血清CASP2表達(dá)與缺氧缺血性腦病患兒NBNA評(píng)分及預(yù)后的關(guān)系*

魏燕云,李艷民

邯鄲市第一醫(yī)院新生兒科,河北邯鄲 056002

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是新生兒缺氧缺血性神經(jīng)綜合征,它與意識(shí)喪失、自發(fā)運(yùn)動(dòng)、音調(diào)和反射的減少有關(guān),嚴(yán)重的情況下會(huì)出現(xiàn)腦癱、癲癇甚至導(dǎo)致患兒死亡[1-2]。目前臨床診斷HIE的主要依據(jù)是影像學(xué)檢查及臨床癥狀分析,但均無(wú)法準(zhǔn)確評(píng)估患兒病情嚴(yán)重程度及預(yù)后[3]。近些年來(lái),有研究將生物指標(biāo)檢測(cè)用于疾病診斷、病情評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè),其具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)單、便捷等優(yōu)勢(shì)[4]。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶2(CASP2)屬于Caspase蛋白家族,主要調(diào)控細(xì)胞凋亡和炎癥等,已被確定為腫瘤抑制因子,但其具體作用機(jī)制仍不清楚[5]。研究顯示,在缺氧缺血性腦損傷小鼠的大腦皮層組織中CASP2高表達(dá),其基因敲除后可減輕腦損傷和細(xì)胞凋亡[6]。然而CASP2與HIE患兒新生兒神經(jīng)行為(NBNA)評(píng)分及預(yù)后的關(guān)系仍待進(jìn)一步探究。因此,本研究通過(guò)檢測(cè)114例HIE患兒血清CASP2水平,分析其表達(dá)變化與患兒病情嚴(yán)重程度、NBNA評(píng)分及預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2022年4月本院114例HIE患兒為HIE組,其中男66例、女48例,平均胎齡(39.87±0.84)周,根據(jù)患兒病情嚴(yán)重程度分為輕度組40例,中度組52例,重度組22例;選擇同期于本院分娩的106例健康新生兒作為對(duì)照組,其中男62例、女44例,平均胎齡(39.96±0.72)周。同時(shí)收集HIE組與對(duì)照組體重、剖宮產(chǎn)、收縮壓、舒張壓、心率、血尿素、白蛋白、肌酐等資料。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)HIE患兒診斷及輕、中、重度分類(lèi)判定均按照《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[7]中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行,其主要包括有相關(guān)明確異常產(chǎn)科病史、嚴(yán)重胎兒宮內(nèi)窘迫表現(xiàn);出生時(shí)有過(guò)重度窒息,符合臍動(dòng)脈血?dú)鈽?biāo)準(zhǔn);出生后不久即出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀;排除顱內(nèi)出血、產(chǎn)傷、電解質(zhì)紊亂等引起的抽搐及遺傳代謝疾病,宮內(nèi)感染和其他先天性疾病引起的腦損傷,并進(jìn)行腦電圖、B超、MRI、CT等輔助檢查。(2)入組HIE患兒均于發(fā)病24 h內(nèi)接受治療。(3)母親孕期資料及新生兒臨床資料記錄齊全,無(wú)其他醫(yī)院治療史。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有神經(jīng)系統(tǒng)畸形發(fā)育或慢性感染、顱內(nèi)出血等疾病者;(2)母親在孕期有嚴(yán)重不良生活嗜好等情況者;(3)新生兒有先天性心、肝、腎等臟器功能障礙、遺傳代謝性疾病者;(4)輸注過(guò)血液制品者。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),新生兒父母簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1血清CASP2水平測(cè)定 所有HIE患兒及健康新生兒均于入組第1天采集外周靜脈血液標(biāo)本2 mL,室溫靜置60 min左右,以3 000 r/min離心15 min(離心半徑18 cm),收集血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清CASP2水平,按照CASP2檢測(cè)試劑盒(武漢菲恩生物科技有限公司,貨號(hào):EH4261)說(shuō)明書(shū)依次操作,檢測(cè)儀器采用SpectraMax iD5多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Molecular Devices公司)。

1.2.2NBNA評(píng)分 記錄所有入組新生兒NBNA評(píng)分,依據(jù)NBNA 20項(xiàng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[8]進(jìn)行評(píng)估,評(píng)估內(nèi)容主要包括主動(dòng)肌張力、被動(dòng)肌張力、一般反應(yīng)、原始反射、行為能力5方面。NBNA評(píng)分越低,新生兒的神經(jīng)發(fā)育水平越差。

1.2.3預(yù)后評(píng)估及分組 HIE患兒均給予適當(dāng)?shù)难鹾稀⑼?控制血糖水平及腦血流灌注,預(yù)防腦水腫,限制入液量,控制驚厥。對(duì)所有入組HIE患兒進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪,主要通過(guò)門(mén)診或復(fù)查的方式。記錄患兒出生6個(gè)月后的神經(jīng)發(fā)育情況,采用嬰兒神經(jīng)國(guó)際量表(INFANIB)進(jìn)行評(píng)估,主要包括5個(gè)功能區(qū)共20個(gè)條目,各條目分值均為1～5分,依照總分劃分的參考區(qū)間[9]分為:“正常兒”“境界兒”和“異常兒”,隨訪期間均未失訪,根據(jù)預(yù)后情況將114例HIE患兒分為預(yù)后不良組(“境界兒”+“異常兒”)26例和預(yù)后良好組(“正常兒”)88例。其中預(yù)后不良為存在癲癇、腦癱等神經(jīng)系統(tǒng)疾病,存在智力缺陷,因腦損傷而死亡。預(yù)后良好為存活且無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)異常和智力缺陷。

2 結(jié) 果

2.1HIE組與對(duì)照組臨床資料比較 對(duì)照組與HIE組胎齡、性別、體重、剖宮產(chǎn)、收縮壓、舒張壓、心率及血尿素、白蛋白、肌酐水平比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 HIE組與對(duì)照組臨床資料比較或n(%)]

2.2HIE組與對(duì)照組血清CASP2水平及NBNA評(píng)分比較 HIE組血清CASP2水平高于對(duì)照組,NBNA評(píng)分低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 HIE組與對(duì)照組血清CASP2水平及NBNA評(píng)分比較

2.3不同病情嚴(yán)重程度HIE患兒血清CASP2水平及NBNA評(píng)分比較 重度組血清CASP2水平高于中度組、輕度組,NBNA評(píng)分低于中度組、輕度組(P<0.05);中度組血清CASP2水平高于輕度組,NBNA評(píng)分低于輕度組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同病情嚴(yán)重程度HIE患兒血清CASP2水平及NBNA評(píng)分比較

2.4HIE患兒血清CASP2水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,HIE患兒NBNA評(píng)分與血清CASP2水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.608,P<0.05),見(jiàn)圖1。

圖1 HIE患兒血清CASP2水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性

2.5不同預(yù)后HIE患兒血清CASP2水平及NBNA評(píng)分比較 預(yù)后不良組血清CASP2水平高于預(yù)后良好組,NBNA評(píng)分低于預(yù)后良好組(P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 不同預(yù)后HIE患兒NBNA評(píng)分及血清CASP2水平比較

2.6血清CASP2水平及NBNA評(píng)分對(duì)HIE患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值 以HIE患兒是否發(fā)生預(yù)后不良為狀態(tài)變量,以血清CASP2水平及NBNA評(píng)分為檢驗(yàn)變量繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,血清CASP2水平、NBNA評(píng)分單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)HIE患兒預(yù)后不良的AUC分別為0.875(95%CI0.797～0.952)、0.748(95%CI0.639～0.857)、0.927(95%CI0.873～0.981),其中聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC高于二者單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC(Z=1.896、2.375,P<0.05),靈敏度分別為88.5%、65.4%、82.5%,特異度分別為78.4%、78.4%、86.2%,CASP2及NBNA評(píng)分預(yù)測(cè)HIE患兒預(yù)后不良的最佳臨界值分別為4.96 ng/mL、27分。見(jiàn)圖2。

圖2 血清CASP2水平及NBNA評(píng)分單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)HIE患兒預(yù)后不良的ROC曲線

3 討 論

新生兒腦病的腦功能異常可能由多種病因引起,臨床中應(yīng)根據(jù)神經(jīng)檢查、病史、體格檢查及進(jìn)一步調(diào)查中收集的數(shù)據(jù),將HIE與新生兒腦病區(qū)分開(kāi)來(lái)[10-11]。HIE是一個(gè)全球性問(wèn)題,全球每年約有75萬(wàn)嬰兒患中度或重度HIE,導(dǎo)致約40萬(wàn)嬰兒神經(jīng)發(fā)育障礙,造成全球總疾病負(fù)擔(dān)加重[12-13]。尋找臨床中可輔助評(píng)估疾病程度及預(yù)后的新指標(biāo),對(duì)于降低HIE患兒病死率有重要作用。

CASP2是哺乳動(dòng)物Caspase家族中進(jìn)化上最保守的成員,在凋亡、腫瘤抑制、基因組穩(wěn)定性、DNA損傷反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、代謝和老化中發(fā)揮作用,且與神經(jīng)元分化和免疫信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果顯示,HIE患兒血清中CASP2水平升高,且重度HIE患兒血清CASP2水平高于中度和輕度HIE患兒,與NIU等[6]研究中CASP2的表達(dá)趨勢(shì)一致。分析認(rèn)為:(1)CASP2水平升高可能與HIE病情進(jìn)展有關(guān),CASP2水平升高可能造成HIE患兒腦損傷加重、神經(jīng)保護(hù)作用減弱及神經(jīng)元凋亡增加,導(dǎo)致HIE疾病進(jìn)展及不良預(yù)后的發(fā)生。LUO等[16]研究表明,微小RNA-150-3p通過(guò)靶向CASP2增強(qiáng)缺氧缺血性腦損傷后神經(jīng)干細(xì)胞外泌體的神經(jīng)保護(hù)作用,抑制腦損傷后的神經(jīng)元凋亡。(2)CASP2水平升高也可能通過(guò)影響下游蛋白表達(dá),降低其神經(jīng)元形態(tài)保護(hù)功能,影響突觸功能,進(jìn)而參與HIE患兒腦損傷,導(dǎo)致疾病進(jìn)展。既往研究顯示,tau蛋白可在急性或創(chuàng)傷性缺血性腦損傷患者中保護(hù)神經(jīng)元形態(tài)穩(wěn)定、提高軸突運(yùn)輸效率,而CASP2可通過(guò)水解tau蛋白對(duì)突觸功能產(chǎn)生不良影響[17-19]。

NBNA評(píng)分是評(píng)估新生兒行為能力的一種權(quán)威性方法,有利于早期明確新生兒是否存在腦損傷,可早期判斷、預(yù)防因患兒神經(jīng)發(fā)育不良而造成的殘疾[20]。本研究發(fā)現(xiàn),重度HIE患兒中NBNA評(píng)分低于輕度和中度HIE患兒,且NBNA評(píng)分與血清CASP2水平呈負(fù)相關(guān)。提示血清CASP2水平變化在一定程度上可作為HIE患兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育水平的輔助評(píng)估指標(biāo),其水平升高可能預(yù)示HIE患兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育遲緩或落后,應(yīng)盡早采取干預(yù)措施。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),預(yù)后不良HIE患兒血清CASP2水平較高,而NBNA評(píng)分較低,二者均對(duì)HIE患兒預(yù)后有重要預(yù)測(cè)價(jià)值。此外,CASP2與NBNA評(píng)分聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC高于二者單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC,結(jié)果表明聯(lián)合預(yù)測(cè)對(duì)HIE患兒預(yù)后改善有重要意義,可通過(guò)大規(guī)模試驗(yàn)驗(yàn)證后進(jìn)行臨床應(yīng)用。

綜上所述,CASP2在HIE患兒血清中水平升高,且CASP2水平隨患兒病情嚴(yán)重程度增加而升高。CASP2水平與HIE患兒NBNA評(píng)分密切相關(guān),且能有效預(yù)測(cè)患兒預(yù)后不良,可作為評(píng)估HIE預(yù)后的血清學(xué)輔助檢測(cè)指標(biāo)。但本研究未能對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)血清CASP2水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,今后應(yīng)納入更多樣本并將動(dòng)態(tài)檢測(cè)作為研究重點(diǎn)進(jìn)一步探究。此外,本研究治療方式可能會(huì)對(duì)預(yù)后結(jié)果造成一定影響,今后仍需控制變量進(jìn)一步探討。