基于I-FABP的鯽腸道通透性檢測方法的建立

王靖雯，鄒振江，李莉娟,2，顧澤茂,2，袁軍法,2*

基于I-FABP的鯽腸道通透性檢測方法的建立

王靖雯1，鄒振江1，李莉娟1,2，顧澤茂1,2，袁軍法1,2*

(1. 華中農業大學水產學院，武漢 430070；2. 華中農業大學水生動物疫病專業實驗室，武漢 430070)

腸道通透性與腸道穩態及個體健康狀況直接相關，目前尚缺乏魚類腸道通透性的定量評價方法及試劑。血清中腸脂肪酸結合蛋白（intestinal fatty acid binding protein，I-FABP）是腸道通透性的重要血清生物學指標，可用于腸道通透性的定量評價。為建立鯽（）血清I-FABP的定量檢測方法，克隆了鯽I-FABP基因，經原核表達和純化，并利用重組蛋白分別免疫新西蘭白兔（New Zealand white rabbit）及小鼠（），制備了兔源及鼠源多克隆抗體，其效價均為1∶80 000。以純化的兔源多克隆抗體作為包被蛋白，以辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的鼠源多克隆抗體作為酶標抗體，通過優化各反應條件建立了基于鯽I-FABP的雙抗體夾心酶聯免疫檢測方法（double antibody sandwich ELISA，DAS-ELISA）。標準曲線的線性回歸方程為=0.003 5+0.036 7，擬合度較高2為 0.999 1，臨界值為0.090 6。批內及批間變異系數分別為1.17%～5.50%及0.16%～4.78%，具有較好的重復性。以該方法對54份樣品進行檢測，與商業化試劑盒對比，符合率為100%。構建的DAS-ELISA檢測方法可用于鯽腸道通透性的定量評估。鑒于魚類I-FABP的保守性，該方法或可用于其他魚類腸道通透性的定量評價。

腸脂肪酸結合蛋白；腸道通透性；雙抗體夾心ELISA；原核表達；多克隆抗體；鯽

腸道是重要的消化吸收器官，兼具分泌、代謝和免疫等功能[1]。腸黏膜受損、腸道通透性的增加與潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）[2]、克羅恩病（Crohn's disease，CD）[3]等腸道疾病的發生、發展密切相關。……