn)出發(fā)熱、呼吸困難、精神沉郁、食欲減退等臨床癥狀。通過臨床檢查、病理剖檢和實驗室檢測（包括呼吸道疾病相關病原菌分離鑒定、呼吸道疾病相關病毒和支原體抗體檢測），確診為由APP、HPS、PM單一或混合感染引起的呼吸道疾病，并從患病豬群中按標準遴選120頭豬開展試驗。

試驗豬入選標準：肛溫≥40 ℃，且呼吸異常（呼吸評分≥2）、狀態(tài)異常（狀態(tài)評分≥2）。

試驗豬排除標準：患有非呼吸道相關疾病；過度虛弱，通過單一或單次用藥治療不太可能改善；接種過呼吸道疾病相關細菌（APP、PM、HPS等）疫苗；試驗前15 d內(nèi)使用過可能影響本試驗的藥物（如全身性使用糖皮質(zhì)激素、非甾體抗炎藥、抗菌藥物等）。

1.1.2 試驗藥物兩種泰拉霉素注射液，分別設為對照藥和受試藥，規(guī)格均為50mL∶5 g，包裝為50 mL/瓶。

1.1.3 試劑與設備

試驗試劑：TSA培養(yǎng)基、TSB培養(yǎng)基、小牛血清及相關病原抗體檢測ELISA試劑盒等。

試驗設備：注射器、體溫計、滅菌棉拭子、PCR儀、電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、離心機等。

上述試劑與設備均由中國農(nóng)業(yè)大學國家獸藥安全評價中心提供。

1.2 試驗設計

從發(fā)病豬群中遴選120 頭患病豬，隨機分成2 組（Ⅰ組、Ⅱ組），每組60頭豬，每圈即1個重復。將試驗豬轉移至隔離豬舍內(nèi)分批、分圈飼養(yǎng)（每批豬一個圈，其中A圈Ⅰ組、Ⅱ組各15頭，B圈Ⅰ組、Ⅱ組各12頭，C圈Ⅰ組、Ⅱ組各11 頭，D 圈Ⅰ組、Ⅱ組各14 頭，E 圈Ⅰ組、Ⅱ組各8 頭），試驗期間飼喂不含任何藥物成分的飼料，自由采食和飲水；圈舍清掃、消毒按豬場常規(guī)進行。試驗期11 d。

試驗開始時，對每頭試驗豬進行臨床檢查、采集鼻拭子和稱重后給藥治療。Ⅰ組豬給予受試藥，Ⅱ組豬給予對照藥，給藥劑量均為2.5 mg/kg 體重（1 mL/40 kg 體重），均只用藥1次，在耳后側中部進行肌內(nèi)注射（當注射劑量超過2 mL時需分點注射）。

試驗期間允許使用的藥物種類：針對病毒的疫苗、抗寄生蟲藥物、改善消化功能的藥物；不允許使用的藥物種類：全身性使用的抗菌藥或抗炎藥、針對試驗藥物目標病原（APP、PM、HPS等）的疫苗。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 體溫、呼吸及狀態(tài)

試驗期間每日在固定時間對試驗豬進行臨床檢查，包括測量體溫（肛溫）并參考文獻[14]進行呼吸和狀態(tài)評分，評估標準見表1。

表1 試驗豬呼吸和狀態(tài)評估標準Tab.1 Criteria for respiratory and state assessment of the experimental pigs

1.3.2 病原菌檢出率

給藥前采集所有試驗病豬的鼻拭子；試驗期間，若試驗豬出現(xiàn)死亡，采集其肺部病料；試驗結束前，采集所有未退出試驗病豬的鼻拭子。上述采集樣品置于保溫箱保存（2～8 ℃）送至實驗室檢測。使用含牛血清（體積分數(shù)5%）和NAD（10 mg/L）的TSA 培養(yǎng)基分離呼吸道疾病相關病原菌；挑取可疑菌落染色鏡檢后，轉接至含牛血清（體積分數(shù)5%）和NAD（10 mg/L）的TSB 培養(yǎng)基進行純培養(yǎng)；參考文獻[15]設計APP、PM、HPS 等相關病原菌的特異性引物進行PCR鑒定純化菌株。若無PCR擴增產(chǎn)物，則參照文獻[16]設計細菌16S rRNA基因的通用引物進行PCR，獲得相關目的片段后進行測序鑒定。

1.3.3 死亡率

統(tǒng)計試驗期間兩組試驗豬的死亡數(shù)，計算死亡率。

1.3.4 治療效果

自試驗開始時臨床檢查至給藥后臨床檢查前的階段內(nèi)，若試驗病豬發(fā)生死亡，不應判為治療無效。試驗第1～第9 d，每日臨床檢查若發(fā)現(xiàn)試驗豬的狀態(tài)評分為3或呼吸評分為3，且伴有直腸溫度≥40.0 ℃，則判定為治療無效，并進行安樂死剖檢；若試驗豬出現(xiàn)嚴重的非呼吸道疾病需要使用其他抗菌藥物或抗炎藥物進行治療，則退出試驗（需采集鼻拭子）且判定為治療無效。

試驗結束時，對所有未退出試驗病豬進行臨床檢查，采集鼻拭子并稱重后結束試驗。若發(fā)現(xiàn)試驗豬的狀態(tài)評分=3 或呼吸評分=3，且伴有直腸溫度≥40.0 ℃，則判定為治療無效，并進行安樂死剖檢；若試驗豬出現(xiàn)嚴重的非呼吸道疾病要使用其他抗菌藥物或抗炎藥物進行治療，則判定為呼吸道治療無效。試驗結束時，未退出試驗的病豬體溫正常（肛溫38.0～39.5 ℃）且呼吸道疾病癥狀消失（狀態(tài)評分和呼吸評分均為0），則視為治愈；未退出試驗的病豬經(jīng)判斷為治愈或體溫趨于正常（肛溫＜40.0 ℃）且呼吸道疾病癥狀有好轉（狀態(tài)評分和呼吸評分均＜2），則視為治療有效。記錄相關數(shù)據(jù)并計算治愈率、有效率、無效率等。

1.3.5 不良反應發(fā)生情況

試驗期間記錄試驗病豬出現(xiàn)的其他任何不良反應（如呼吸急劇加快、心跳明顯升高、可視黏膜水腫、嘔吐、腹瀉等）及發(fā)生的不良事件。若有其他不良反應發(fā)生需進行全面診斷，預期不良反應后果，評估不良反應與試驗藥物之間的因果關系，采取處置措施（如給予緊急治療）等。

同時觀察試驗病豬注射部位是否存在異常反應（如水腫、硬結、蜂窩織炎、血腫、膿腫、壞死等），若同一病豬有多個注射部位，僅記錄最嚴重的反應。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS 軟件進行數(shù)據(jù)分析。兩組試驗豬的體溫、呼吸評分、狀態(tài)評分等數(shù)據(jù)采用T 檢驗進行比較，結果以“平均值±標準差”表示；兩組試驗豬的治愈率、有效率、無效率、死亡率、病原菌檢出率等采用卡方檢驗進行比較。P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 試驗期間豬體溫與呼吸、狀態(tài)評分變化情況（見表1～表3）

由表1 可知，試驗第1 d，Ⅰ組和Ⅱ組豬平均體溫均高于40 ℃；試驗第2 d，兩組豬的體溫均降至40 ℃以下，與試驗第1 d相比顯著降低（P＜0.05）；試驗第3 d，兩組豬的體溫均降至39.5 ℃以下，之后一直處于正常范圍（38.0～39.5 ℃）。試驗第1、2、6、8、9、10 d，兩組豬的平均體溫差異均不顯著（P＞0.05）；試驗第3、4、5、11 d，Ⅰ組豬平均體溫均顯著高于Ⅱ組（P＜0.05）。

表1 試驗期間豬體溫變化情況Tab.1 Temperature changes of the pigs during the experiment 單位：℃

由表2 可知，試驗第1 d，Ⅰ組和Ⅱ組豬的平均呼吸評分均高于2；試驗第2 d，兩組豬的平均呼吸評分均低于2，與試驗第1 d相比顯著降低（P＜0.05）；試驗第3～第11 d，兩組豬的平均呼吸評分均呈持續(xù)下降趨勢，其中試驗第5 d的平均呼吸評分為0.9，試驗第11 d 的平均呼吸評分僅為0.1（僅個別患病豬存在輕度呼吸異常）。試驗期間兩組豬的呼吸評分差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 試驗期間豬呼吸評分變化情況Tab.2 Respiratory scores changes of the pigs during the experiment

由表3 可知，試驗第1 d，Ⅰ組和Ⅱ組豬狀態(tài)評分均高于2；試驗第2 d，兩組豬狀態(tài)評分均低于2，與試驗第1 d相比顯著降低（P＜0.05）；試驗第3～第11 d，兩組豬的狀態(tài)評分均呈持續(xù)下降趨勢，其中試驗第6 d 的狀態(tài)評分為0.8，試驗第11 d 的狀態(tài)評分僅為0.2（僅少數(shù)患病豬仍存在輕微狀態(tài)異常）。試驗期間兩組豬的狀態(tài)評分差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 試驗期間豬狀態(tài)評分變化情況Tab.3 Status scores changes of the pigs during the experiment

2.2 試驗期間豬鼻拭子呼吸道疾病病原菌檢出率（見表4）

表4 試驗期間豬鼻拭子呼吸道疾病病原菌檢出率Tab.4 Detection rate of respiratory pathogens in the pig nose swabs during the experiment

由表4 可知，試驗第1 d，120 頭病豬中有51 頭的鼻拭子分離出APP，分離率為42.5%；有41 頭的鼻拭子分離出HPS，分離率為34.2%；有28 頭的鼻拭子分離出PM，分離率為23.3%。除上述3 種病原菌外，從病豬鼻拭子中還分離出1～3種其他細菌，包括鏈球菌、葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、克雷伯菌、支氣管敗血波氏桿菌、不動桿菌等，分離率為100%。分別比較Ⅰ組和Ⅱ組APP、HPS、PM 的分離率，差異均不顯著（P＞0.05），兩組豬分離的其他細菌種類也較一致。試驗第11 d時，所有未退出試驗豬的鼻拭子均未分離出APP、HPS、PM，也未分離出鏈球菌和支氣管敗血波氏桿菌，但仍可分離出葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、無雷伯菌、不動桿菌等。兩組豬分離的細菌種類仍較一致。

2.3 治療期間試驗豬死亡率

統(tǒng)計試驗期間兩組豬的死亡情況，結果顯示，Ⅰ組有2 頭豬死亡，死亡率為3.3%（2/60）；Ⅱ組有1 頭豬死亡，死亡率為1.7%（1/60）。兩組豬的死亡率無明顯差異。

死亡豬生前均持續(xù)存在低熱、呼吸困難、狀態(tài)較差等臨床表現(xiàn)。對3頭死亡豬進行剖檢，病理變化均集中在胸腔，主要表現(xiàn)為胸腔積液，肺充血、出血、局灶性壞死、肝變，肺表面附有纖維蛋白，肺與胸膜粘連等。采集3頭死亡豬的病料（肺組織）進行病原菌分離鑒定，2 頭病死豬分離出克雷伯菌，1頭病死豬分離出不動桿菌。

2.4 試驗豬的治愈率、有效率和無效率（見表5）

表5 試驗豬的治愈率、有效率和無效率Tab.5 Cure rate, efficiency and inefficiency of the experimental pigs 單位：%

由表5可知，Ⅰ組豬的治愈率、有效率、無效率分別為75.0%、96.7%、3.4%；Ⅱ組豬的治愈率、有效率、無效率分別為78.3%、98.3%、1.7%。兩組病豬的治愈率、有效率、無效率差異均不顯著（P＞0.05）。

2.5 試驗豬不良反應發(fā)生情況

所有試驗豬用藥后，注射部位均未見疼痛表現(xiàn)，也未出現(xiàn)水腫、硬結、蜂窩織炎、血腫、膿腫、壞死等異常反應，更未出現(xiàn)過敏體征（如呼吸急劇加快、心跳明顯升高、可視黏膜水腫、嘔吐、腹瀉等）。試驗期間，Ⅰ組有2頭豬死亡、Ⅱ組有1頭豬死亡。對死亡豬進行剖檢發(fā)現(xiàn)，病死豬均存在典型呼吸道疾病病變，而且從肺組織中分離出致病菌，故推測為呼吸道疾病引起豬死亡，與藥物不良反應無關。

3 討論

豬呼吸道疾病的病因復雜，可由多種病原感染引起。在做好相關病毒、支原體感染免疫預防前提下，由于氣候變化等原因造成豬體抵抗力下降，其鼻腔定植的APP、HPS、PM等病原菌可侵染下呼吸道引起豬呼吸道疾病[17]。泰拉霉素注射液對自然感染呼吸道疾病的患病豬具有良好的治療效果[18]。按2.5 mg/kg 體重劑量單次肌內(nèi)注射泰拉霉素注射液，用藥后試驗豬鼻腔定植的APP、HPS、PM等病原菌可被清除，發(fā)熱、呼吸困難、精神沉郁、食欲不振等癥狀可獲得快速、持續(xù)改善直至消除，用藥后第10 d 試驗豬的治愈率超過75%，有效率超過95%。此外，泰拉霉素注射液用于治療呼吸道疾病的患病豬較安全。本試驗按2.5 mg/kg 體重劑量單次肌內(nèi)注射泰拉霉素注射液，試驗豬注射部位未出現(xiàn)疼痛、水腫、壞死等刺激性反應，也未見其他過敏體征，與前人文獻報道一致[19]。

4 結論

本研究表明，泰拉霉素注射液用于治療豬呼吸道疾病安全、有效，臨床中可推廣應用，推薦用法為肌內(nèi)注射，劑量為2.5 mg/kg（以泰拉霉素計，相當于1 mL/40 kg體重）。