HPLC測(cè)定食品中納他霉素前處理?xiàng)l件優(yōu)化

摘""""" 要： 采用兩種不同的前處理方法分別提取酸奶、糕點(diǎn)、果汁等食品中的納他霉素，并使用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定食品中納他霉素的含量，并對(duì)其測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，提高檢驗(yàn)效率。分別按照《食品中納他霉素的測(cè)定 液相色譜法》（GB/T 21915—2008）中標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法和優(yōu)化的前處理方法檢測(cè)食品中納他霉素的含量。結(jié)果表明：采用兩種前處理方法提取納他霉素所得液相色譜峰均可與雜質(zhì)峰完全分離，不影響準(zhǔn)確定量，且優(yōu)化的前處理方法操作簡(jiǎn)單，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更好。

關(guān)" 鍵" 詞：高效液相色譜；食品；納他霉素；前處理方法

中圖分類號(hào)：O657.7⁺2"""" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A"""" 文章編號(hào)： 1004-0935（2023）08-1237-04

納他霉素，別名游霉素、匹馬霉素，是由納他鏈霉菌受控發(fā)酵制得的一種近白色或奶油黃色的結(jié)晶粉末，通常以烯醇式結(jié)構(gòu)存在^[1]。它是一種無(wú)臭、無(wú)味、低劑量且安全性高的食品防腐劑，可有效延長(zhǎng)食品的保質(zhì)期，防止酵母和霉菌引起的變質(zhì)。目前在世界范圍內(nèi)約有30多個(gè)國(guó)家將其作為天然安全的食品防腐劑或抗菌劑使用^[2-3]。尤其是在焙烤食品中使用納他霉素，對(duì)面團(tuán)進(jìn)行表面處理，延長(zhǎng)保質(zhì)期效果非常明顯^[4-5]。納他霉素是一種天然防腐劑，具有安全、健康的特點(diǎn)，是備受人們的青睞的微生物防腐劑^[6-8]。

目前，食品中納他霉素的檢測(cè)方法為單一法檢測(cè)，主要為高效液相色譜法^[9-10]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 21915—2008中規(guī)定了酸奶、糕點(diǎn)、果汁等不同食品的標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法。但是，在使用高效液相色譜法測(cè)定食品中納他霉素含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)使用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法處理樣品時(shí)，需要對(duì)不同的食品類別，分別進(jìn)行不同的處理，操作步驟較多，過(guò)程較為繁瑣。當(dāng)有些基質(zhì)中干擾較為嚴(yán)重時(shí)，則需要調(diào)試色譜條件，對(duì)干擾峰進(jìn)行分離，從而進(jìn)一步準(zhǔn)確定量，因此，工作效率明顯下降。

本文則對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，簡(jiǎn)化前處理過(guò)程，提高工作效率，并將優(yōu)化的前處理方法和標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法分別進(jìn)行分析研究，討論兩種不同提取方法測(cè)定納他霉素的結(jié)果是否存在差異性。采用不同的兩種提取方法分別測(cè)定酸奶、糕點(diǎn)、果汁等不同食品中的納他霉素含量，對(duì)兩種不同前處理方法測(cè)定結(jié)果的再現(xiàn)性進(jìn)行比較。

1" 材料與方法

1.1" 材料與試劑

酸奶、糕點(diǎn)、果汁，均為市售；乙酸（冰醋酸），優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)有限公司；甲醇，色譜純，國(guó)藥集團(tuán)有限公司；納他霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，CDCT-C16208400，純度0.9041，DR；實(shí)驗(yàn)用水， GB/T 6682規(guī)定的超純水。

1.2" 主要設(shè)備和儀器

高效液相色譜儀（Waters e2695），配2998PDA檢測(cè)器，Waters美國(guó)公司；電子天平，QUINTIX213-1CN，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；KQ-250DB型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；多試管渦旋混合器，DMV-16，廣東省科寅公司；醫(yī)用離心機(jī)，H1750R，湘儀離心機(jī)儀器有限"" 公司。

1.3" 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1" 標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法

酸奶樣品：準(zhǔn)確稱取10.00 g樣品，加入30 mL甲醇溶液，超聲提取30 min后加水10 mL，搖勻后冷凍1 h，取出后立即過(guò)濾，濾液放置至室溫，依次經(jīng)0.45 μm和0.22 μm濾膜過(guò)濾，待液相色譜測(cè)定。

糕點(diǎn)樣品：準(zhǔn)確稱取5.00 g糕點(diǎn)樣品，于離心管中，加入30 mL甲醇提取，進(jìn)行超聲30 min，再加入水10 mL，然后混勻，設(shè)置相對(duì)離心力為""""" 6 790×g，離心5 min，取出后上清液依次經(jīng)0.45 μm和0.22 μm濾膜過(guò)濾，濾液待液相色譜測(cè)定。

果汁樣品：準(zhǔn)確吸取10.0 mL果汁樣品，加入30 mL甲醇溶液，超聲提取30 min，提取液依次經(jīng)0.45 μm和0.22 μm濾膜過(guò)濾，濾液待液相色譜測(cè)定。

1.3.2" 優(yōu)化的前處理方法

準(zhǔn)確稱取5 g（精確到0.01 g）或5.0 mL制備好的樣品（酸奶、糕點(diǎn)、果汁等）于具塞離心管中，加甲醇溶液40 mL左右，進(jìn)行渦旋振蕩，混合均勻，在水浴中超聲30 min，冷卻至室溫后，置于離心機(jī)中，設(shè)置為3 500 r·min^-1，離心3～5 min，轉(zhuǎn)移全部上清液于50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇進(jìn)行定容至刻度線，充分混勻，吸取適量的上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，待液相色譜測(cè)定。

1.3.3" 儀器條件

色譜柱為C18柱，4.6 mm×150 mm，5 μm；流動(dòng)相為甲醇+水+乙酸（體積比60∶40∶5）；流速為1.0 mL·min^-1；進(jìn)樣量為10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為305 nm。

2" 結(jié)果與討論

2.1" 前處理方法對(duì)納他霉素測(cè)定譜圖的影響

分別采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法和優(yōu)化的前處理方法測(cè)定食品中的納他霉素含量，相應(yīng)的圖譜如圖1至圖4所示。

圖1和圖2分別為納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖和納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰吸收光譜圖，由此可以看出經(jīng)甲醇溶解標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，反相液相色""" 譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定納他霉素，所得色譜峰兩邊對(duì)稱，無(wú)拖尾，不分叉，較為理想^[11]，且納他霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最大吸收在305 nm。

圖3為標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法分別測(cè)定酸奶、糕點(diǎn)和果汁中納他霉素含量的液相色譜圖，圖4為優(yōu)化的前處理方法分別測(cè)定酸奶、糕點(diǎn)和果汁中納他霉素含量的液相色譜圖。由圖3、圖4可知，在相同的基質(zhì)中，采用兩種不同的前處理方法提取納他霉素所得的色譜峰相似，采用標(biāo)準(zhǔn)前處理方法測(cè)得的納他霉素色譜峰峰形對(duì)稱性稍差，而優(yōu)化的前處理方法測(cè)得的納他霉素色譜峰峰形更加對(duì)稱規(guī)整。采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法測(cè)定的納他霉素，在不同的基質(zhì)影響下，所得的液相色譜峰略有差異，但是均可與干擾峰完全分離，不影響含量的測(cè)定。

采用優(yōu)化的前處理方法測(cè)定的納他霉素，在不同基質(zhì)情況下，納他霉素色譜峰峰形對(duì)稱，無(wú)肩峰，且雜質(zhì)峰與納他霉素譜峰不產(chǎn)生包裹，不會(huì)對(duì)納他霉素的積分定量產(chǎn)生干擾。因此，優(yōu)化的前處理方法操作簡(jiǎn)單，不需要區(qū)分食品類別，同時(shí)可準(zhǔn)確定量，進(jìn)而提高工作效率。

2.2" 前處理方法對(duì)納他霉素含量的影響

兩種前處理方法對(duì)應(yīng)不同食品樣品測(cè)定結(jié)果見表1。

分別采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法和優(yōu)化的前處理方法對(duì)酸奶、糕點(diǎn)和果汁3種食品樣品進(jìn)行前處理，采用高效液相色譜法進(jìn)行納他霉素含量的測(cè)定，供試品編號(hào)為1^#～6^#。從表1中可以看出，采用兩種不同的前處理方法測(cè)得酸奶樣品、糕點(diǎn)樣品和果汁樣品的納他霉素分別為5.97 mg·kg^-1、5.81 mg·kg^-1、 3.80 mg·L^-1和5.82 mg·kg^-1、5.79 mg·kg^-1、3.79 mg·L^-1，精密度分別為3.75%、4.11%、4.32%和2.08%、2.64%、2.87%。采用兩種不同的前處理方法所測(cè)得的納他霉素含量相近，均能滿足測(cè)試要求。此外，采用優(yōu)化的前處理方法進(jìn)行處理的樣品得到的測(cè)定結(jié)果精密度較小，說(shuō)明優(yōu)化的前處理方法不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性更好。

3" 結(jié) 論

本文分別采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法和優(yōu)化的前處理方法兩種前處理方法提取食品中的納他霉素，采用高效液相色譜法測(cè)定納他霉素的含量。結(jié)果表明，在相同基質(zhì)條件下，采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法和優(yōu)化的前處理方法分別提取納他霉素所得色譜峰相似，峰形基本對(duì)稱，無(wú)肩峰。在測(cè)定不同食品中納他霉素含量時(shí)，兩種前處理方法提取納他霉素所得液相色譜峰均可與雜質(zhì)峰完全分離，不影響準(zhǔn)確定量，且優(yōu)化的前處理方法不需要區(qū)分食品種類和狀態(tài)進(jìn)行處理，操作步驟簡(jiǎn)單方便，效率明顯提高。采用兩種前處理方法測(cè)定3種食品樣品中納他霉素的含量分別為5.97 mg·kg^-1、5.81 mg·kg^-1、3.80 mg·L^-1和5.82 mg·kg^-1、5.79 mg·kg^-1、3.79 mg·L^-1，精密度分別為3.75%、4.11%、4.32%和2.08%、2.64%、2.87%。兩種前處理方法均能滿足測(cè)試要求，優(yōu)化的前處理方法數(shù)據(jù)重現(xiàn)性優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法，且方法簡(jiǎn)單易行。

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Optimization of Pretreatment Conditions for HPLC

Determination of Natamycin in Food

WANG Yun， YU Jiao-zhu， LI Qiao-lian， LIU Ying， LIN Yang， ZHANG Hong-hong

（Shenyang Food and Drug Inspection Institute， Shenyang Liaoning 110122， China）

Abstract：" Two different pretreatment methods were used to extract natamycin in yogurt， cakes and fruit juices， respectively， and high performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the content of natamycin in food， and its determination results were analyzed to ensure the accuracy of the inspection results and improve the inspection efficiency. The content of natamycin in food was detected according to the standard pretreatment method and the optimized pretreatment method in \"Determination of Natamycin in Food - Liquid Chromatography\" （GB/T 21915—2008）. The results showed that the liquid chromatographic peaks obtained from the extraction of natamycin by the two pretreatment methods could be completely separated from the impurity peaks without affecting the accurate quantification， and the optimized pretreatment method was easy to operate and had better data reproducibility.

Key words：" HPLC; Food; Natamycin; Pretreatment method