巴迪泰（廣西）C1500 全自動化學發光免疫分析儀檢測血漿D- 二聚體的性能評估

韋嬪（通信作者），梁亞運，陸建偉，李康，莊子檳，李登紅，王洪濤

1 巴迪泰（廣西）生物科技有限公司 （廣西南寧 530031）；2 廣西中醫藥大學第一附屬醫院 （廣西南寧 530022）

D-二聚體臨床主要用于診斷肺栓塞和深靜脈血栓[1-5]，對彌散性血管內凝血（disseminated intr-avascular coagulation，DIC）、惡性腫瘤、腦血管疾病和肝臟疾病等也具有重要診斷意義[6-9]。巴迪泰（廣西）生物科技有限公司采用磁微粒化學發光法檢測血漿中的D-二聚體，16.8 min 即可得到結果，為保證結果的可靠性，本研究使用巴迪泰（廣西）C1500 全自動化學發光免疫分析儀及其配套的試劑和校準品、質控品進行關鍵性能驗證，對精密度、準確度、線性范圍、空白限、抗干擾進行驗證[10-11]，同時與思塔高的STA Compact Max凝血分析儀的臨床樣本檢測結果進行相關性驗證，現報道如下。

1 資料與方法

選取廣西中醫藥大學第一附屬醫院2022 年11—12 月心血管內科的75 例枸櫞酸鈉抗凝血漿樣本為研究對象。采用巴迪泰（廣西）C1500 全自動化學發光免疫分析儀，原裝配套的D-二聚體試劑，D-二聚體質控品，D-二聚體校準品，試劑均在有效期內。思塔高STA Compact Max 凝血分析儀，原裝配套的D-二聚體試劑，試劑均在有效期內。

1.1 方法

采用巴迪泰（廣西）C1500 全自動化學發光免疫分析儀及其配套的試劑和校準品質控品進行精密度、準確度、線性范圍、空白限和抗干擾的評估；同時選取廣西中醫藥大學第一附屬醫院2022 年11—12 月心血管內科的75 例經枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血漿樣本，采用巴迪泰C1500 全自動化學發光免疫分析儀檢測樣本中的D-二聚體，并與思塔高STA Compact Max 凝血分析儀檢測結果進行相關性驗證，具體如下。

1.1.1 批內精密度驗證

根據相關行業標準[10]，取正常和異常濃度水平的質控品，按常規方法重復檢測10 次，計算檢測結果的平均值M和標準差SD，按以下公式計算變異系數（coefficient of variation，CV），若正常和異常質控的CV不大于10.0%，則驗證通過。CV=SD/M×100%式中，SD為10 次測量結果的標準差，M為10 次測量結果的平均值。

1.1.2 準確度驗證

將1 ml D-二聚體人源陰性血漿樣本平均分為3 份，并標記為1 號、2 號、3 號樣本。在2 號樣本中加入0.1 ml 的3.65 μg/ml 的DD 標準液，混勻制備成待回收分析樣本1；在3 號樣本中加入0.1 ml的35.23 μg/ml 的DD 標準液，混勻制備成待回收分析樣本2。在1 號樣本中同樣加入0.1 ml 的無待測物的人源陰性血漿 （廣西中醫藥大學第一附屬醫院）作為基礎樣本。用C1500 全自動化學發光免疫分析儀及配套試劑對待回收分析樣本和基礎樣本分別進行測試，每個樣本測試3 次并計算平均值，然后按以下公式計算回收率，如果回收率為[85.0%，115.0%]，則驗證通過。加入濃度n=標準液濃度n×[標準液加入體積/（樣本體積+標準液體積）]。式1：A=（B-C）/D×100%；其中，A 為回收率n，B 為測定待回收分析樣本濃度均值n，C 為測定基礎樣本濃度均值；D 為加入濃度n。式2：A1=（B1+B2+…+Bn）/C×100%，其中，A1為平均回收率，B 為回收率n，C 為回收率測試樣本總數。

1.1.3 線性范圍驗證

根據相關行業標準和文件[10-11]，取1 份D-二聚體值接近線性范圍上限的血漿作為高值（H）樣本（20.64 μg/ml）和1 份接近線性范圍下限的血漿作為低值（L）樣本（0.11 μg/ml），按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H 和4H 的比例配制5 份標本，將標本按濃度由低到高，再由高到低進行測試，2 次測試結果的平均值即為實測值。按稀釋比例計算各樣本的理論值，再按以下公式對實測值和理論值進行回歸分析，若線性回歸方程的斜率K在1±0.05 范圍內，相關系數r≥0.975，且稀釋后標本實際測試值與其理論值百分偏差≤15%，則驗證通過[10]。

式中X 為測定的濃度均值，Y 為與測定濃度相對應的理論濃度。

1.1.4 空白限驗證

重復測定零濃度校準品20 次，得出20 次測定的相對發光單位（RLU），計算RLU 值的平均值M和標準差SD，得出（M+2SD）對應的RLU 值。同時測定相鄰濃度的校準品（主校準品S1），重復測試3 次，計算3 次測試結果的均值M，先將零濃度與相鄰校準品之間的濃度-RLU 值進行兩點回歸擬合得出一次方程，再將（M+2SD）的RLU 值帶入進行計算，得出對應的濃度，就是空白限的值。

1.1.5 抗干擾驗證

選用線性范圍內的低、高濃度血漿樣本作為基質樣本，各測試3 次，計算平均值；再將其分為4 份，其中3 份分別添加不同濃度的干擾物質（血紅蛋白、膽紅素、三酰甘油）。分別測試3 次，計算平均值。若測定結果均值介于基質樣本 ±10.0%范圍內，則判為無顯著干擾。若測定結果均值超出規定范圍，則判為存在顯著干擾。按以下計算方式計算添加干擾物后測值與未添加樣本測值的偏差。偏差=（加入干擾物結果-未加干擾物樣本結果）/未加干擾物樣本結果×100%。

1.1.6 臨床樣本相關性驗證

隨機選取廣西中醫藥大學第一附屬醫院2022年11—12 月心血管內科的75 例經枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血漿樣本，采用巴迪泰C1500 全自動化學發光免疫分析儀檢測樣本中的D-二聚體水平，并與醫院采用思塔高STA Compact Max 凝血分析儀檢測的結果進行相關性驗證，若r＞0.975，則認為2 種檢測方法相關性較好。

2 結果

2.1 批內精密度驗證結果

正常和異常濃度水平質控品重復性驗證CV分別為4.04 %和2.96 %，驗證通過，性能滿足要求，見表1。

表1 批內精密度驗證結果（μg/ml）

2.2 準確度驗證結果

兩個分析樣本的回收率分別為104.57%和101.10%，平均回收率為102.83%，均在[85.0%，115.0%]范圍內，準確度驗證通過，見表2。

表2 準確度驗證結果（μg/ml）

2.3 線性范圍驗證結果

以理論值為橫坐標，實測值為縱坐標，進行直線回歸分析，D-二聚體水平為0.11～20.64 μg/ml，線性范圍良好，R2=0.9991，r=0.99953，相關方程為y=0.9588x+0.0613，斜率K為0.9588，實測值與理論值的百分偏差均小于15%，故驗證的線性范圍為0.11～20.64 μg/ml，滿足廠家說明書要求，驗證通過，見表3 和圖1。

圖1 線性驗證結果

表3 線性范圍驗證結果

2.4 空白限驗證結果

空白限驗證結果為0.002 μg/ml，符合產品說明書對空白限不高于0.100 μg/ml 的規定，驗證通過，見表4。

表4 空白限驗證結果

2.5 抗干擾驗證結果

高低濃度樣本中膽紅素≤40 mg/dL、血紅蛋白≤150 mg/dL、三酰甘油≤1 000 mg/dL 時，與未添加組的偏差均在±10.0 %范圍內，因此膽紅素≤40 mg/dL、血紅蛋白≤150 mg/dL、三酰甘油≤1 000 mg/dL 對D-二聚體測試結果無顯著干擾，見表5。

2.6 臨床樣本相關性驗證結果

巴迪泰（廣西）D-二聚體檢測試劑盒（磁微?；瘜W發光法）與思塔高D-二聚體定量檢測試劑盒（免疫比濁法）測試75 例枸櫞酸鈉抗凝血漿結果的一元線性回歸方程為y=0.9158x-0.1529，r=0.9925 ＞0.975，2 種檢測方法相關性較好，如圖2 所示。

圖2 兩種檢測方法結果的線性相關圖

3 討論

血液中D-二聚體水平檢測方法包括膠體金免疫滲透法、乳膠凝集法、酶聯免疫法、免疫比濁法、免疫熒光法、化學發光免疫分析法等。膠體金免疫滲透法和膠乳凝集法由于為定性或半定量檢測，結果差異較大，且不適用于大批量檢測，目前已逐漸被淘汰；酶聯免疫法操作復雜且檢測時間較長；免疫熒光法易受本底熒光干擾而精密度不高；免疫比濁法易受黃疸、乳糜等樣本干擾，這些局限性導致這些方法臨床使用受限[12-14]?；瘜W發光免疫分析法靈敏度高、線性范圍寬，可自動化批量分析，已廣泛應用于臨床。

巴迪泰（廣西）采用磁微?；瘜W發光免疫分析夾心法，使用堿性磷酸酶和生物素標記D-二聚體抗體，在與待測標本中的D-二聚體發生反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體的夾心復合物，經清洗液洗滌后，加入AMPPD 底物，AMPPD 底物在堿性磷酸酶的催化下發射光子，產生的光子數量與樣本中D-二聚體水平成正比。通過計算機數據處理系統的RLU 校準曲線，即可計算出樣本中D-二聚體的水平。此測試方法只需10 μl 樣本量且16.8 min 即可出結果，空白限可以達到0.002 μg/ml，線性可達0.11～20.64 μg/ml，重復性驗證的變異系數CV分別為4.04 %和2.96 %。本研究結果顯示，巴迪泰（廣西）C1500 全自動化學發光免疫分析儀檢測血漿D-二聚體的精密度、準確度、線性、空白限驗證均通過；膽紅素≤40 mg/dl、血紅蛋白≤150 mg/dL 和三酰甘油≤1 000 mg/dl 對D-二聚體測試結果無顯著干擾；測試75 例臨床樣本與思塔高STA Compact Max 凝血分析儀檢測結果的相關系數r=0.9925，2 種檢測方法相關性較好。

綜上所述，巴迪泰C1500 全自動化學發光免疫分析儀檢測血漿D-二聚體的性能可達到實驗室質量要求，滿足臨床應用需求。