基于高頻超聲研究乳腺浸潤性導(dǎo)管癌鈣化、血流與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

曲美佳 陳鳳艷 王專研 皮艷敏 張杰 苗智

(1佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院局部解剖學(xué)教研室,黑龍江 佳木斯 154002;2黑龍江省微生物-免疫調(diào)解網(wǎng)絡(luò)與相關(guān)疾病重點實驗室;3雙鴨山市人民醫(yī)院超聲科)

乳腺癌已發(fā)展為女性惡性腫瘤的第一位,其中以浸潤性導(dǎo)管癌為主〔1〕。乳腺癌常發(fā)生于40～60歲的中老年婦女。乳腺癌在男性中較罕見,僅占到所有乳腺癌的1%左右〔2〕。Lei等〔3〕報道顯示,我國女性乳腺癌的發(fā)病率和死亡率將持續(xù)上升,至2030年將分別明顯增加至36.27%和54.01 %。Shi等〔4〕對我國老年女性乳腺癌發(fā)病率和死亡率評估顯示,預(yù)計至2023年將分別增加40%和52%。

乳腺癌的檢查方式多種多樣,以乳腺X線及超聲檢查居多。目前來講,大量研究〔5～7〕顯示,雙側(cè)乳腺X線攝片與乳腺超聲聯(lián)合檢查,可使乳腺癌確診率顯著提高。多項研究結(jié)果表明,超聲診斷可使乳腺癌診斷準(zhǔn)確率顯著提高,其中彩色多普勒超聲檢查的準(zhǔn)確度、靈敏度及特異性最高,達(dá)97.31%、98.46%、96.15%〔8～10〕。此外,超聲引導(dǎo)下乳腺穿刺診斷乳腺癌的診斷率最高可達(dá)100%,這為乳腺癌的早期治療提供了重要依據(jù)〔11,12〕。本實驗運用高頻超聲記錄乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的鈣化及血流情況,并探討兩者與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1研究對象 收集2019年1月至2021年12月間于雙鴨山市人民醫(yī)院行穿刺活檢或手術(shù)治療的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者102例。納入標(biāo)準(zhǔn):①患者皆為女性;②有完整超聲影像學(xué)資料;③有完整臨床病理資料;④經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。排除超聲檢查前已有手術(shù)和治療史者。

1.2超聲檢查與圖像分析 運用高頻超聲診斷儀,線陣探頭,探頭頻率均調(diào)整至7.5 MHz以上。檢查前,患者保持10～15 min的靜息,待患者情緒、體征穩(wěn)定后,囑患者平臥位或側(cè)臥位,暴露雙側(cè)乳腺,依次對雙側(cè)乳腺呈放射狀和腋下淋巴結(jié)掃查。根據(jù)超聲圖像中是否有強回聲,判定有無鈣化。根據(jù)高頻超聲診斷儀中的彩色多普勒技術(shù),判定腫瘤圖像中血流情況。腫瘤內(nèi)的血流參考Adler血流分級標(biāo)準(zhǔn):腫塊內(nèi)無血流信號為0級;腫塊內(nèi)有少量血流信號,僅有1～2個點狀或細(xì)棒狀腫瘤血管為Ⅰ級;腫塊內(nèi)有中量血流信號,可見1個較長的血管穿入病灶,其長度大于等于腫瘤的半徑,或有3～4個點狀血管為Ⅱ級;腫塊內(nèi)有多量血流信號,可有2個較長血管或≥5個點狀血管為Ⅲ級。將上述0和Ⅰ級設(shè)定為乏血組、Ⅱ和Ⅲ級設(shè)定為豐富組。

1.3免疫組化染色 蠟塊切成厚度為5 μm切片,撈至載玻片上并攤片烘烤30 min;60 ℃烤片20 min以促使石蠟快速融化;切片于新鮮的二甲苯溶液中充分提拉、浸泡4次,每次10 min;切片經(jīng)梯度酒精入水,隨后浸入磷酸鹽緩沖液(PBS)中;切片浸入檸檬酸鈉修復(fù)液中,并用中檔微波加熱2次,每次10 min;冷卻至室溫后,PBS洗滌;切片置于3%過氧化氫中浸泡15 min; PBS洗滌;滴加封閉用羊血清試劑,室溫孵育60 min;甩去多余液體,滴加一抗,其中雌激素受體(ER)一抗購自上海基因公司(即用型),人表皮生長因子受體(HER)2一抗購自德國羅氏公司(即用型),孕激素受體(PR)一抗購自德國羅氏公司(稀釋比1∶2)、Ki-67一抗購自廈門通靈公司(稀釋比1∶150);4 ℃冰箱孵育過夜,PBS洗滌;滴加二抗,37 ℃孵育20 min;滴加鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(SABC),37 ℃孵育30 min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色、蘇木素復(fù)染和鹽酸-乙醇分化后,用梯度酒精脫水;二甲苯透明、中性樹膠封片,于鏡下觀察并進(jìn)行圖像采集。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS26.0軟件進(jìn)行χ2檢驗、Fisher精確檢驗。

2 結(jié) 果

2.1有無鈣化與浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤相關(guān)參數(shù)的關(guān)系 與無鈣化組比較,有鈣化組腫瘤直徑明顯增大,Ki-67表達(dá)明顯增多(P<0.05)。但兩組在年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、ER、PR和HER2表達(dá)水平上差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

2.2鈣化分布與浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤相關(guān)參數(shù)的關(guān)系 與鈣化散在分布組比較,鈣化簇狀分布組腫瘤直徑顯著增大,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著增強,組織學(xué)分級顯著增高,Ki-67表達(dá)顯著增多(P<0.05)。但兩組年齡、ER、PR和HER2表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。見表1、圖1。

2.3血流信號與浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤相關(guān)參數(shù)的關(guān)系 與乏血組比較,血流豐富組腫瘤直徑顯著增大,Ki-67表達(dá)顯著增多(P<0.05)。但兩組在年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分級、ER、PR和HER2表達(dá)上差異無顯著性(P>0.05)。見表1、圖1。

表1 有無鈣化、鈣化分布和血流信號與浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤相關(guān)參數(shù)的關(guān)系

圖1 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者鈣化分布超聲及乏血組和血流豐富組Ki-67表達(dá)

3 討 論

乳腺癌的鈣化是影像學(xué)中重要的評價指標(biāo),不論是乳腺X線、超聲,還是磁共振檢測,均對鈣化有一定的描述。乳腺鉬靶雖然被認(rèn)為是微鈣化檢查的金標(biāo)準(zhǔn),然而其對致密型及多腺體的乳腺診斷能力較差。由于中國女性的乳腺主要以致密型腺體為主,且有相對較少的脂肪含量,因而大多數(shù)中國女性患者并不適用于乳腺鉬靶檢查〔12〕。隨著超聲影像技術(shù)的發(fā)展,多種檢查方式如高頻超聲、螢火蟲成像、彈性成像、彩色多普勒超聲等不斷被開發(fā),這大大提高超聲檢查鈣化的能力〔13〕。因此,超聲成像具有潛在成為檢查乳腺微鈣化的一種更有效、安全的檢查方法。

乳腺癌的鈣化有多種形式,其中微鈣化是區(qū)分乳腺癌良惡性的一項重要指標(biāo)。根據(jù)鈣化的內(nèi)在化學(xué)成分與良惡性病變的關(guān)系,可將微鈣化分為Ⅰ型草酸鈣(CO)和Ⅱ型羥基磷灰石鈣(HA)兩類,乳腺病變中以CO為主要成分的微鈣化僅出現(xiàn)于如增生性乳腺病和小葉原位癌等非侵襲性乳腺疾病中,而HA僅在未分化導(dǎo)管癌等侵襲性惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn)〔14,15〕。另外,HA可增加白細(xì)胞介素(IL)-8等腫瘤促進(jìn)細(xì)胞因子的表達(dá),因此可促進(jìn)乳腺腫瘤的惡性潛能〔16〕。研究發(fā)現(xiàn),乳腺腫瘤細(xì)胞可分泌多種炎性細(xì)胞因子,如CC趨化因子配體(CCL)5、CCL2、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)-1,它們可導(dǎo)致大量的巨噬細(xì)胞浸潤到腫瘤部位,這部分聚集的巨噬細(xì)胞統(tǒng)稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(AMS),它們可共同為微鈣化的成核中心提供基質(zhì)囊泡〔17〕。此外,大量研究表明,參與形成或調(diào)節(jié)鈣化的一些因子,如骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)2、骨橋蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)和骨連接蛋白(OSN)等與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),且與乳腺癌的生存率、復(fù)發(fā)率等亦密切相關(guān)〔18,19〕。本研究顯示,與無鈣化組比較,有鈣化組乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的腫瘤直徑顯著增大,Ki-67表達(dá)顯著增多。進(jìn)一步分析顯示,與鈣化散在分布組比較,鈣化簇狀分布組腫瘤直徑顯著增大,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著增強,組織學(xué)分級顯著增高、Ki-67表達(dá)顯著增多。Ki-67是在所有脊椎動物中均表達(dá)的核DNA結(jié)合蛋白,它可存在于細(xì)胞周期的G1、S和G2期,因此是一種廣泛用于腫瘤分級的增殖標(biāo)志物〔20〕。目前,Ki-67已被認(rèn)為是乳腺癌亞型分類、預(yù)后和治療反應(yīng)預(yù)測的一個有用的臨床標(biāo)志物,且它還可作為評估患者無復(fù)發(fā)生存率的預(yù)測因子〔21〕。

乳腺癌生長有賴于自身的血管滋養(yǎng),因此血流信號是評價其惡性程度的指標(biāo)之一。本研究結(jié)果表明,血流可作為檢測乳腺癌的重要指標(biāo)。張蕾〔22〕的彩色多普勒超聲研究顯示,當(dāng)乳腺腫塊表現(xiàn)為條狀血流信號時,PR陽性的可能性將增大。然而,本實驗結(jié)果沒有顯示血流與PR、ER和HER2表達(dá)具有相關(guān)性。

綜上,乳腺浸潤性導(dǎo)管癌發(fā)生鈣化、鈣化呈簇狀分布和血流豐富與腫瘤直徑增大、Ki-67表達(dá)增多等病理參數(shù)有關(guān),提示高頻超聲檢查為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的臨床診斷及預(yù)后評估等提供一定的參考依據(jù)。