非小細胞肺癌組織中LINC00707、miR-382-5p表達及其與患者預后的關系

周利君,郭紅榮,王紅娟,方思,徐建群

(武漢市第三醫院/武漢大學附屬同仁醫院 呼吸與危重癥醫學科,湖北 武漢 430074)

肺癌目前是我國發病率及死亡率均較高的惡性腫瘤之一,非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中較常見的病理類型,占肺癌人群的80%～85%[1]。由于NSCLC初期癥狀不具有特異性,大多數NSCLC患者在就醫時已發展為中晚期甚至出現轉移,手術等臨床治療方法無法根治,導致NSCLC患者預后較差,5年生存率不足20%[2-3]。因此尋找與NSCLC患者預后相關的特異性指標,能夠使患者得到及時有效的干預,提高生存率。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是長度大于200個核苷酸、不能編碼蛋白質的RNA,LncRNA在人體各個組織及器官中均有表達,能夠通過相關信號通路參與癌癥發生與發展[4-5]。LncRNA 00707(LINC00707)作為LncRNA家族重要成員,同樣會對惡性腫瘤疾病的發生產生影響,并且有研究表明LINC00707對肺上皮細胞炎癥因子的釋放和凋亡具有調控作用,提示LINC00707可能與肺部疾病發生有關[6]。LncRNA也能夠與微小RNA(miRNA)相互作用,通過控制靶基因的表達,對疾病的發生進行調控[7]。有報道稱miRNA-382-5p(miR-382-5p)在乳腺癌、胃癌等患者體液中均有表達[8]。本研究測定NSCLC患者癌組織中LINC00707和miR-382-5p表達水平,并分析二者與NSCLC患者預后的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取本院2018年2月至2020年2月手術治療的127例NSCLC患者,術中留取NSCLC組織和癌旁組織。患者年齡40～70歲,平均(64.26±6.88)歲,男73例,女54例。納入標準:(1) 患者均行肺活檢及病理檢查,依據《中華醫學會肺癌臨床診療指南(2019版)》[9]中的診斷標準確診為NSCLC;(2) 均為初次確診NSCLC;(3) 未接受過放化療、靶向治療等抗腫瘤治療者;(4) 患者及家屬知情且同意參與本研究。排除標準:(1) 伴有感染性疾病、代謝疾病或免疫系統疾病者;(2) 伴有其他器官的惡性腫瘤者;(3) 合并心、肝、肺等重要器官功能障礙者。本研究經醫院倫理委員會審批,嚴格按照規定程序執行。

1.2 資料收集

收集患者年齡、性別、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、分化程度、組織學類型等臨床資料。

1.3 LINC00707、miR-382-5p表達水平的檢測

取NSCLC患者癌組織及癌旁組織(距癌組織邊緣3 cm以上),于-80 ℃保存待測。取50 mg組織,采用Trizol試劑(美國Invitrogen公司)分離提取組織中的總RNA,用分光光度計(UPT-100,上海尤尼柯儀器有限公司)檢測RNA純度和濃度,采用PrimeScript miRNA cDNA Synthesis反轉錄試劑盒(日本TaKaRa公司)以RNA為模板逆轉錄為cDNA,使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(貨號:Q711-02,日本TaKaRa公司)對cDNA進行定量檢測,檢測儀器為7300型實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司),以GAPDH、U6為內參,使用2-ΔΔCt方法分別計算LINC00707及miR-382-5p的表達水平。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4 隨訪

自NSCLC患者入院起,以電話及門診的方式對其進行為期3年的隨訪,每2個月隨訪1次,以患者出現復發或癌因死亡為隨訪終點,記錄患者3年間的生存狀況。患者隨訪率為100%,生存時間記錄為入院日期至患者死亡時間或最終隨訪截止時間(2023年2月),以此計算NSCLC患者3年生存率。

1.5 統計學處理

采用SPSS 25.0軟件進行數據處理,計數資料以例(n)或百分率(%)表示,采用χ2檢驗,計量資料以表示,組間比較行配對t檢驗;Pearson法分析NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達的相關性;采用Kaplan-Meier法分析LINC00707和miR-382-5p的表達與患者預后的關系;多因素Cox回歸分析影響NSCLC患者預后的相關因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達的比較

NSCLC組織中LINC00707表達水平明顯高于癌旁組織,miR-382-5p表達水平明顯低于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達的比較()

表2 NSCLC組織與癌旁組織LINC00707和miR-382-5p表達的比較()

組 織nLINC00707miR-382-5p癌旁組織1271.03±0.111.06±0.14NSCLC組織1271.41±0.260.72±0.06t值15.16925.896P值<0.001<0.001

2.2 NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達的相關性

Pearson相關分析顯示,NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p的表達水平呈負相關(r=-0.692,P<0.05),見圖1。

圖1 NSCLC組織LINC00707與miR-382-5p表達的相關性

2.3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達與患者臨床病理特征的關系

不同年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤深度、組織學分類的NSCLC患者LINC00707、miR-382-5p表達水平比較,差異均無統計學意義(P>0.05);而TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結發生轉移、分化程度為低分化的患者NSCLC組織中LINC00707呈現高表達水平,miR-382-5p則呈現出低表達水平(P<0.05)。見表3。

表3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達與患者臨床病理特征的關系()

表3 NSCLC組織LINC00707、miR-382-5p表達與患者臨床病理特征的關系()

臨床病理特征nLINC007表達水平t值P值miR-382-5p表達水平t值P值年齡 <60歲481.36±0.220.73±0.08 ≥60791.45±0.291.8500.0670.72±0.060.8010.425性別 男731.39±0.240.73±0.07 女541.45±0.291.2740.2050.71±0.061.6900.094腫瘤直徑 <3 cm691.44±0.240.73±0.08 ≥3 cm581.39±0.211.2370.2180.71±0.061.5690.119TNM分期 Ⅰ+Ⅱ781.28±0.150.77±0.08 Ⅲ+Ⅳ491.62±0.347.728<0.0010.66±0.048.939<0.001淋巴結轉移 否901.31±0.180.76±0.08 是371.67±0.397.128<0.0010.63±0.049.398<0.001浸潤深度 淺層701.39±0.220.73±0.08 深層571.44±0.341.0000.3190.71±0.061.5630.121分化程度 低分化551.59±0.420.65±0.04 中/高分化721.28±0.145.857<0.0010.78±0.0712.315<0.001組織學分類 鱗癌691.39±0.250.73±0.07 腺癌581.44±0.311.0060.3160.71±0.061.7110.090

2.4 LINC00707、miR-382-5p表達與患者預后的關系

采用Kaplan-Meier法分析LINC00707及miR-382-5p表達水平與患者預后的關系,結果顯示,LINC00707低表達患者3年生存率(27/63,42.86%)高于LINC00707高表達患者(18/64,28.13%)(χ2=5.123,P=0.024),miR-382-5p高表達患者3年生存率(28/64,43.75%)高于miR-382-5p低表達患者(17/63,26.98%)(χ2=4.089,P=0.043),見圖2、3。

圖2 NSCLC組織LINC00707表達與患者3年生存率的關系

圖3 NSCLC組織miR-382-5p表達與患者3年生存率的關系

2.5 多因素Cox回歸分析影響NSCLC患者預后的相關因素

以NSCLC患者3年內是否死亡為因變量(賦值:死亡=1,存活=0),以TNM分期(賦值:Ⅲ+Ⅳ=1,Ⅰ+Ⅱ=0)、淋巴結是否轉移(賦值:是=1,否=0)、分化程度(賦值:中/高分化=0,低分化=1)、LINC00707(實測值)、miR-382-5p(實測值)為自變量進行多因素Cox回歸分析,結果顯示,TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、LINC00707、miR-382-5p是NSCLC患者預后的影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 多因素Cox回歸分析NSCLC患者預后的影響因素

3 討 論

肺癌是我國常見的惡性腫瘤之一,根據病理類型可將肺癌分為小細胞肺癌和NSCLC兩大類,其中NSCLC是最為常見的類型[10]。由于NSCLC發病隱匿,患者早期癥狀并不明顯,大多數患者確診時已處于中晚期,錯過了最佳治療時機,導致患者預后較差,生存率較低,給患者及其家庭帶來沉重負擔[11-12],因此尋找與NSCLC密切相關的腫瘤標志物,對NSCLC患者的及早診治具有重要意義。相關研究表明,LncRNA能夠影響腫瘤的發生及轉移過程,其表達水平對腫瘤早期診斷具有一定臨床意義,而miRNA也與肺癌、胃癌等惡性腫瘤疾病發生密切相關[13]。

LncRNA是一類不具備編碼蛋白能力的RNA,能夠通過與蛋白質、RNA等大分子結合調控基因的翻譯、轉錄過程,從而促進相關疾病的發生與發展[14]。有研究表明LncRNA與肺癌、胃癌、肝細胞癌等多種癌癥發生密切相關[15-16],并且Li等[17]報道LncRNA對NSCLC具有較高診斷準確率。在本研究中,NSCLC組織中LINC00707表達水平顯著高于癌旁組織(P<0.05);Chen等[18]的研究結果顯示,肺炎患兒體液LINC00707表達水平相較于對照組升高,表明LINC00707表達水平的升高與肺部疾病發生密切相關,本研究結果與之一致。而對LINC00707表達水平與患者臨床病理特征關系分析結果顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結發生轉移、分化程度為低分化的NSCLC患者癌組織中LINC00707呈現高表達水平,說明LINC00707表達水平的升高不僅能夠促使NSCLC發生,還與NSCLC惡性程度密切相關,可能作為預測NSCLC患者預后狀態的特異性指標。

miRNA是一種內源性非編碼單鏈小分子,國內外大量研究表明,miRNA能夠通過調控其靶基因轉錄與翻譯來影響腫瘤轉移和侵襲過程[19],miR-382-5p屬于miRNA家族中的一員,在口腔鱗狀細胞癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤發生發展過程中起重要作用[20-22],但對NSCLC的影響研究較少。本研究中,NSCLC組織中miR-382-5p表達水平與癌旁組織相比明顯較低(P<0.05),劉博等[23]研究也表明,肺癌患者血清miR-382-5p表達量相較于健康對照組明顯降低,本研究結果與之一致。進一步分析miR-382-5p表達與患者臨床病理特征的關系,結果顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結發生轉移、分化程度為低分化的患者miR-382-5p則呈現出低表達水平(P<0.05),這說明miR-382-5p低表達會促使癌細胞增殖、分化及轉移,促進NSCLC發展。相關性分析結果顯示,NSCLC組織中LINC00707與miR-382-5p的表達水平呈負相關(r=-0.692,P<0.05),說明二者對NSCLC的發生起到相反作用。Chen等[18]的研究結果也顯示,患有肺炎的嬰兒血清中LINC00707水平升高而miR-382-5p水平降低,本研究結果與之一致。采用Kaplan-Meier法分析LINC00707與miR-382-5p表達與患者預后的關系,結果顯示,LINC00707低表達及miR-382-5p高表達患者的3年生存率較高,結合多因素Cox回歸分析結果來看,LINC0070、TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、miR-382-5p是NSCLC患者預后的影響因素,提示應關注上述因素,以便及時對患者采取干預措施,改善預后。

綜上所述,NSCLC組織中LINC00707表達較高,miR-382-5p表達則較低,二者是影響NSCLC患者預后的敏感指標。然而LINC0070及miR-382-5p對NSCLC的具體影響機制還需進一步探究。