類風濕關節炎患者血清CTX-Ⅱ HDAC3水平與免疫功能疾病活動度的相關性

熊 英, 肖 偉, 任 翔, 彭麗娟, 李先耀, 鄒 瑤, 甘海娜, 李麗華

(湖南省常德市第一人民醫院風濕免疫科, 湖南 常德 415000)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種影響著全球0.5～1%人口健康的風濕類疾病,該病通常伴有關節腫脹、壓痛和疼痛,降低患者活動能力和整體生活質量[1]。在RA疾病進展中持續的炎癥反應將造成不可逆的軟骨、滑膜和骨骼退化,最終使整個關節結構變形,使患者關節活動能力喪失和肌肉萎縮[2]。RA還會引起淋巴瘤、心血管疾病、糖尿病、貧血等并發癥,嚴重影響患者身心生活質量[3]。早期識別RA可以在適當治療后緩解臨床癥狀。盡管RA發病機制尚未明確,但以往研究表明免疫功能異常與RA發生發展密切相關[4]。Ⅱ型膠原C端肽(type Ⅱ collagen C-terminal peptide,CTX-Ⅱ)是軟骨代謝標志物,由軟骨組織Ⅱ型膠原降解而來,已有研究證實在RA患者血清中CTX-Ⅱ水平顯著高于健康人群[5]。組蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)屬于I類HDAC,是一種重要的轉錄調節蛋白,參與免疫系統發育、細胞周期調控過程,有研究顯示,HDAC3參與骨關節炎致病過程,其能夠反映骨關節炎嚴重程度[6]。但針對CTX-Ⅱ、HDAC3與RA免疫功能、疾病活動度關系的研究較少。本研究通過檢測RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3表達變化,明確其與免疫功能指標、疾病活動度相關性。

1 資料與方法

1.1研究對象:2020年1月1日～2021年12月31日,選擇本院接診的84例RA患者(RA組)與84例健康體檢者(NC組),兩組間一般資料具有可比性(表1)。納入標準:①RA患者均符合《2018年中國類風濕關節炎診療指南》[7]中標準;②年齡>18周歲;③知情同意書。排除標準:①近期經生物制劑、激素等藥物治療;②骨關節炎、腫瘤、強直性脊柱炎、心腦血管疾病、痛風;③其他自身免疫性疾病;④傳染性疾病或感染性疾病;⑤關節嚴重畸形者。本研究經醫院倫理委員會批準。RA組患者根據28個關節疾病活動(disease activity score in 28 joints,DAS28)評分[8]:評分<2.6分者為緩解期(n=37,緩解組),評分≥2.6分為活動期(n=47,活動組),兩組性別、年齡、病程等一般資料具有可比性(表2)。

表1 RA組與NC組一般資料比較

表2 活動組與緩解組一般資料比較

1.2觀察指標與方法

1.2.1血清CTX-Ⅱ、HDAC3檢測: NC組于體檢當日、RA組于入院次日采集空腹外周血,5000×g離心10min,分離血清,-80℃保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測兩組CTX-Ⅱ(批號:20190516,上海紀寧實業有限公司)、HDAC3(批號:20190123,上海紀寧實業有限公司)水平,檢測過程嚴格按照試劑盒配套說明步驟進行。

1.2.2免疫功能指標及疾病活動度相關指標檢測:兩組患者采血后均送至檢驗科,按照以下方法檢測:使用流式細胞儀(型號:NovoCyte Quanteon,安捷倫)及其配套試劑檢測T淋巴細胞亞群:CD3+、CD4+、CD8+T細胞比例,CD3+T細胞比例正常范圍為60～80%,CD4+T細胞比例正常范圍為35～55%,CD8+T細胞比例正常范圍為20%～30%。全自動生化分析儀(型號:ADVIA?XPT,西門子公司)上采用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgM、IgG,配套試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司,IgA參考值為0.7～3.8g/L,IgM參考值為0.6～2.5g/L,IgG參考值為7.0～17.0g/L。采用雙抗夾心定量法檢測C反應蛋白(C-reactive protein,CRP)水平(批號:20191021,華美生物公司),其正常范圍為0.068～8.2mg/L。采用血細胞自動分析儀以魏氏法檢測血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR),男性正常范圍為0～15mm/h,女性為0～20mm/h。

2 結 果

2.1兩組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平分析:RA組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯高于NC組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 RA組與NC組血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.2RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較:RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較結果顯示,緩解組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯低于活動組(P<0.05)。見表4。

表4 RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.3各組免疫指標水平分析:RA組CD3+、CD4+T細胞比例低于NC組,而CD8+T細胞比例以及IgM、IgA、IgG水平高于NC組(P<0.05)。見表5。與緩解組相比,活動組CD3+、CD4+T細胞比例降低,IgM、IgA、IgG水平升高(P<0.05)。見表6。

表5 RA組與NC組免疫指標水平比較

表6 RA組不同病情程度免疫指標水平比較

2.4RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與免疫功能指標相關性:相關性分析顯示,血清HDAC3與CD3+、CD4+T細胞比例均呈負相關(r值分別為-0.529、-0.464,P<0.05),與IgM、IgA、IgG均呈正相關(r值分別為0.460、0.491、0.445,P<0.05),與CD8+T細胞比例無相關性(r值為0.173,P>0.05);血清CTX-Ⅱ與CD3+、CD4+T、CD8+T細胞比例、IgM、IgA、IgG均無相關性(r值分別為-0.107、-0.182、0.149、0.215、0.178、0.156,P>0.05)。

2.5各組疾病活動度相關指標分析:RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,而活動組患者ESR、CRP水平高于緩解組(P<0.05)。見表7、8。

表7 RA組與NC組疾病活動度相關指標水平比較

表8 RA組不同病情程度患者的疾病活動度相關指標水平比較

2.6RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與疾病活動度的相關性:Pearson分析顯示,RA組患者血清CTX-Ⅱ與ESR、CRP、DAS28評分均呈正相關(r值分別為0.572、0.495、0.809,P<0.05)。血清HDAC3與ESR、CRP、DAS28評分均呈正相關(r值分別為0.540、0.519、0.864,P<0.05)。

3 討 論

ESR與CRP均是評價RA活動期的重要指標,其水平在機體發生炎癥或組織損傷時可在外周血中檢測到明顯上升,且會隨病情輕重而呈現出升降變化[9]。本研究中,RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,活動組患者ESR、CRP水平高于緩解組,與以往研究一致。RA作為一種自身免疫性疾病,免疫功能紊亂與其發病、進展密切相關,研究表明,T細胞(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)均參與RA病理過程[10]。本研究發現,與NC組相比,RA組CD8+T細胞比例、IgM、IgA、IgG水平升高,CD3+、CD4+T細胞比例降低;緩解組CD3+、CD4+T細胞比例高于活動組,而IgM、IgA、IgG水平低于活動組,與王曉亮等[10]和鄒曉軍等[11]研究結果一致,進一步驗證RA發病過程與體液免疫、細胞免疫紊亂有關。因此,探究與RA免疫功能紊亂、疾病活動度相關的分子標志物,對于臨床治療及病情評價極其重要。

血清中CTX-Ⅱ含量是綜合反映關節軟骨損傷累計程度標志物,能夠準確預測關節軟骨受損情況。趙伊婷等[12]認為,膝關節骨性關節炎患者血清、尿液CTX-Ⅱ水平均增加,并與病程、軟骨損傷嚴重程度有關,可考慮用其評估早期膝關節骨性關節炎發生風險。本研究發現與上述研究結果一致,說明CTX-Ⅱ與該病發病和病情進展有關。HDAC是一種通過去除組蛋白乙酰基來調節染色體結構和轉錄因子活性的酶,可以調節多種信號通路,包括核因子κB(nuclearfactor kappa-B,NF-κB),并影響細胞凋亡。張赫等[6]研究發現,HDAC3可以促進軟骨組織中NF-κB介導的炎癥反應,是運動治療骨關節炎的重要靶點。本研究中,RA患者血清HDAC3水平增加,說明HDAC3可能參與RA發病過程。本研究活動組HDAC3水平升高,說明血清HDAC3水平可能參與RA病情的活動、發展過程。進一步研究發現,CTX-Ⅱ、HDAC3均與ESR、CRP、DAS28評分呈正相關,說明二者與疾病活動度密切相關,并對RA患者的病情有一定預測價值。以往研究發現,在免疫系統中,HDAC3對外周T細胞成熟、調節性T細胞發育和功能較為重要[13]。本研究進一步發現,RA組血清HDAC3與CD3+、CD4+、IgM、IgA、IgG存在相關性,提示HDAC3參與RA免疫調節過程,HDAC3水平增加可能導致免疫指標水平升高,同時臨床中對HDAC3有效控制,可在一定程度上抑制RA進展。

綜上所述,RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平升高,HDAC3與RA免疫功能紊亂、疾病活動度密切相關,CTX-Ⅱ僅與RA疾病活動度有關。但本研究所取樣本量較小,且為單中心研究,可能導致結果有所偏倚,有待后續多中心大樣本研究加以驗證;仍未明確CTX-Ⅱ、HDAC3參與RA發生、發展具體調控機制,尚需后續開展基礎研究。