不同無(wú)血清培養(yǎng)體系對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響

林惠珠?李翠平?陳曉燕?陽(yáng)莉

【摘要】 目的 探討3種不同無(wú)血清培養(yǎng)體系對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSC）體外培養(yǎng)的生物學(xué)功能的影響。方法 取3株臍帶組織，各分3組實(shí)驗(yàn)組，經(jīng)貼壁法分別置于3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系（A組：純化學(xué)成分合成的無(wú)血清培養(yǎng)體系，B組：血小板裂解物+基礎(chǔ)培養(yǎng)基的無(wú)血清培養(yǎng)體系，C組：纖維蛋白原包被+含重組人蛋白質(zhì)的無(wú)血清培養(yǎng)體系）中培養(yǎng)至第3代，比較其細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞表型、三系分化能力以及免疫調(diào)節(jié)功能。結(jié)果 3組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞均呈長(zhǎng)而扁平的梭形，貼壁生長(zhǎng)，大小均一。其增殖曲線趨勢(shì)相似，A組和B組P2、P3代次的增殖能力優(yōu)于C組（P均< 0.05）。3組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞均符合國(guó)際干細(xì)胞協(xié)會(huì)對(duì)hUC-MSC細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定的要求，A組和B組P3代次的CD29和CD90的表達(dá)量均高于C組（P均< 0.05），并且3組實(shí)驗(yàn)組均具有三系分化能力。3組實(shí)驗(yàn)組中P3代次的T淋巴細(xì)胞增殖率、Th1和Th17細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子比例均低于對(duì)照組，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+ CD25+ FOXP3+）比例均高于對(duì)照組，而3組實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05）。結(jié)論 3種不同無(wú)血清培養(yǎng)體系的hUC-MSC均能保持其基本的生物學(xué)特性和免疫調(diào)節(jié)活性，純化學(xué)成分合成的無(wú)血清培養(yǎng)體系和血小板裂解物+基礎(chǔ)培養(yǎng)基的無(wú)血清培養(yǎng)體系的增殖能力和細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)均優(yōu)于纖維蛋白原包被+含重組人蛋白質(zhì)的無(wú)血清培養(yǎng)體系。

【關(guān)鍵詞】 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；無(wú)血清培養(yǎng)體系；生物學(xué)功能

Effects of different serum-free culture systems on the biological function of hUC-MSCs Lin Huizhu， Li Cuiping， Chen Xiaoyan， Yang Li. Biotherapy Center， the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510630， China

Corresponding author， Yang Li， E-mail： yangli22@mail.sysu.edu.cn

【Abstract】 Objective To evaluate the effects of three different serum-free culture systems on the biological function of human umbilical cord mesenchymal stem cells （hUC-MSC） cultured in vitro. Methods Three strains of umbilical cord tissues were obtained，divided into 3 experimental groups and cultured to the 3rd generation （P3） in three different serum-free culture systems （Group A： serum-free culture system synthesized by pure chemical components，group B： serum-free culture system consisting of platelet lysate+basic culture medium，group C： serum-free culture system consisting of fibrinogen coating+recombinant human protein）. The cell proliferation，cell phenotype，three-line differentiation and immunomodulatory function were compared. Results All the cells in three groups were long and flat fusiform，adherent to the wall and uniform in size. The proliferation curve trend was similar，and the proliferation ability of P2 and P3 generations in groups A and B was better than that in group C （both P <

0.05）. The cells in three experimental groups all met the requirements of the International Stem Cell Society for identification of hUC-MSC cell surface markers. The expression levels of CD29 and CD90 in P3 generations in groups A and B were higher than those in group C （all P < 0.05），and all three experimental groups had the ability of three-line differentiation. Compared with the control group，the proliferation rate of T lymphocytes in P3 generation and the proportion of cytokines secreted by Th1 and Th17 cell subsets were significantly decreased in the three experimental groups，and the proportion of regulatory T cells （CD4+ CD25+ FOXP3+） was significantly increased in the three experimental groups，but there was no statistical significance among three experimental groups （all P > 0.05）. Conclusions The hUC-MSC in three groups can maintain basic biological characteristics and immunomodulatory activity. The proliferation ability and expression levels of cell surface markers in groups A and B are superior to those in group C.

【Key words】 Human umbilical cord mesenchymal stem cell； Serum-free culture system； Biological function

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSC）是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，因來(lái)源廣泛、取材方便、低免疫原性、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于基因治療等研究領(lǐng)域［1-3］。

在臨床、科研應(yīng)用前，需要通過(guò)初步分離和體外擴(kuò)增以獲得足夠數(shù)量的hUC-MSC，而影響hUC-MSC培養(yǎng)效率和安全性的關(guān)鍵因素在于細(xì)胞培養(yǎng)體系。目前，在體外選用不同培養(yǎng)體系培養(yǎng)hUC-MSC方面，無(wú)血清培養(yǎng)體系的安全性和培養(yǎng)效率優(yōu)于動(dòng)物血清培養(yǎng)體系［4-5］。無(wú)血清培養(yǎng)更利于細(xì)胞的生長(zhǎng)，容易進(jìn)行純化和下游加工、細(xì)胞功能的精準(zhǔn)評(píng)估、增強(qiáng)生長(zhǎng)和產(chǎn)量、增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)中介物的檢測(cè)，可以消除來(lái)自血清的不均一性，簡(jiǎn)化分離純化步驟和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序，避免病毒污染造成的危害。經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無(wú)血清培養(yǎng)基成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢(shì)。無(wú)血清培養(yǎng)基一般包括細(xì)胞因子合成物和人血小板裂解物，不同的培養(yǎng)基成分對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)影響較大，因此本研究采用3種不同無(wú)血清培養(yǎng)體系對(duì)hUC-MSC進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)，比較培養(yǎng)后細(xì)胞的形態(tài)、增殖能力、表面標(biāo)志物的表達(dá)率、三系分化能力及免疫調(diào)節(jié)作用的差異，以篩選出最佳的無(wú)血清培養(yǎng)體系，提高h(yuǎn)UC-MSC的細(xì)胞產(chǎn)量和質(zhì)量。

材料與方法

一、材 料

1.臍帶組織

3株約30 cm的臍帶取自中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院嶺南醫(yī)院產(chǎn)科健康供體，且供體簽署知情同意書。供體篩選標(biāo)準(zhǔn)：HBV、丙型肝炎病毒、HIV、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、梅毒檢測(cè)均為陰性，且無(wú)家族遺傳病史，無(wú)傳染病史。本研究獲中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院干細(xì)胞臨床研究機(jī)構(gòu)倫理專家委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)：［2020年份］14號(hào)）。

2.試劑與儀器

間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、消化酶均購(gòu)自友康生物科技（背景）股份有限公司。Helios UltraGROTM購(gòu)自美國(guó)AventaCell公司。MSC-T4購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。α-MEM培養(yǎng)基、RPMI 1640培養(yǎng)基、DMEM低糖培養(yǎng)基均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。OriCell人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基試劑盒均購(gòu)自廣州賽業(yè)生物科技有限公司。人淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自挪威Axis-shield公司。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）檢測(cè)試劑盒、白細(xì)胞活化試劑盒、破膜劑和流式抗體FITC-CD3、APC-CD8、PE-cy7-IFN-γ、APC-IF-17A、FITC-CD8均購(gòu)自美國(guó)BD公司。流式抗體CD29-FITC、CD31-FITC、CD34-FITC、CD44-FITC、CD45-FITC、CD73-PE、CD90-PE、CD105-PE、CD166-PE、HLA-DR-FITC均購(gòu)自美國(guó)Bechman公司。CD3細(xì)胞分選磁珠購(gòu)自德國(guó)Miltenyi公司。CellTrace? CFSE 細(xì)胞增殖試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司。CD3、CD28單克隆抗體和IL-2購(gòu)自美國(guó)Perprotech公司。倒置顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Leica DMil公司，離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司，二氧化碳培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司，流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Bechman Coulter公司。

二、方 法

1. hUC-MSC的分離培養(yǎng)

將3株臍帶組織分別設(shè)為3組實(shí)驗(yàn)組，A組：純化學(xué)成分合成的無(wú)血清培養(yǎng)體系，B組：血小板裂解物+基礎(chǔ)培養(yǎng)基的無(wú)血清培養(yǎng)體系，C組：纖維蛋白原包被+含重組人蛋白質(zhì)的無(wú)血清培養(yǎng)體系。分別剔除臍帶表皮和血管，取華通氏膠，剪至3 mm3大小平均接種于9個(gè)150 mm培養(yǎng)皿，每組3個(gè)150 mm培養(yǎng)皿，分別加入3種不同無(wú)血清培養(yǎng)基，置37 ℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞融合度達(dá)20%～30%，消化收集細(xì)胞記為P0代細(xì)胞，分別繼續(xù)傳代培養(yǎng)至P3代，凍存?zhèn)溆谩?/p>

2. hUC-MSC 的增殖活性

分別將P0代次的hUC-MSC以8 000 cells/cm2

的密度接種于培養(yǎng)瓶中，待細(xì)胞融合度為80%～

90%，收集細(xì)胞、計(jì)數(shù)、傳代至P3代，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

3. hUC-MSC表面標(biāo)志物的檢測(cè)

收集P3代次hUC-MSC，用生理鹽水洗滌后將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106 cells/mL，按每管100 μL分別加入5 μL的CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、CD166、人類白細(xì)胞抗原（HLA-DR）單克隆抗體，混勻、4 ℃避光孵育30 min；

用生理鹽水洗滌、重懸后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)hUC-MSC細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。

4. hUC-MSC體外三系潛能誘導(dǎo)分化

收集P3代的hUC-MSC按成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)2～4周，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，行茜素紅染色，鏡檢觀察。

收集P3代的hUC-MSC按成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)2～4周，4%多聚甲醛固定細(xì)胞，行油紅O染色，鏡檢觀察。

收集P3代的hUC-MSC按成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)4周后，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞團(tuán)。取人軟骨組織為陽(yáng)性對(duì)照、臍帶組織為陰性對(duì)照，切片，行蘇木素染色，鏡檢觀察。

5. hUC-MSC免疫調(diào)節(jié)功能

5.1單個(gè)核細(xì)胞的提取

通過(guò)密度梯度離心法分離30 mL健康人外周血提取單個(gè)核細(xì)胞，加入磷酸鹽緩沖溶液（PBS）重懸、用CD3磁珠分選提取細(xì)胞，分選后用FITC-CD3標(biāo)記，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的純度。

5.2羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）的標(biāo)記

取5.1步驟分選的細(xì)胞1×106 cells/mL，加入CFSE，于37 ℃避光孵育20 min；加入預(yù)冷10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，冰浴5 min，用生理鹽水洗滌3次、重懸，細(xì)胞濃度調(diào)整為1×

106 cells/mL。

5.3 hUC-MSC對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響

將1×105 cells/well的hUC-MSC與5×105 cells/well

于5.1步驟標(biāo)記的細(xì)胞置于24孔板中共培養(yǎng)，各加入CD3、CD28單克隆抗體和IL-2，以前一步驟分選的細(xì)胞和標(biāo)記的細(xì)胞做為對(duì)照孔，共培養(yǎng)4 d，收集細(xì)胞，用生理鹽水洗滌、離心、重懸，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的情況。

5.4 hUC-MSC對(duì)T淋巴細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)

將hUC-MSC與5.1步驟標(biāo)記的T淋巴細(xì)胞按1∶5的比例共培養(yǎng)4 d后，按白細(xì)胞活化試劑盒說(shuō)明刺激收集細(xì)胞，用FITC-CD3、APC-CD8和FITC-CD8標(biāo)記、破膜，分別進(jìn)行IFN-γ（PE-Cy7）， TNF-α（PE）和IL-17A（APC）染色，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th1、Th17細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的情況，按Treg檢測(cè)試劑盒標(biāo)記細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)Treg（CD4+CD25+FoxP3+）的比例。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用表示，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、hUC-MSC的細(xì)胞形態(tài)

3組實(shí)驗(yàn)組的hUC-MSC均貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)均為長(zhǎng)而扁平的梭形細(xì)胞，大小均一，極性排列，集落呈渦旋狀，類似于成纖維細(xì)胞。見(jiàn)圖1。

二、hUC-MSC的增殖活性比較

根據(jù)P0～P3代次hUC-MSC的計(jì)數(shù)結(jié)果繪制增殖曲線。3組實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖曲線趨勢(shì)相似， P0～P1代次的hUC-MSC增殖較慢；P2代次開(kāi)始，hUC-MSC進(jìn)入對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，增殖能力強(qiáng)。3組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞總數(shù)兩兩比較，A組與B組P2、P3代次的細(xì)胞總數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05），A組與B組P2、P3代次的增殖能力均優(yōu)于C組（P均< 0.05）。見(jiàn)圖2。

三、hUC-MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物

流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，3組實(shí)驗(yàn)組P3代次的hUC-MSC細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166表達(dá)率均≥95%；CD34、CD45、 CD31、HLA-DR表達(dá)率均≤2%，均符合國(guó)際干細(xì)胞協(xié)會(huì)對(duì)hUC-MSC細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定的要求［6］。3組實(shí)驗(yàn)組兩兩比較，A組與B組的細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05），A組和B組的CD29、CD90表達(dá)率均高于C組（P均< 0.05）。見(jiàn)表1。

四、hUC-MSC的三系分化能力

3組實(shí)驗(yàn)組的hUC-MSC在體外均具有成骨、成脂、成軟骨分化的功能。成骨誘導(dǎo)4周后經(jīng)茜素紅染色，鏡下可見(jiàn)紅色的鈣鹽沉積，見(jiàn)圖3A。成脂誘導(dǎo)4周后經(jīng)油紅O染色，鏡下可見(jiàn)橘紅色的脂滴，見(jiàn)圖3B。成軟骨誘導(dǎo)4周后切片觀察，可見(jiàn)經(jīng)蘇木素染液染成紫紅色的軟骨細(xì)胞，見(jiàn)圖3C。

五、hUC-MSC對(duì)T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用

1. 3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)的hUC-MSC對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響

hUC-MSC與經(jīng)過(guò)CFSE標(biāo)記的T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)4 d后，流式結(jié)果顯示，3組實(shí)驗(yàn)組中T淋巴細(xì)胞增殖的比例均低于對(duì)照組（P均< 0.05），3組實(shí)驗(yàn)組兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05），見(jiàn)圖4A、F。由此表明，3組實(shí)驗(yàn)組的hUC-MSC均能抑制T淋巴細(xì)胞的增殖。

2. 3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)的hUC-MSC對(duì)Th1、Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和對(duì)Treg的

調(diào)節(jié)

hUC-MSC與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)4 d后，流式結(jié)果顯示，3組實(shí)驗(yàn)組中P3代次的Th17細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子（CD8-IL-17A+）比例和Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（CD3+TNF-α+）均低于對(duì)照組（P均<

0.05），見(jiàn)圖4B、C、F。Th1細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子（CD3+IFN-γ+）比例均低于對(duì)照組，3組實(shí)驗(yàn)組兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05），見(jiàn)圖4B～D、F。由此表明，3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)的hUC-MSC均能抑制Th1和Th17細(xì)胞分泌炎癥因子。

hUC-MSC與CD3分選的T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)4 d

后，流式結(jié)果顯示，3組實(shí)驗(yàn)組中CD4+ CD25+ FoxP3+細(xì)胞比例均高于對(duì)照組，3組實(shí)驗(yàn)組兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），見(jiàn)圖4E、F。由此表明，3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)的hUC-MSC均能誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的增殖。

討 論

MSC無(wú)血清培養(yǎng)基，是整個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的核心。間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基從上市到現(xiàn)在，已經(jīng)走過(guò)了3代。第3代培養(yǎng)基是用成分明確的非動(dòng)物來(lái)源的化學(xué)物質(zhì)完全替代了血清或血小板裂解物（牛血清替代物），沒(méi)有未知組分、沒(méi)有動(dòng)物源組分，人體安全性高，批次性能差別小。hUC-MSC在無(wú)血清培養(yǎng)體系中能實(shí)現(xiàn)大量擴(kuò)增，然后回輸?shù)饺梭w，具有調(diào)節(jié)組織免疫微環(huán)境和促進(jìn)組織修復(fù)的功能。無(wú)血清培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)添加因子不同，可影響hUC-MSC體外擴(kuò)增的效率，細(xì)胞表型、分化能力及遺傳特性等［7-8］。目前主要從3個(gè)方面進(jìn)行hUC-MSC的鑒別：①細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)；②細(xì)胞表型高表達(dá)CD73、CD90、CD105，低表達(dá)或不表達(dá)CD34、CD45、CD11b、CD19和 HLA-DR；③具有體外分化成脂、成骨、成軟骨的潛能［6］。為了篩選出高效穩(wěn)定的hUC-MSC體外無(wú)血清培養(yǎng)體系，本研究分別用3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系對(duì)hUC-MSC進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)。結(jié)果顯示，3組實(shí)驗(yàn)組的hUC-MSC均符合國(guó)際干細(xì)胞協(xié)會(huì)制定的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，各組細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差異，其中純化學(xué)成分合成的無(wú)血清培養(yǎng)體系和血小板裂解物的無(wú)血清培養(yǎng)體系的hUC-MSC在細(xì)胞表面標(biāo)志物及增殖活性上優(yōu)于纖維蛋白原包被+含重組人蛋白質(zhì)的無(wú)血清培養(yǎng)體系［6］。既往文獻(xiàn)表明，無(wú)血清培養(yǎng)基含有向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素，以及促生長(zhǎng)因子和一些促細(xì)胞貼壁的蛋白質(zhì)等，這些添加物能夠選擇性地促進(jìn)MSC體外培養(yǎng)中的生長(zhǎng)和分化，進(jìn)而引起hUC-MSC在增殖及表型表達(dá)方面的差異［9-11］。

hUC-MSC具有調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞的功能，特別是T淋巴細(xì)胞。輔助性T細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞因子分泌的不同分為 Th1、Th17和Treg等，通過(guò)受體介導(dǎo)的細(xì)胞因子，發(fā)揮不同的免疫效應(yīng)。Th1分泌TNF-α、IFN-γ等，介導(dǎo)機(jī)體的炎性反應(yīng)和組織損傷；Th17分泌 IL-17A，具有抗感染作用［12-13］。目前，CD4+ CD25+ FOXP3+ 是Treg標(biāo)志物主要的檢測(cè)組合之一，而 Foxp3是控制Treg發(fā)育和功能的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一，需要進(jìn)行破膜后檢測(cè)［14］。抑制T淋巴細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子分泌，顯著上調(diào)Treg比例，進(jìn)而影響其他免疫細(xì)胞功能，這一特性是MSC臨床療效評(píng)價(jià)最為重要的屬性之一［15-17］。

本研究3組實(shí)驗(yàn)組的T淋巴細(xì)胞增殖率、Th1和Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子比例均降低，Treg比例均升高，3組不同無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)的hUC-MSC均保持著免疫調(diào)節(jié)功能。

綜上所述，3組不同無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的hUC-MSC均能保持其基本的生物學(xué)特性和免疫調(diào)節(jié)活性，純化學(xué)成分合成的無(wú)血清培養(yǎng)體系和血小板裂解物的無(wú)血清培養(yǎng)體系優(yōu)于纖維蛋白原包被+含重組人蛋白質(zhì)的無(wú)血清培養(yǎng)體系。

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（收稿日期：2023-03-16）

（本文編輯：洪悅民）