對清解合劑薄層色譜法的商榷

摘要：為探討清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，綠原酸、梔子苷薄層色譜鑒別方法的改進(jìn)。將清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別（1）項中，殘渣加甲醇2mL使溶解改為殘渣加乙醇2mL使溶解；對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液改為加乙醇制成每1mL含1mg的溶液。同時，將清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別（2）項中，殘渣加丙酮2mL使溶解改為殘渣加乙醇2mL使溶解；對照品，加丙酮制成每1mL含1mg的溶液改為加乙醇制成每1mL含1mg的溶液。另外，噴以50%硫酸乙醇溶液改為噴以10%硫酸乙醇溶液。結(jié)論：改進(jìn)方法操作簡便、重復(fù)性好、安全性高。

關(guān)鍵詞：清解合劑；綠原酸；梔子苷；薄層色譜

清解合劑是《中華人民共和國獸藥典》（2020年版二部）[1]收錄的獸藥品種，具有清熱解毒的功效，主治雞大腸桿菌病引起的熱毒癥，在家禽養(yǎng)殖中應(yīng)用非常廣泛。在近幾年的獸藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展報告統(tǒng)計中，其銷售額均突破億元，銷量高達(dá)600～800萬L。在產(chǎn)品檢驗工作中，筆者發(fā)現(xiàn)按現(xiàn)行清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)綠原酸、梔子苷的薄層鑒別方法，樣品處理過程中，所用溶劑對人體刺激性比較大、安全性低，且溶劑揮發(fā)快，試驗結(jié)果的重復(fù)性差。

綠原酸的鑒別試驗中，參考文獻(xiàn)中綠原酸能夠溶于甲醇、乙醇等溶劑[2]，筆者考慮用乙醇代替甲醇對樣品進(jìn)行前處理。同時梔子苷的鑒別試驗中，參考資料中梔子苷溶于水、乙醇等溶劑[3]，考慮用乙醇代替丙酮對樣品進(jìn)行前處理。筆者改進(jìn)供試品前處理方法，達(dá)到很好的分離效果，斑點明顯清晰，試驗操作簡單，溶劑揮發(fā)相對慢，試驗結(jié)果重復(fù)性好，使用的試劑安全性更好，對實驗人員刺激小。

1 材料

層析缸；硅膠H板（青島海洋化工有限公司，批號20210926）；以羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）為粘合劑的硅膠SG薄層板（煙臺市化工研究所，批號211026），105℃活化30min后置于干燥器內(nèi)備用；5μL定量毛細(xì)管。

清解合劑供試品（煙臺愛士津動物保健品有限公司，批號202108036）；綠原酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110753-202136）；梔子苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110749-202119）；甲醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20211203）、乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20200810）、丙酮（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20200118）、乙酸丁酯（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號20191102）、甲酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20200731）、三氯甲烷（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20191026）。試劑為分析純。

2 實驗方法和結(jié)果

2.1 綠原酸鑒別的試驗方法和結(jié)果

取2份清解合劑各10mL，置水浴上蒸至近干，一份殘渣加甲醇2mL使溶解，另外一份殘渣加乙醇2mL使溶解，分別取上清液作為供試品溶液。另取兩份綠原酸對照品，分別加乙醇和甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為兩份對照溶液。

對照薄層色譜法（附錄0502）試驗，吸取上述四種溶液各10μL，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（14：5：5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖1。

從圖1可以看出，用乙醇溶解的綠原酸對照和甲醇溶解的綠原酸對照斑點一致，用乙醇溶解的樣品與甲醇溶解的樣品斑點也一致，且均有與綠原酸一致的斑點。因此可以得出結(jié)論，乙醇可代替甲醇來溶解樣品和對照品進(jìn)行綠原酸鑒別。

2.2 梔子苷鑒別的試驗方法和結(jié)果

取2份清解合劑各10mL，置水浴上蒸至近干，一份殘渣加丙酮2mL使溶解，另外一份殘渣加乙醇2mL使溶解，分別取上清液作為供試品溶液。另取兩份梔子苷對照品，分別加乙醇和丙酮制成每1mL含0.5mg的溶液，作為兩份對照溶液。

對照薄層色譜法（附錄0502）試驗，吸取上述四種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（3：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。

另外，在樣品顯色過程中，發(fā)現(xiàn)用50%硫酸乙醇溶液黏度太大，霧化效果不好，顯色不均勻，顯色效果不如10%的硫酸乙醇溶液，結(jié)果見圖3。

從圖2可以看出，用乙醇溶解的梔子苷對照和丙酮溶解的梔子苷對照斑點一致，用乙醇溶解的樣品與丙酮溶解的樣品斑點一致，且均有與梔子苷一致的斑點。因此可以得出結(jié)論，乙醇可代替丙酮溶解樣品對照品進(jìn)行梔子苷鑒別。

比較圖2和圖3可以看出，10%硫酸乙醇溶液顯色效果比50%硫酸乙醇溶液好，而且顯色結(jié)果重復(fù)性好。因此，可以用10%硫酸乙醇溶液代替50%硫酸乙醇溶液進(jìn)行顯色。

3 討論

首先，《中華人民共和國獸藥典》（2020年版二部）[1]清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，鑒別（1）項存在問題：供試品在前處理過程中，殘渣加2mL甲醇使溶解，甲醇極易揮發(fā)，很難得到供試品溶液，另外，不同操作速度、不同實驗人員取得的供試品溶液的量也存在明顯差異，造成后續(xù)結(jié)果相差很大，重復(fù)性差，而將殘渣加2mL乙醇使溶解，乙醇揮發(fā)相對較慢，可以很好的滿足實驗操作要求，將對照品也改為使用乙醇溶解，實驗結(jié)果的重復(fù)性得到了明顯的改善。

其次，《中華人民共和國獸藥典》（2020年版二部）[1]清解合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，鑒別（2）項存在問題：供試品在前處理過程中，殘渣加2mL丙酮使溶解，丙酮也極易揮發(fā)，很難得到供試品溶液，另外，不同操作速度、不同實驗人員取得的供試品溶液的量也存在明顯差異，造成后續(xù)結(jié)果相差很大，重復(fù)性差，而將殘渣加2mL乙醇使溶解，乙醇揮發(fā)相對較慢，可以很好地滿足實驗操作要求，將對照品也改為使用乙醇溶解，實驗結(jié)果的重復(fù)性得到了明顯的改善，結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。

再者，甲醇、丙酮對實驗人員的眼睛、黏膜等都有明顯的刺激性，毒性很大，用乙醇替代實驗中的甲醇、丙酮，可以提高實驗的安全性，

另外，鑒別（2）中噴以50%硫酸乙醇溶液，溶液黏度大，霧化效果不好，經(jīng)試驗驗證改為使用10%硫酸乙醇溶液，溶液黏度低，霧化效果好，斑點顯色清晰，且明顯降低了溶液的腐蝕性，提高了實驗的安全性。

因此，建議用乙醇替代標(biāo)準(zhǔn)鑒別（1）（2）項中涉及到的甲醇、丙酮，將顯色劑50%硫酸乙醇溶液改為10%硫酸乙醇溶液。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

[2] 王禮琛.有機(jī)化學(xué)[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2006.

[3] 劉穎，郭明曄，白根本.綠原酸的研究進(jìn)展[J].中藥材雜志，2012，35（7）：1180-1185.