你做的微生物檢驗就像一部驚險大片

微生物與人們的生活息息相關(guān)，微生物主要包含細(xì)菌、病毒以及真菌等在內(nèi)的一系列個體微小的生物群體。微生物檢驗工作涉及多個領(lǐng)域，包括健康業(yè)、工農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥業(yè)等，其中醫(yī)學(xué)微生物的檢驗是臨床感染性疾病診斷治療的重要組成部分。醫(yī)學(xué)微生物檢驗工作中標(biāo)本的留取、不同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件等都會對檢驗結(jié)果產(chǎn)生直接影響。那么，在醫(yī)學(xué)微生物的檢驗中需要注意什么？最終結(jié)果又是怎樣出爐的呢？說起這個過程，每一步都嚴(yán)謹(jǐn)?shù)娇量蹋荒艹鲆唤z一毫的差錯，其緊張程度就像一部驚險刺激的院線大片。

一標(biāo)本的留取

不同標(biāo)本有不同的要求，血、腦脊液、胸腹水、痰、分泌物、尿液、糞便等根據(jù)不同的需求，需氧、厭氧、標(biāo)本量、留取要求、留取時間，如血培養(yǎng)留取時間：發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）；寒戰(zhàn)；血小板減少；皮膚、黏膜出血；昏迷等情況下抽取血液標(biāo)本送檢；血培養(yǎng)一般在不同部位采血，需氧和厭氧培養(yǎng)。清潔中段尿通常取晨起第一次尿液送檢，可提高陽性率，首先針對患者外陰部進(jìn)行清潔，后應(yīng)用無菌棉球進(jìn)行擦干處理，患者自行排尿時醫(yī)務(wù)人員應(yīng)囑咐其留取中段尿，并立即蓋好瓶蓋送檢。對于痰液標(biāo)本而言，取樣時間應(yīng)于患者晨起，給予患者清水漱口3次后，用力咯出氣管深處痰液，盛于清潔無菌容器內(nèi)立即蓋蓋送檢，保證標(biāo)本的新鮮程度，防止免細(xì)菌自溶，切勿混入唾液及鼻咽分泌物。對于糞便標(biāo)本而言，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)囑咐患者于盆內(nèi)進(jìn)行晨便，取少許大便膿血或黏液置于無菌容器中送檢，試管中不可混入尿液等異物及其他化學(xué)藥品。其他標(biāo)本盡量在抗菌藥物使用前留取。

二標(biāo)本的接種

現(xiàn)在醫(yī)院檢驗科接種標(biāo)本基本在生物安全柜中進(jìn)行，不允許用明火，使用高溫滅菌器，尤其是容易產(chǎn)生氣溶膠的標(biāo)本，接種時戴手套、口罩、帽子、隔離衣，通過標(biāo)本接收窗口收取標(biāo)本，人員進(jìn)出須和污物分開，人流、物流分門進(jìn)出。

細(xì)菌標(biāo)本的接種根據(jù)標(biāo)本的種類、檢驗的目的選擇合適的培養(yǎng)基，如血培養(yǎng)選擇需氧、厭氧血培養(yǎng)瓶，尿標(biāo)本選擇血平、麥康凱平板，痰標(biāo)本選擇血平板、麥康凱平板、巧克力平板等，一般選擇一個基礎(chǔ)培養(yǎng)基、一個選擇性培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件，5%二氧化碳培養(yǎng)箱和37℃的普通培養(yǎng)箱，厭氧培養(yǎng)需要選擇厭氧環(huán)境如厭氧袋、厭氧罐等。

三標(biāo)本的運送

標(biāo)本采集完后，應(yīng)及時運送，一般要求在2小時內(nèi)送到實驗室，不能及時送檢的，根據(jù)不同的標(biāo)本和不同的檢驗需求，在室溫或4℃冰箱保存，在一定的時間內(nèi)送到。

四實驗室的消毒滅菌要求

操作房間已沒有無菌間，空氣消毒每日用紫外燈照射、每日定點通風(fēng)，臺面消毒用不同濃度的含氯制劑擦拭，物體消毒包括使用過的培養(yǎng)基、接種標(biāo)本等打包高壓滅菌后再集中處理，使用后的玻片、針頭等利器放入利器盒使用一定濃度的含氯制劑浸泡后，再集中處理。

常用的消毒滅菌方法為干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌，目前實驗室主要為濕熱滅菌。應(yīng)用該方法之前，非感染物品如吸頭、配置的培養(yǎng)基和吸管等玻璃器皿需要選擇合適的包裝容器，包裝完整。在滅菌之前要針對滅菌器檢查門的開關(guān)進(jìn)行核實，以保證其靈活程度；并對橡膠圈進(jìn)行觀察，核實其有無損壞現(xiàn)象和是否平整；保證壓力表蒸汽排凈時停留在零位，檢查儀器中水位，要求達(dá)到儀器要求的高度，并關(guān)好門和蓋。當(dāng)達(dá)到規(guī)定的滅菌時間時，醫(yī)務(wù)人員針對需干燥的物品，應(yīng)立刻打開排氣閥，當(dāng)蒸汽排出且壓力恢復(fù)到零時，保證其自然冷卻至60℃后，再將蓋打開并取出物品。而若是針對液體樣本，則不應(yīng)該打開排氣閥，而是應(yīng)該將高壓蒸汽鍋去除熱源，當(dāng)其自然冷卻且壓力恢復(fù)至零后，針對其溫度進(jìn)行測量，當(dāng)自然冷卻至60℃后，再開蓋取物。

五有毒有菌污物的處理要求

針對微生物實驗室所涉及的物品有嚴(yán)格的管理，要求所用到的器材以及培養(yǎng)物，在未經(jīng)過消毒處理時，保證其不可被帶出實驗室。而針對已經(jīng)培養(yǎng)的污染材料和廢棄物（如使用過的培養(yǎng)基等），則應(yīng)該將其放在黃色耐高溫的垃圾袋，并集中存放于指定地點，對其進(jìn)行121℃，時間為30分鐘的高壓滅菌；針對污染過的吸管，則需將其放置在百萬分比濃度2000的含氯制劑浸泡24小時后，接受溫度為121℃，時間長達(dá)30分鐘的高壓滅菌；針對涂片染色沖洗片的液體，一般是采用直接將其沖入下水道的方式進(jìn)行處理；針對染色的玻片，則需將其用百萬分比濃度2000的含氯制劑浸泡后，再進(jìn)行煮沸并洗滌。凝集試驗所涉及的玻片以及平皿，需要接受高壓滅菌并洗滌的方式，才能夠再次使用。

六培養(yǎng)基的保存方法

目前所使用的培養(yǎng)基大多是購買商品化的培養(yǎng)基，例如血平板、巧克力平板、麥康凱平板、改良羅氏培養(yǎng)基（酸性）、羅氏斜面培養(yǎng)基等，那么該如何保存呢？培養(yǎng)基目前大多時候使用的是商品化培養(yǎng)基，針對商品化的培養(yǎng)基，需要嚴(yán)格注重相關(guān)貯存要求，根據(jù)相應(yīng)的說明書進(jìn)行貯存，并且于標(biāo)簽之上，詳細(xì)記錄商品化培養(yǎng)基的批號，包含生產(chǎn)日期、有效期等有關(guān)特性，一般情況下商品化的培養(yǎng)基有效期為1～2個月，使用過程中，按照培養(yǎng)基標(biāo)簽上的有效期使用即可，這樣可以避免自制培養(yǎng)基質(zhì)量受到影響，培養(yǎng)基滅菌后儲藏在高壓菌器中的問題，自制的培養(yǎng)基還需要保存在2℃～8℃，與此同時，保證其避光，商品化的培養(yǎng)基使用更加便捷，簡化培養(yǎng)基的保存方法。保證商品化培養(yǎng)基的保藏和運送條件，確保培養(yǎng)基以最低極限地丟失水分；將培養(yǎng)基保存在原裝的密封袋中，能夠有效防止水分的丟失，且可以在一定程度上延長保存時間。特別需要注意的是，開封的培養(yǎng)基一般要求在兩周內(nèi)運用，而針對保存于密封中的培養(yǎng)基，則需根據(jù)使用說明書，在有效期內(nèi)使用；保證瓊脂培養(yǎng)基的保存溫度在2℃～8℃，若需要經(jīng)過長期的保存，瓊脂平板應(yīng)密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分丟掉。

七樣品的采集及處理要求

微生物檢驗要求，所采集的檢驗樣品需要極具代表性，因此，在采樣的過程中，應(yīng)該嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，保證容器是經(jīng)過滅菌處理的，以避免周圍環(huán)境中的微生物對其造成的污染。在針對容器進(jìn)行滅菌時，不可以使用新潔爾滅、酒精等消毒藥物進(jìn)行滅菌，更不能應(yīng)用含有此類消毒藥物或抗生素類藥物，以防止該藥物滅殺樣本中的微生物，而采樣時用到的剪刀等用具，也需要經(jīng)過滅殺后才可以投入使用。

樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗室進(jìn)行檢驗，送檢過程中一般不超過兩小時，如路程較遠(yuǎn)，可保存在2℃～8℃環(huán)境中。檢驗科收到樣品后進(jìn)行登記，觀察樣品的外觀，如果發(fā)現(xiàn)收集標(biāo)本的容器破損、敞口，采集時間過長等，可拒絕檢驗，告知患者原因并要求重新留取標(biāo)本。對送檢符合要求的樣品，檢驗科收到后，應(yīng)立即進(jìn)行接種，如進(jìn)行血清學(xué)、分子生物學(xué)等檢測，標(biāo)本超過規(guī)定檢測時間，放2℃～8℃冰箱保存，集中檢測。在每次應(yīng)用培養(yǎng)基時，檢驗科人員應(yīng)注意對其生產(chǎn)日期進(jìn)行檢查，確認(rèn)其生產(chǎn)日期在保質(zhì)期內(nèi)，并對開瓶日期及瓶口密封性進(jìn)行查看，確保其沒有發(fā)生變質(zhì)、吸潮等情況。

八不能培養(yǎng)的微生物標(biāo)本該怎樣留取標(biāo)本檢測

人體感染的微生物包括細(xì)菌、病毒、真菌、支原體等，對于一些不易或不能進(jìn)行人工培養(yǎng)的微生物，首先，檢測抗體（如肺炎支原體、乙肝病毒、流感病毒等），采集患者血液，及時檢測，如不能檢測，可離心后放2℃～8℃冰箱保存。其次，使用PCR等分子生物學(xué)的方法直接檢測病原體，采集可疑部位的分泌物等標(biāo)本，放入特殊的保存液體，及時運送實驗室，提取微生物的DNA或RNA進(jìn)行檢測，或使用金標(biāo)等快速檢測試劑直接檢測采集標(biāo)本的目標(biāo)微生物。對微生物標(biāo)本的檢驗結(jié)果進(jìn)行判定，人為因素包括手柄操作等都會使結(jié)果出現(xiàn)偏差，需要由質(zhì)量專家、部門負(fù)責(zé)人等經(jīng)驗豐富的人員一起定奪，如此能減少很多不必要的誤差。

（作者單位系上海市徐匯區(qū)大華醫(yī)院）