胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平與CD4+CD25+Treg細胞比例的相關性及臨床意義

李曉霞,高斌成△,郭 卉,孫 樂

1.西安長安醫院腫瘤內科,陜西西安710016;2.西安交通大學第一附屬醫院腫瘤內科,陜西西安 710061

胃癌是臨床常見的消化系統惡性腫瘤,其早期病情隱匿,確診率低,大多數患者入院就診時已發展至中晚期,患者術后5年遠期生存率較低,尤其是進展期胃癌[1]。目前,胃癌的發生、發展機制尚不完全明確,但有研究發現,胃癌的發生、發展多伴隨較高的轉移率和預后不良發生率[2]。因此探討胃癌發生、發展的分子機制,探尋與胃癌發展相關的生物學指標對其臨床診治及預測患者預后至關重要。糖類抗原72-4(CA72 -4)、癌胚抗原(CEA)及糖類抗原19-9(CA19-9) 是臨床常用的腫瘤標志物,是包括胃癌在內的多種腫瘤診斷及術后復發監測和預后評估的重要指標[3]。CD4+CD25+調節性T(Treg)細胞是發揮免疫抑制和免疫耐受功能的T淋巴細胞,有研究發現,CD4+CD25+Treg細胞在腫瘤的發生、發展中發揮重要作用,與腫瘤的免疫功能密切相關,其水平升高能夠抑制機體對腫瘤免疫應答,導致腫瘤免疫耐受,因此受到腫瘤研究學者的重視[4-5]。本研究分析了胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9與CD4+CD25+Treg細胞的相關性及臨床意義,探討了其與胃癌發生的關系,以期為胃癌的診治提供借鑒。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2020年1月至2022年12月在西安長安醫院(以下簡稱本院)就診的胃癌患者68例作為胃癌組,另選取同期在本院體檢的健康志愿者50例作為對照組。胃癌組男45例,女23例;平均年齡(55.4±7.8)歲;腫瘤最大徑≥5 cm 39例,<5 cm 29例;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期37例,Ⅲ～Ⅳ期31例;高～中分化41例,低分化27例;淋巴結轉移30例。對照組男27例,女23例;平均年齡(56.3±10.5)歲。納入標準:經胃鏡檢查及術后病理診斷證實為胃癌;檢測前未接受放、化療治療或免疫治療;臨床資料完整。排除標準:合并其他惡性腫瘤;既往有胃癌手術史;合并重要臟器功能障礙、凝血功能異常、血液或免疫系統疾病;合并認知功能障礙。兩組性別、年齡比較,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究所有患者均知情同意,且本研究獲得本院醫學倫理委員會批準(20190012)。

1.2方法

1.2.1檢測血清CA72-4、CEA、CA19-9水平 采集所有研究對象清晨空腹靜脈血5 mL,置于無抗凝劑的真空管中,靜置30 min,1 200 r/min離心15 min,分離血清待測。采用電化學發光法檢測血清CEA、CA72-4 、CA19-9水平。腫瘤標志物陽性界值:CA72-4>6.9 U/mL,CEA>5 ng/mL,CA19-9>37 U/mL。

1.2.2檢測外周血CD4+CD25+Treg細胞的比例 采集所有研究對象清晨空腹靜脈血5mL,采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,使用密度梯度法收集外周血單個核細胞,重新懸浮制成細胞懸液,調整密度為1×106/mL;取細胞懸液1 mL置于試管,1 500 r/min離心10 min,棄上清液。胃癌組分別加入CD4-FITC和CD25-PE抗體各20 μL,對照組加入IgG2a-FITC和IgG2a-PE抗體各20 μL,并將其置于4 ℃環境下孵育30 min,再次離心,采用磷酸鹽緩沖液洗滌2次。采用流式細胞儀進行檢測,在CD4-FITC/CD25-PE雙參圖上計算CD4+CD25+Treg細胞占CD4+T淋巴細胞的百分比。

2 結 果

2.1兩組CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例對比 胃癌組患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4+CD25+Treg細胞比例比對照組高,差異均有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例對比

2.2胃癌組不同臨床資料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例比較 胃癌組TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例比Ⅰ～Ⅱ期患者高,高～中分化程度患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴結轉移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例比淋巴結未轉移患者高,差異均有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 胃癌組不同臨床資料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例比較

2.3胃癌組CA72-4、CEA、CA19-9水平與CD4+CD25+Treg細胞比例的相關性分析 Pearson相關分析結果顯示,胃癌組血清CA72-4、CEA、CA19-9水平與CD4+CD25+Treg細胞比例均呈正相關(r=0.587、0.678、0.696,P<0.05)。

3 討 論

據我國癌癥中心數據表明,胃癌發病率和病死率分別位于惡性腫瘤的第2位和第3位[6]。手術切除是根治胃癌的主要手段,但晚期患者病情進展快、轉移率高,即使積極采取治療措施,患者術后5年的遠期生存率仍不足30%[1]。因此探討胃癌早期診斷的腫瘤標志物及發生、發展分子機制,對提高胃癌患者的生存率具有顯著意義。

腫瘤標志物是指特征性存在于惡性腫瘤細胞或由惡性腫瘤細胞異常增殖產生的物質,包括糖類抗原、激素、酶類等物質,其水平變化在一定程度上可以反映腫瘤負荷情況及惡性進展過程,對腫瘤的診斷、治療及評估復發和轉移具有指導作用[7]。CA72-4、CEA及CA19-9是胃腸道腫瘤監測的常用血清腫瘤標志物,已在胃癌診治及轉移檢測和預后判斷中被廣泛應用。有研究發現,健康人血清中CEA水平極低,腫瘤患者血清中其水平明顯升高,CEA是結直腸癌的特異性標志物[8]。機體內CA19-9水平與腫瘤大小、浸潤及轉移有關,隨著癌細胞的惡性增殖,CEA、CA19-9等腫瘤相關抗原釋放入血液中,使其在血清中的水平升高[9]。CA72-4與胃癌臨床分期及淋巴結受累明顯相關,術前血清CA72-4水平高預示著較高的致死風險,是胃癌中靈敏度和特異度較高的標志物[10]。本研究發現,胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平較對照組明顯升高,差異均有統計學意義(P<0.05)。考慮腫瘤組織的異常分化導致血液中腫瘤組織相關抗原水平異常升高。胃癌組TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比Ⅰ～Ⅱ期患者高,高～中分化程度患者CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴結轉移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比淋巴結未轉移患者高,差異均有統計學意義(P<0.05),這與鐘蘭等[10]研究報道一致。提示隨著疾病的進展,CA72-4、CEA、CA19-9水平升高預示著腫瘤浸潤、侵襲能力更強,患者體內腫瘤負荷增加。

有研究發現,腫瘤的發生與腫瘤細胞本身的免疫逃逸功能有關,腫瘤患者體內往往存在著免疫系統失常,“免疫逃逸機制”是腫瘤的特點之一[11-12]。越來越多的學者也將研究重心放在了腫瘤免疫機制和免疫治療上,期望通過平衡機體免疫系統微環境,增強機體抗腫瘤免疫力,進而殺傷腫瘤細胞,提高腫瘤治療效果。Treg細胞是重要的T淋巴細胞亞群,在機體抗腫瘤免疫中發揮重要作用[4]。CD4+CD25+Treg細胞是近年被人們所認識的一類免疫調節細胞,在機體中主要發揮免疫調節抑制作用,其不僅能夠維持機體自身免疫耐受,還能阻止機體對腫瘤細胞的免疫應答,促進腫瘤細胞發生免疫逃逸,在腫瘤免疫反應及自身免疫性疾病中扮演重要角色[13]。大量研究表明,胃癌、卵巢癌、肺癌等多種腫瘤患者外周血、淋巴結及腫瘤浸潤組織中均存在Treg細胞比例升高的現象[14-15],這提示腫瘤患者體內存在著不同程度的免疫抑制和免疫耐受,Treg細胞比例升高是腫瘤免疫耐受產生的重要機制。本研究結果發現,胃癌組TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的CD4+CD25+Treg細胞比例比Ⅰ～Ⅱ期患者高,淋巴結轉移患者的CD4+CD25+Treg細胞比例比淋巴結未轉移患者高,差異均有統計學意義(P<0.05),與上述研究報道結果一致。有研究表明,腫瘤分期越高的患者外周血Treg細胞比例越高,出現淋巴結轉移者Treg細胞比例高于未轉移者[14]。CD4+CD25+Treg細胞不僅與腫瘤免疫抑制有關,與腫瘤惡性程度也相關,其細胞數量增多往往預示著更高的疾病嚴重程度和較差的預后。提示CD4+CD25+Treg細胞與腫瘤侵襲及淋巴結轉移有關,可在一定程度上作為檢測疾病進展的免疫指標。分析原因可能是CD4+CD25+Treg細胞比例影響機體免疫系統對腫瘤抗原的應答,造成腫瘤細胞免疫逃逸,促進了癌癥的進展,癌癥晚期患者常出現淋巴結轉移,腫瘤細胞增殖較快,機體免疫功能降低,因而Treg細胞比例升高[16]。

此外有研究表明,CD4+CD25+Treg細胞抑制抗腫瘤免疫可促進腫瘤細胞生長,與腫瘤標志物水平明顯相關[17]。李瀅等[18]研究報道,外周血Treg細胞比例與骨髓瘤患者腫瘤負荷及化療療效密切相關,接受化療的初治骨髓瘤患者Treg細胞比例下降與腫瘤負荷減少及治療反應有關。本研究結果顯示,胃癌組血清CA72-4、CEA、CA19-9水平與CD4+CD25+Treg細胞比例均呈正相關(r=0.587、0.678、0.696,P<0.05),提示隨著腫瘤浸潤轉移風險升高,CA72-4、CEA、CA19-9水平逐漸升高,機體免疫抑制作用越強,CD4+CD25+Treg細胞比例隨著機體腫瘤負荷的增大而增高。因此,檢測CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg細胞比例可為胃癌病情檢測及免疫狀態評估提供指導意義。

綜上所述,胃癌組患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4+CD25+Treg細胞比例高于對照組,且存在正相關性,與胃癌的發生、發展及腫瘤浸潤和轉移密切相關。CD4+CD25+Treg細胞比例可隨腫瘤負荷的變化而變化,對胃癌患者病情評估、監測機體免疫狀態及判斷預后具有一定臨床價值。