規(guī)模羊場與散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫抗體水平檢測分析

楊先富，包濤濤，吳通奎，黃功明，袁曉娟，莫興虎，楊勝紅

（黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000）

小反芻獸疫通常又被稱為羊瘟，是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性病毒性傳染性疫病[1]。PPRV 屬于副黏病毒科麻疹病毒，主要感染山羊、綿羊等小反芻動物[2]。感染PPRV 后，羊會出現(xiàn)高熱稽留、眼鼻分泌物增多、口腔黏膜糜爛、腹瀉、肺炎等癥狀，還常常表現(xiàn)出離群獨處、臥地不起、體質(zhì)虛弱、覓食困難、肛門周圍有黑色附著物等[3]。小反芻獸疫主要通過接觸和氣溶膠途徑傳播，一年四季都有可能發(fā)生[4]。該病于1942年在非洲科特迪瓦首次被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)前在我國周邊的阿富汗、印度、巴基斯坦等國家，小反芻獸疫呈流行性發(fā)生。2007 年，小反芻獸疫首次在我國西藏自治區(qū)發(fā)生，2014 年小反芻獸疫在我國新疆、西藏、甘肅、山西等20多個省市零星暴發(fā)，近5年來我國小反芻獸疫呈現(xiàn)出散發(fā)流行趨勢，如2018 年黑龍江省佳木斯市，江蘇省如皋市、海安縣、如東縣，遼寧省調(diào)兵山市，湖南省耒陽市相繼發(fā)生小反芻獸疫疫情。2020 年5月至2021 年5月，全國共報道18 起小反芻獸疫疫情，其中14起涉及地區(qū)包括新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)、青海、西藏及內(nèi)蒙古，其余4起疫情分別發(fā)生在遼寧省清原縣，青海省格爾木市，西藏自治區(qū)堆龍德慶區(qū)、尼木縣、當(dāng)雄縣交界處及青海省都蘭縣國家自然保護(hù)區(qū)[5]。國內(nèi)也有多起野生動物發(fā)生小反芻獸疫的報道，如青海省都蘭縣國家自然保護(hù)區(qū)的野生巖羊，西藏自治區(qū)堆龍德慶區(qū)、尼木縣、當(dāng)雄縣交界處的野生巖羊，新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市和庫車市的鵝喉羚種群等，都曾發(fā)生過小反芻獸疫疫情[6]。

小反芻獸疫在我國被列為一類動物疫病，羊一旦感染PPRV，將很快在羊群中大面積傳播，給養(yǎng)羊業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，防治小反芻獸疫十分重要，而在小反芻獸疫的防控中，疫苗接種是最重要、最常見的防控措施之一[7]。到目前為止，已經(jīng)研究成功的疫苗主要有減毒活疫苗、滅活疫苗、重組疫苗，因此開展小反芻獸疫疫苗免疫，加強(qiáng)對小反芻獸疫疫情的預(yù)防和監(jiān)測，掌握規(guī)模場和散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫疫苗的免疫效果，不僅能有效保障黔東南州羊及羊類產(chǎn)品質(zhì)量安全，有效控制小反芻獸疫的發(fā)生，還能為小反芻獸疫的防控提供重要依據(jù)。基于此，2023 年上半年本團(tuán)隊在貴州省黔東南州的6個規(guī)模羊場和10個散養(yǎng)戶采集羊血清樣品共計742份，進(jìn)行小反芻獸疫抗體檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)將情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 羊血清樣品與檢測試劑

羊血清采集于黔東南州6 個規(guī)模羊場、10 個散養(yǎng)戶，共計742 份（其中規(guī)模羊場360 份、散養(yǎng)戶382份）。小反芻獸疫酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）抗體檢測試劑盒（批號：20221116），由深圳市萊孚生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 免疫抗體檢測與結(jié)果判定

1.2.1 抗體檢測

1）洗滌液配制。用蒸餾水將洗滌液10×（2號液）按1∶10體積稀釋為工作濃度洗滌液。

2）樣品稀釋及加樣。用樣品稀釋液（5 號液）將待檢血清按1∶100體積稀釋，每個樣品孔加100μL。

3）加陰、陽性對照品。陰性對照2孔，每個孔陰性對照品（試劑盒內(nèi)提供）加入100μL；陽性對照2孔，每個孔加陽性對照品（試劑盒內(nèi)提供）100 μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應(yīng)30 min。

4）洗板。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3 次，每次均需停留1 min，最后1 次甩凈，拍干。

5）加酶反應(yīng)。每孔加酶標(biāo)結(jié)合物（1 號液）100μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應(yīng)30 min。后面操作同前述洗板方法。

6）顯色反應(yīng)。按所需用量，臨用前取等體積底物溶液（3號液）和顯色液（4號液）充分混勻，每孔加100μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應(yīng)15 min。

7）終止反應(yīng)。加終止液（6 號液）50 μL，用酶標(biāo)儀于450 nm波長讀取OD值。

1.2.2 有效性判定

陰性對照孔OD450值不應(yīng)大于0.20，否則小反芻獸疫抗體檢測試驗無效；陽性對照孔OD450值不應(yīng)小于0.50，否則小反芻獸疫抗體檢測試驗無效。

1.2.3 檢測結(jié)果判定

S/P值為樣品OD值與陽性對照平均OD值的比值。S/P≥0.20，判斷為小反芻獸疫抗體陽性；S/P＜0.20，判斷為小反芻獸疫抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)測定，陰性對照OD450平均值為0.05，小于0.20；陽性對照OD450平均值為0.89，大于0.50。說明此次小反芻獸疫抗體檢測試驗有效。

2.1 規(guī)模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體合格率

規(guī)模羊場小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果如表1 所示，檢測6 個規(guī)模羊場羊血清360 份，合格數(shù)為291份，平均合格率為80.83%，合格率較高，超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)（70%）；但是不同的規(guī)模羊場抗體水平存在差別，抗體合格率最高的是1 號場，合格率為90.00%；其次是2 號場、3 號場，合格率分別是85.71%、85.24%；再次是5 號場、4 號場，抗體合格率分別是78.18%、77.78%；6 號場抗體合格率最低，僅為67.24%，低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)。

表1 規(guī)模羊場小反芻獸疫免疫抗體檢測情況統(tǒng)計

2.2 散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體合格率

散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果如表2 所示，檢測10個散養(yǎng)戶羊血清382份，合格數(shù)為260份，平均合格率為68.06%，低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)（70%）。但是不同散養(yǎng)戶之間羊小反芻獸疫抗體合格率存在差異，抗體合格率較高的有10 號、8 號、3號，其次是1 號、4 號、6 號，抗體合格率低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定合格標(biāo)準(zhǔn)的有5號、7號、2號、9號。

表2 散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體檢測情況統(tǒng)計

2.3 規(guī)模羊場與散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平比較

規(guī)模羊場與散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平存在明顯差別。從平均合格率來看，規(guī)模羊場抗體平均合格率（80.83%）高于散養(yǎng)戶抗體平均合格率（68.06%）；從抗體合格場（戶）來看，6 個規(guī)模羊場有5 個規(guī)模羊場達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)，占比83.33%，10 戶散養(yǎng)戶只有6 戶達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)，占比60.00%。可見，規(guī)模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體水平明顯高于散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平。

2.4 規(guī)模羊場與散養(yǎng)戶羊小反芻獸免疫抗體S/P 值比較

從表1來看，1號場小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最高，6 號場小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最低；從表2 來看，10 號養(yǎng)殖戶小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最高，9號養(yǎng)殖戶小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P 值最低。由此推斷，小反芻獸疫免疫抗體S/P值與合格率呈正相關(guān)，即小反芻獸疫免疫抗體合格率越高，S/P值越高，疫情風(fēng)險越低，反之疫情風(fēng)險就越高；6 個規(guī)模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體S/P值平均為0.49，10 戶散養(yǎng)戶羊小反芻獸疫抗體S/P值平均為0.32，規(guī)模羊場S/P值明顯高于散養(yǎng)戶。

3 小結(jié)

在正常情況下，小反芻獸疫疫苗免疫1 次，抗體保護(hù)期限為3 年[8]。這次檢測結(jié)果顯示，在黔東南州6個規(guī)模羊場中，僅有1 個規(guī)模羊場小反芻獸疫免疫抗體不合格，占比16.67%；在10戶散養(yǎng)戶中，有4戶小反芻獸疫免疫抗體不合格，占比達(dá)40%。對于羊群小反芻獸疫免疫合格率未達(dá)標(biāo)的情況，經(jīng)過仔細(xì)調(diào)查與分析，歸納出3方面的原因：1）最后一次小反芻獸疫疫苗免疫時間接近或超過3 年，導(dǎo)致羊群抗體水平降低。2）飼養(yǎng)管理不當(dāng)，致使羊群體質(zhì)變?nèi)酰瑢?dǎo)致羊群免疫應(yīng)答能力下降。3）部分養(yǎng)殖戶不按照小反芻獸疫疫苗免疫程序進(jìn)行免疫接種。

為了做好羊群的小反芻獸疫免疫工作，提高小反芻獸疫免疫抗體合格率，杜絕小反芻獸疫的發(fā)生，提出以下建議。1）對于小反芻獸疫免疫抗體未達(dá)標(biāo)的規(guī)模羊場，建議定期開展小反芻獸疫免疫抗體檢測，根據(jù)免疫抗體變化規(guī)律，制訂適合本場的小反芻獸疫疫苗免疫程序。2）對于小反芻獸疫免疫抗體未達(dá)標(biāo)的散養(yǎng)戶，動物防疫部門應(yīng)加強(qiáng)宣傳，或?qū)︷B(yǎng)殖戶進(jìn)行培訓(xùn)，使養(yǎng)殖戶掌握動物疫病防治的基本知識，增強(qiáng)他們的防疫意識，提高養(yǎng)殖戶防疫技術(shù)水平；改善羊群飼養(yǎng)管理條件，提高羊群體質(zhì)；嚴(yán)格按照免疫程序開展小反芻獸疫疫苗免疫，提高羊群免疫力。