血清HCG、D-二聚體、G-CSF聯合檢測對反復種植失敗患者妊娠結局的預測價值*

葉旭鑫,張 昭,袁玉清

東莞市人民醫院:1.檢驗科;2.生殖醫學科,廣東東莞 523000

目前我國育齡夫婦的不孕癥發生率約為10%[1]。雖然輔助生殖技術幫助了許多不孕夫婦成功懷孕,但接受輔助生殖技術的不孕夫婦中有10%～15%在多次體外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期后未能懷孕[2],這些患者被定義為反復種植失敗(RIF)患者。不孕癥診斷及治療過程不僅給患者家庭增加經濟負擔,同時還可能面臨社會輿論,使患者產生一定心理壓力。RIF的病因復雜,主要包括遺傳異常、內分泌紊亂、生殖道解剖結構異常、感染或某些自身免疫性疾病及易栓癥等[3]。如何預測、改善RIF患者的治療結局,提高種植成功率一直是研究的熱點問題。人絨毛膜促性腺激素(HCG)作為最早人胚胎源的信號,與胚胎著床關系最為密切[4]。D-二聚體作為機體高凝狀態及血栓形成的重要標志物,在健康妊娠女性中隨著孕周的增加,D-二聚體水平呈逐漸升高的趨勢[5]。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)作為調節子宮內膜免疫細胞功能的細胞因子,可以提高子宮內膜容受性、胚胎著床率,降低復發性流產,在母體和胚胎之間發揮著重要的作用[6]。因此,本研究檢測RIF患者血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平,探討其與妊娠結局的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年5月至2022年5月在本院進行IVF-ET的RIF患者80例作為研究對象,年齡25～38歲,平均(31.59±3.64)歲。納入標準:(1)符合RIF診斷標準[7],既往移植≥3次高質量胚胎或多次移植≥10個胚胎仍然未能獲得臨床妊娠者。(2)尿檢日HCG結果為陽性。(3)患者卵巢功能正常;(4)未接受抗凝治療,如阿司匹林、低分子量肝素注射液;(5)患者超聲或腹腔鏡檢查結果正常;(6)夫妻雙方染色體核型分析結果正常;(7)患者進行IVF-ET后妊娠成功到中晚期;(8)患者臨床資料完整。排除標準:(1)患者存在生殖道感染和生殖器畸形;(2)有遺傳學疾病或家族遺傳史;(3)合并心血管疾病及自身免疫性疾病;(4)心、肝、腎等重要臟器功能障礙;(5)精神、認知存在障礙。本研究經過本院倫理委員會批準。已獲得所有參與者的知情同意。根據是否發生不良妊娠結局分為妊娠結局良好組與妊娠結局不良組。

1.2方法 分別在2周(驗孕日)、6～<13周(孕早期)、13～<25周(孕中期)和25～37周(孕晚期)對所有RIF患者進行常規孕檢。采集RIF患者肘靜脈血6 mL,分別加至枸櫞酸鈉抗凝管和促凝劑管中混合均勻。以3 000 r/min離心10 min,取上層血漿、血清備用。采用化學發光法檢測血清HCG,免疫比濁法檢測血D-二聚體,酶聯免疫吸附試驗檢測血清G-CSF水平,具體操作步驟嚴格按照各試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1妊娠結局 80例RIF患者中有48例妊娠結局良好(妊娠結局良好組),有32例發生不良妊娠(妊娠結局不良組),其中妊娠結局不良組中早產12例(15.00%),宮內窘迫10例(12.50%),產后出血3例(3.75%),巨大兒1例(1.25%),低體重兒6例(7.50%)。

2.2不同妊娠階段血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平比較 驗孕日、孕早期、孕中期、孕晚期血清HCG水平逐漸降低,血清D-二聚體與G-CSF水平逐漸升高(P<0.05)。妊娠結局不良組各階段血清HCG水平低于妊娠結局良好組(P<0.05),血清D-二聚體與G-CSF水平高于妊娠結局良好組(P<0.05)。見表1～3。

表1 不同妊娠階段血清HCG水平變化

表2 不同妊娠階段血清D-二聚體水平變化

表3 不同妊娠階段血清G-CSF水平變化

2.3血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結局的相關性 血清HCG水平與妊娠結局不良呈負相關(r=-0.506,P<0.05);血清D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結局不良呈正相關(r=0.498、0.542,P<0.05)。見表4。

表4 血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結局的相關性

2.4多因素Logistic回歸分析RIF患者妊娠結局不良的影響因素 以RIF患者妊娠結局為因變量,以血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示HCG、D-二聚體、G-CSF是RIF患者妊娠結局不良的影響因素(P<0.05)。見表5。

表5 RIF患者妊娠結局不良的影響因素

2.5血清HCG、D-二聚體、G-CSF對RIF患者妊娠結局的預測價值 繪制驗孕日血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平預測RIF患者妊娠結局的ROC曲線,結果顯示,血清HCG、D-二聚體、G-CSF單獨及聯合預測RIF患者妊娠結局的曲線下面積(AUC)分別為0.877、0.947、0.911和0.971,靈敏度分別為88.10%、88.10%、90.48%和95.24%,特異度分別為81.58%、97.37%、76.32%和89.47%,三者聯合可提高預測效能(P<0.05)。見表6、圖1。

圖1 血清HCG、D-二聚體、G-CSF預測妊娠結局的ROC曲線

表6 血清HCG、D-二聚體、G-CSF對妊娠結局的預測價值

3 討 論

盡管現代醫學在將IVF-ET應用于不孕患者的治療方面取得了巨大進展,但RIF患者胚胎移植的成功率只有30%,對育齡夫婦及其家庭造成巨大的心理和經濟負擔[8-9],迫切需要尋求新的手段來提高種植成功率。成功植入取決于胚胎質量和子宮內膜容受性,子宮內膜容受性是一個復雜的過程,涉及許多分子的參與和調節,包括細胞因子、生長因子、黏附分子和細胞骨架蛋白等[10]。RIF患者大多有子宮內膜容受性障礙,有研究報道了改善子宮內膜容受性的方法,包括低劑量阿司匹林治療、宮內輸注HCG或G-CSF等[11],但是低妊娠成功率問題始終沒有得到有效解決,因此尋找可以有效預測RIF患者妊娠結局的血清學指標,及時采取措施改善妊娠結局至關重要。

HCG是由合體滋養層產生的一種糖蛋白,維持發育中胎盤的血液供應,并作為調節著床、侵襲和細胞生長的自分泌因子發揮作用[12]。HCG水平在絨毛膜羊膜炎孕婦中表達異常,可以預測胎膜早破和新生兒結局[13]。宮外孕早期、胚胎著床環境差、絨毛發育異常、HCG分泌減少等,可降低黃體分泌的雌二醇和孕酮水平,導致子宮內膜得不到滋養[14]。研究發現HCG在子癇前期的孕婦血清中水平升高,可以有效預測子癇前期的發生[15]。本研究發現RIF患者不同妊娠階段血清HCG水平逐漸降低,各階段妊娠結局不良組血清HCG水平低于妊娠結局良好組,提示HCG水平的高低與不良妊娠結局的發生有關。

D-二聚體作為機體高凝狀態及血栓形成的重要標志物,在健康妊娠女性中隨著孕周的增加,水平呈逐漸升高的趨勢[16]。王婧彥等[17]研究發現多囊卵巢綜合征患者行IVF-ET后,妊娠丟失組患者的D-二聚體水平高于未丟失組。周凌云等[18]研究發現在不同妊娠時期妊娠結局不良組血清D-二聚體水平高于正常妊娠結局組。本研究發現RIF患者不同妊娠階段血清D-二聚體水平逐漸升高,各階段妊娠結局不良組血清D-二聚體水平高于妊娠結局良好組,提示D-二聚體水平的高低與不良妊娠結局的發生有關。

G-CSF是一種氨基酸多肽,主要刺激具有高親和力受體的多形核粒細胞,可以調節子宮內膜容受性和免疫細胞,對滋養層生長和胎盤代謝具有積極影響[19]。研究發現G-CSF在胎膜早破患者中的血清水平明顯高于正常妊娠孕婦[20-21]。本研究發現RIF患者不同妊娠階段血清G-CSF水平逐漸升高,各階段妊娠結局不良組血清G-CSF水平高于妊娠結局良好組,提示G-CSF水平的高低與不良妊娠結局的發生有關。

Spearman相關分析顯示,血清HCG水平與妊娠結局不良呈負相關(P<0.05),血清D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結局不良呈正相關(P<0.05)。血清HCG、D-二聚體、G-CSF單獨及聯合預測RIF患者妊娠結局的AUC分別為0.877、0.947、0.911和0.971,靈敏度分別為88.10%、88.10%、90.48%和95.24%,特異度分別為81.58%、97.37%、76.32%和89.47%,三者聯合可提高預測效能(P<0.05),提示血清HCG、D-二聚體、G-CSF聯合可用于RIF患者妊娠結局的預測。

綜上所述,不同妊娠結局的RIF患者血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平不同,三者聯合檢測可以有效預測RIF患者的妊娠結局。